美洲大蠊提取物逆转人肝癌细胞HepG2/ADM多药耐药的机制研究

目的:研究美洲大蠊提取物脱脂膏及CⅡ-3(分别简称"脱脂膏""CⅡ-3")逆转耐阿霉素(ADM)人肝癌细胞HepG2/ADM多药耐药的作用机制。方法:采用MTT法考察不同质量浓度索拉非尼(阳性对照)、脱脂膏和CⅡ-3对HepG2/ADM细胞的毒性作用,并计算20%抑制浓度(IC20)。试验设置敏感组、耐药组、索拉非尼组、脱脂膏组和CⅡ-3组,敏感组使用HepG2细胞,后4组均使用HepG2/ADM细胞。敏感组和耐药组细胞给予常规培养基,其余3组细胞给予相应药物(浓度均为IC20)。采用激光扫描共聚焦显微技术测定细胞中ADM含量;采用Western blotting法测定细胞中凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、剪切型胱天蛋白酶9 p37(Cleaved-Caspase-9 p37)]的表达水平;分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和免疫细胞化学染色法检测细胞中多药耐药相关基因mRNA及蛋白[P-糖蛋白(P-gp)(MDR1基因表达产物)、肺耐药蛋白(LRP)、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)]和酶介导多药耐药途径中相关基因mRNA及蛋白[谷胱甘肽转移酶(GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)]的表达水平。结果:索拉非尼、脱脂膏、CⅡ-3对HepG2/ADM细胞的IC20分别为(2.40±0.16)、(200.44±27.52)、(18.00±1.82)μg/mL。与敏感组比较,耐药组细胞中Bcl-2、P-gp、LRP、BCRP、TopoⅡ蛋白表达水平以及MDR1、LRP、BCRP、GST-πm RNA表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与耐药组比较,脱脂膏组和CⅡ-3组细胞中ADM含量显著增加(P<0.05或P<0.01),MDR1 m RNA表达水平和LRP、BCRP、GST-πm RNA及其蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);CⅡ-3组细胞中Bcl-2蛋白表达水平、TopoⅡmRNA表达水平均显著降低(P<0.01),Cleaved-Caspase-9 p37蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:脱脂膏、CⅡ-3可通过减少药物外排、促进细胞凋亡、减少多药耐药相关基因和酶介导多药耐药途径中相关基因的mRNA及其蛋白的表达等方式,逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性,且CⅡ-3的效果优于脱脂膏。

美洲大蠊多肽PAE_(2)逆转耐药细胞株多药耐药性的研究

目的:探讨美洲大蠊多肽PAE2逆转人肝细胞癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU多药耐药性的作用及机制。方法:以人肝细胞癌敏感细胞株BEL-7402和人肝细胞癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU为研究对象。采用噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞活力;荧光定量聚合酶链式反应(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫细胞化学染色法检测细胞中谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferase-π,GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(topo-isomerase typeⅡ,TopoⅡ)和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的mRNA和蛋白的相对表达量。结果:美洲大蠊多肽PAE2能有效逆转人肝细胞癌耐药细胞BEL-7402/5-FU的多药耐药性,能下调多药耐药相关酶PKC、GST-π、TopoⅡ的mRNA和蛋白表达水平。结论:PAE2在体外逆转多药耐药的作用机制可能与下调多药耐药相关酶有关。

美洲大蠊多肽PAE2逆转BEL-7402/5-FU细胞多药耐药性的作用及机制研究

本研究探讨了美洲大蠊多肽PAE2逆转人肝细胞肿瘤耐药细胞株BEL-7402/5-FU的多药耐药性作用及机制。以人肝细胞肿瘤敏感细胞株BEL-7402、人肝细胞肿瘤耐5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞株BEL-7402/5-FU和Balb/c-nude小鼠为研究对象,采用噻唑蓝比色分析法检测BEL-7402/5-FU细胞的多药耐药性和交叉耐药性,通过激光共聚焦显微镜观察阿霉素在BEL-7402/5-FU细胞中的累积。使用实时荧光定量聚合酶链式反应和免疫细胞化学染色法检测BEL-7402/5-FU细胞中P-糖蛋白1(P-glycoprotein 1,P-gp1)、多药耐药相关蛋白1(multi-drug resistance protein 1,MRP1)、肺耐药相关蛋白1(lung resistance protein 1,LRP1)以及乳腺癌耐药蛋白1(breast cancer resistance protein 1,BCRP1)的mRNA和蛋白的相对表达量,确定美洲大蠊多肽PAE2逆转多药耐药性的机制。此外,在Balb/c-nude小鼠中,建立BEL-7402/5-FU细胞的腋下移植瘤模型,观察美洲大蠊多肽PAE2对腋下移植瘤小鼠的免疫器官、肝肾功能、肿瘤抑制与诱导肿瘤细胞调亡、调节肿瘤组织多药耐药相关蛋白等环节的影响。结果显示,美洲大蠊多肽PAE2能有效逆转BEL-7402/5-FU细胞的多药耐药性和交叉耐药性,作用机制可能与下调多药耐药相关蛋白的表达水平有关,降低了多药耐药细胞对抗肿瘤药物的外排能力、影响抗肿瘤药物分子代谢,从而达到逆转人肝细胞癌多药耐药的作用。