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嗜酸乳杆菌表达载体的构建及其甘露聚糖酶的表达
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作者 顾斌涛 郭建军 +4 位作者 曾静 聂俊辉 王通 熊大维 袁林 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第1期136-140,共5页
为获得产甘露聚糖酶的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌株,该研究构建甘露聚糖酶表达载体并转化嗜酸乳杆菌,分析重组嗜酸乳杆菌产甘露聚糖酶的酶学性质,并测定重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及甘露聚糖酶的抗蛋白酶活性。结果表明,重... 为获得产甘露聚糖酶的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌株,该研究构建甘露聚糖酶表达载体并转化嗜酸乳杆菌,分析重组嗜酸乳杆菌产甘露聚糖酶的酶学性质,并测定重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及甘露聚糖酶的抗蛋白酶活性。结果表明,重组嗜酸乳杆菌发酵24 h,其所产甘露聚糖酶活性为353 U/m L。甘露聚糖酶的最适催化pH值为5.5,最适催化温度为55℃。重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0~4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为77.3%。甘露聚糖酶液用胃蛋白酶、胰蛋白酶处理160 min后,甘露聚糖酶的相对酶活分别为65%、28%。表明该甘露聚糖酶具有一定的抗胃蛋白酶和部分抗胰蛋白酶降解能力。 展开更多
关键词 甘露聚糖酶 嗜酸乳杆菌 质粒构建 酶学性质
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植酸酶基因在嗜酸乳杆菌中的表达
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作者 顾斌涛 郭建军 +3 位作者 曾静 聂俊辉 王通 袁林 《中国饲料》 北大核心 2024年第7期20-23,41,共5页
植酸酶和嗜酸乳杆菌是重要的饲料添加剂,为获得产植酸酶的嗜酸乳杆菌菌株,克隆了大肠杆菌植酸酶基因,构建表达载体并转化嗜酸乳杆菌,对重组嗜酸乳杆菌进行发酵产酶并测定所产酶液的酶学性质,进一步研究重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及植酸酶... 植酸酶和嗜酸乳杆菌是重要的饲料添加剂,为获得产植酸酶的嗜酸乳杆菌菌株,克隆了大肠杆菌植酸酶基因,构建表达载体并转化嗜酸乳杆菌,对重组嗜酸乳杆菌进行发酵产酶并测定所产酶液的酶学性质,进一步研究重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及植酸酶液的抗蛋白酶活性。结果表明:重组嗜酸乳杆菌发酵24 h植酸酶活性为984 U/mL,植酸酶的最适催化pH为4.5,最适催化温度为60℃。重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0~4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为76.4%。植酸酶液用胃蛋白酶处理160 min后植酸酶液剩余85%的相对酶活,用胰蛋白酶处理160 min后剩余29%的相对酶活。上述研究结果为重组嗜酸乳杆菌后续应用研究提供了重要依据。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 植酸酶 载体构建 乳酸菌 表达
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嗜酸乳杆菌质粒的分析和穿梭载体的构建 被引量:1
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作者 顾斌涛 郭建军 +5 位作者 曾静 聂俊辉 王通 熊大维 魏国汶 袁林 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第13期127-133,共7页
为分析嗜酸乳杆菌内源性质粒pDX,并基于该质粒构建大肠杆菌-嗜酸乳杆菌穿梭载体。本研究从嗜酸乳杆菌XW118中分离获得内源性的质粒pDX,对其进行序列测定及功能分析,然后利用质粒pDX的复制子构建了能在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭的载体,并... 为分析嗜酸乳杆菌内源性质粒pDX,并基于该质粒构建大肠杆菌-嗜酸乳杆菌穿梭载体。本研究从嗜酸乳杆菌XW118中分离获得内源性的质粒pDX,对其进行序列测定及功能分析,然后利用质粒pDX的复制子构建了能在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭的载体,并研究嗜酸乳杆菌的内源性质粒启动子在大肠杆菌中的活性和穿梭载体在乳酸菌中宿主的范围、转化效率和传代稳定性。结果显示嗜酸乳杆菌质粒pDX大小为2062 bp,GC含量为38.2%,包含4个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),推定为滚环复制质粒。质粒pDX在嗜酸乳杆菌中的拷贝数最高为31.05。本研究构建了基于质粒pDX复制子和启动子的大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体。该载体可转化多种类型的乳酸菌,转化效率在0.24×10^(2)~2.75×10^(3)CFU/μg(质粒量)之间,质粒丢失率在25.45%~48.36%之间。本研究通过构建获得能在大肠杆菌-乳酸菌穿梭的载体,并获得了在大肠杆菌中具有活性的乳酸菌内源性质粒的启动子,为乳酸菌基因工程和大肠杆菌代谢工程提供了新的操作途径。 展开更多
关键词 穿梭载体 嗜酸乳杆菌 质粒 乳酸菌 转化效率
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生物发酵饲料对仔猪生长的影响 被引量:1
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作者 聂俊辉 王通 +3 位作者 岳斯源 袁林 曾静 郭建军 《中国饲料》 北大核心 2023年第17期118-123,共6页
