可溶性HLA-G1与NK-92细胞表面ILT2及KIR2DL4受体相互作用的研究

目的探讨可溶性HLA-G1(sHLA-G1)对人NK-92细胞杀伤活性的抑制与细胞表面免疫球蛋白样转录分子2(ILT2)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4)受体的关系。方法①通过原核表达技术获得sHLA-G1重组蛋白(重组蛋白),并采用蛋白质印迹法进行鉴定。②取NK-92细胞,加入终浓度20μg/ml的重组蛋白分别培养10、30min,再分别加入抗HLA-G1/G5、抗ILT2和抗KIR2DL4抗体,采用流式细胞术检测各组NK-92细胞表面sHLA-G1和ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率;以NK-92细胞单独培养作为对照组。③以人白血病K562细胞为靶细胞,以经不同方式处理的NK-92细胞为效应细胞,效靶比为5:1,共同培养2h,采用流式细胞术检测NK-92细胞对K562细胞的杀伤率。NK-92细胞处理方式为单纯重组蛋白处理(分别加入终浓度为0、10、20μg/ml的重组蛋白培养30min)和表面受体封闭+重组蛋白处理(分别加入抗ILT2、抗KIR2DL4、抗LT2+抗KIR2DL4抗体培养30min,再分别加入终浓度为0、10、20μg/ml的重组蛋白培养30min)。结果①蛋白质印迹分析表明所获重组蛋白为带有组氨酸标签的特异蛋白。②NK-92细胞与20μg/ml重组蛋白共培养30min后,sHLA-G1表达阳性率明显高于而ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率均明显低于对照组(均P<0.05)。③以终浓度0、10、20μg/ml的重组蛋白处理的NK-92细胞对K562细胞的杀伤率分别为39.79%±2.00%、27.79%±0.75%、21.36%±0.67%(两两比较,均P<0.01);单独封闭ILT2受体,杀伤率分别为23.09%±1.63%、21.13%±0.38%、18.42%±0.47%(两两比较,均P<0.01);单独封闭KIR2DL4受体,杀伤率分别为30.74%±0.44%、26.03%±0.38%、21.15%±0.35%(两两比较,均P<0.01)。结论sHLA-G1通过与NK-92细胞表面ILT2和KIR2DL4受体直接结合而抑制NK-92细胞的杀伤活性。