变形链球菌表面蛋白可变区(V+)基因克隆与表达

目的 分离变形链球菌表面蛋白可变区 (V +)基因 ,构建V +表达克隆。方法 用PCR从sr基因中扩增目的基因片段V(+) ,亚克隆入中间载体 pCR2 1和表达载体 pET2 1a(+)。对重组体进行诱导表达并对表达产物进行SDS -PAGE和Westernblotting分析。 结果 PCR扩增产物为 1 16kb的DNA带 ,亚克隆入载体 ,获得重组克隆pCVf和重组表达克隆pSRVf,表达产物为 4 3kDa抗原 ,可以被抗Ⅰ /Ⅱ抗体特异性地识别。结论 本试验成功地构建了携带V +基因片段的表达克隆pSRVf。

变形链球菌AgⅠ/Ⅱ蛋白编码可变区(Ⅴ+)基因表达质粒的构建

目的 构建变形链球菌 (S .mutans血清型f、s .mutnas血清型c)表面蛋白编码Ⅴ +基因重组质粒pCVc、pCVf和重组表达质粒pSRVc、pSRVf。 方法 用PCR方法从sr基因中扩增目的基因片段与质粒 pCR2 .1连接 ,再将Ⅴ +区基因片段转移到高效表达质粒pET2 1a(+) ,酶切电泳检测。结果 PCR扩增产物为 1.16kb的DNA带 ,测序结果与sr基因序列Ⅴ +区一致。酶切电泳证实Ⅴ +区基因片段整合到 pET2 1a(+)的适当部位 ,构建重组表达质粒 pSRVc、pSRVf。 结论 本试验成功地构建了携带Ⅴ +基因片段的表达质粒 pSRVc、pSRVf。