本试验探究并分析使用嗜酸乳杆菌、酿酒酵母及丁酸梭菌混合菌剂发酵饲料后的营养成分变化,以及发酵饲料对仔猪生长性能、肠道菌群以及血液代谢物的影响。结果表明:经生物发酵后的饲料中小肽含量上升78.89%(P<0.05),维生素A提高了4.54... 本试验探究并分析使用嗜酸乳杆菌、酿酒酵母及丁酸梭菌混合菌剂发酵饲料后的营养成分变化,以及发酵饲料对仔猪生长性能、肠道菌群以及血液代谢物的影响。结果表明:经生物发酵后的饲料中小肽含量上升78.89%(P<0.05),维生素A提高了4.54 mg/kg(P<0.05);相比于常规饲料,使用发酵饲料喂养仔猪后仔猪平均增重增加了2.62 kg(P<0.05),料肉比降低0.29(P<0.05),腹泻率降低89.91%(P<0.05),仔猪生长性能和健康状态得到改善;经生物发酵饲料喂养后仔猪的肠道菌群中厚壁菌门占比上升,变形菌门占比下降,肠道健康得到改善;对仔猪血液代谢产物进一步分析发现,两组仔猪血液差异代谢产物共71种,其中下调代谢产物10种,上调代谢产物61种。对差异代谢物进行通路分析,差异代谢物主要富集通路为色氨酸代谢、初级胆汁酸合成、苯丙氨酸代谢以及氨基酸合成通路。综上,生物发酵饲料能够调节仔猪肠道菌群和消化吸收功能,有效提高仔猪生长性能和改善仔猪健康状况。 展开更多
关键词 发酵饲料 仔猪 嗜酸乳杆菌 肠道菌群 代谢组
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嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响
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作者 曾静 何础阔 +3 位作者 郭建军 侯安伟 聂俊辉 袁林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第22期113-120,共8页
对嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响。TK-PUL保守基序Ⅱ中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性... 对嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响。TK-PUL保守基序Ⅱ中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度、热稳定性,但使其α-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性均明显降低。动力学常数测定结果显示,突变体I500W以麦芽三糖为底物的k_(cat)/K_(m)值基本不变,以异潘糖为底物的k_(cat)/K_(m)值约为TK-PUL的64.78%。结果表明,TK-PUL保守基序II中第500位氨基酸残基Ile对其水解糖苷键的偏好性起到重要作用。TK-PUL中I500W位点变化不影响其α-1,4-糖苷键水解活性,但使其α-1,6-糖苷键水解活性明显降低。本研究有助于深入理解TK-PUL的双功能催化机制,也可为TK-PUL的分子改造提供理论依据和设计思路。 展开更多
关键词 Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶 保守基序 定点突变 催化活性 同源模建
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抽气负压发酵法对丁酸梭菌生长及芽孢形成的影响 被引量:3
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作者 聂俊辉 王通 +3 位作者 曾静 袁林 郭建军 王振希 《中国饲料》 北大核心 2022年第5期23-27,共5页
针对丁酸梭菌(Clostridium butyricum)培养环境改善和厌氧发酵的需求,本研究通过采用抽气负压发酵法进行厌氧环境的制造和有害代谢物的排除,以提高发酵效率和芽孢转化率。研究结果显示:相比于传统通氮气正压发酵法,抽气负压发酵法能够... 针对丁酸梭菌(Clostridium butyricum)培养环境改善和厌氧发酵的需求,本研究通过采用抽气负压发酵法进行厌氧环境的制造和有害代谢物的排除,以提高发酵效率和芽孢转化率。研究结果显示:相比于传统通氮气正压发酵法,抽气负压发酵法能够创造严格厌氧环境,减少培养环境中甲酸、乙醛、乙醇、丁酸的含量,显著降低有害代谢物及氧气对丁酸梭菌的生长抑制作用。丁酸梭菌菌体浓度达到3.56×10^(9)cfu/mL,芽孢浓度达到3.52×10^(9)cfu/mL,分别较传统通氮气正压法提高了5倍和10倍。本研究为实现丁酸梭菌的高密度发酵提供了有价值的科学指导。 展开更多
关键词 丁酸梭菌 负压发酵 液态发酵 抽气
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Fabrication,microstructures,and properties of copper matrix composites reinforced by molybdenum-coated carbon nanotubes 被引量:12
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作者 nie junhui JIA Chengchang +3 位作者 JIA Xian ZHANG Yafeng SHI Na LI Yi 《Rare Metals》 SCIE EI CAS CSCD 2011年第4期401-407,共7页
Multiwalled carbon nanotubes (CNTs) were coated by a molybdenum layer using carbonyl thermal decomposition process with a precursor of molybdenum hexacarbonyl. The Mo-coated CNTs (Mo-CNTs) were added into copper p... Multiwalled carbon nanotubes (CNTs) were coated by a molybdenum layer using carbonyl thermal decomposition process with a precursor of molybdenum hexacarbonyl. The Mo-coated CNTs (Mo-CNTs) were added into copper powders to fabricate Mo-CNT/Cu composites by means of mechanical milling followed by spark plasma sintering. The Mo-CNTs were uniform dispersion in the Cu matrix when their contents were 2.5 vo1.