IGF-I和hCG对大鼠Leydig细胞葡萄糖转运蛋白基因表达调控研究

背景与目的:研究胰岛素样生长因子-I(Insulin-likegrowthfactor-I,IGF-I)和人绒毛膜促性腺激素(humanChorionicGonadotropin,hCG)对成年大鼠Leydig细胞中葡萄糖转运蛋白(Glucosetransporters,GLUTs)基因表达的影响,为进一步探讨Leydig细胞中睾酮的合成与葡萄糖代谢关系提供依据。材料与方法:采用改良的Klinefelter方法从成年大鼠睾丸中分离获得Leydig细胞,并用反转录-聚合酶链技术检测IGF-I和hCG对Leydig细胞中GLUTs基因表达的调控作用。结果:分离得到纯度为98%的Leydig细胞,与空白对照组相比,hCG可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达,并且此作用具有剂量依赖性与时效性。100ng/mlIGF-I可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA表达,并且IGF-I可和hCG协同作用,显著提高GLUT8基因mRNA表达,该结果与100ng/mlIGF-I和10ng/mlhCG协同作用显著增加睾酮合成的结果相吻合。然而,在大鼠Leydig细胞中,无论是10ng/mlhCG或100ng/mlIGF-I单独作用或同时作用于细胞,都不影响GLUT1和GLUT3基因mRNA水平。结论:在成年大鼠Leydig细胞中,IGF-I和hCG对细胞中GLUT8基因表达的调节作用具有特异性,IGF-I和hCG能协同作用显著提高细胞GLUT8基因mRNA水平,从而增强细胞摄取葡萄糖的能力,可为细胞提供更多的代谢能源,最终增加了Leydig细胞睾酮合成与分泌。

IP-10基因过量表达对MA-10小鼠Leydig肿瘤细胞类固醇合成及细胞增殖的影响

背景与目的:研究在体外培养的MA_10小鼠Leydig肿瘤细胞中,IP_10基因的过表达对细胞类固醇合成以及细胞增殖的影响作用。材料与方法:采用细胞转染实验,将含有IP_10基因cDNA的重组质粒转入MA_10小鼠Leydig肿瘤细胞中,用Westernblotting法检测细胞IP_10基因的过表达,用放免分析(Radioimmunoassay,RIA)方法检测IP_10基因过表达对MA_10细胞孕酮合成的影响,用3H_Thymidine掺入DNA合成实验研究IP_10基因过表达对MA_10细胞增殖的作用。结果:实验数据表明,成功地在MA_10细胞中过量表达了IP_10蛋白;MA_10细胞内转染的IP_10基因的过量表达可显著抑制8_bromo_cAMP(0.2mmol/L)诱导的孕酮生成,加入1.0μgIP_10重组质粒转染细胞时,可以使8_bromo_cAMP诱导的孕酮的合成水平由对照组的(38.5±1.7)ng/mL显著降低到(23.2±1.5)ng/ml(1.5×105cells/ml) ,且抑制作用随所用IP_10重组质粒的浓度增加而增加,它的抑制作用可能是通过减少了类固醇合成急性调节蛋白StAR基因的表达而达到的。3H_Thymidine掺入实验结果还显示,IP_10基因在转染的MA_10细胞中过量表达能够显著抑制MA_10细胞的增殖。结论:过量表达的IP_10基因对MA_10小鼠Leydig肿瘤细胞的类固醇合成及生长具有显著的抑制作用,此结果提示我们可以考虑使用转入IP_10基因的?