%-7.5 vol.%, while some Mo-CNT clusters were clearly observed at additions of 10.0 vo1.%-15.0 vol.% Mo-CNTs in the mixture. The mechanical, electrical, and thermal properties of the Mo-CNT/Cu composites were characterized, and the results showed that the tensile strength and hardness were 2.0 and 2.2 times higher than those of CNT-free specimens, respectively. Moreover, the Mo-CNT/Cu composites exhibited an enhanced thermal conductivity but inferior electrical conductivity compared with sintered pure Cu. The uncoated CNT/Cu composites were fabricated by the similar processes, and the measured tensile strength, hardness, thermal conductivity, and electrical conductivity of the CNT/Cu composites were lower than those of the Mo-CNT/Cu composites. 展开更多
关键词 metallic matrix composites mechanical properties ball milling MOLYBDENUM carbon nanotubes
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屎肠球菌自溶的基因表达差异分析
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作者 聂俊辉 郭浩 +3 位作者 王通 郭建军 曾静 袁林 《中国饲料》 北大核心 2022年第23期32-39,共8页
为探讨屎肠球菌自溶状态下基因表达变化,利用高通量测序技术进行RNA-Seq分析。差异基因分析显示,自溶状态下共有783个基因表达出现差异,其中在自溶状态下上调和下调的基因分别为689和94个。GO功能聚类分析显示,差异基因主要富集在细胞... 为探讨屎肠球菌自溶状态下基因表达变化,利用高通量测序技术进行RNA-Seq分析。差异基因分析显示,自溶状态下共有783个基因表达出现差异,其中在自溶状态下上调和下调的基因分别为689和94个。GO功能聚类分析显示,差异基因主要富集在细胞、细胞组分、生物合成、有机物质生物合成几个方面。KEGG富集分析发现,差异基因主要参与了核糖体、氨基酰基-tRNA生物合成、嘌呤代谢、肽聚糖生物合成、嘧啶代谢、同源重组、氨基酸合成等通路,且下调的差异基因主要富集在碳代谢、糖酵解/糖异生、丙酮酸代谢等能量代谢相关通路。说明屎肠球菌自溶状态下代谢出现了明显改变,对碳源的利用不足和合成能力的下降可能是导致屎肠球菌自溶发生的重要原因。通过分析屎肠球菌自溶状态下基因的表达情况,得到了充分的基因数据,为进一步研究屎肠球菌的自溶发生机制提供了基础。 展开更多
关键词 屎肠球菌 自溶 转录组 差异表达基因 GO功能
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Friction and wear properties of copper matrix composites reinforced by tungsten-coated carbon nanotubes 被引量:3
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作者 nie junhui JIA Xian +3 位作者 JIA Chengchang LI Yi ZHANG Yafeng SHI Na 《Rare Metals》 SCIE EI CAS CSCD 2011年第6期657-663,共7页
Carbon nanotubes (CNTs) were coated by tungsten layer using metal organic chemical vapor deposition process with tungsten hexacarbonyl as a precursor. The W-coated CNTs (W-CNTs) were dispersed into Cu powders by m... Carbon nanotubes (CNTs) were coated by tungsten layer using metal organic chemical vapor deposition process with tungsten hexacarbonyl as a precursor. The W-coated CNTs (W-CNTs) were dispersed into Cu powders by magnetic stirring process and then the mixed powders were consolidated by spark plasma sintering to fabricate W-CNTs/Cu composites. The CNTs/Cu composites were fabricated using the similafprocesses. The friction coefficient and mass wear loss of W-CNTs/Cu and CNTs/Cu composites were studied. The results showed that the W-CNT content, interfacial bonding situation, and applied load could influence the friction coefficient and wear loss of W-CNTs/Cu com- posites. When the W-CNT content was 1.0 wt.%, the W-CNTs/Cu composites got the minimum friction coefficient and wear loss, which were decreased by 72.1% and 47.6%, respectively, compared with pure Cu specimen. The friction coefficient and wear loss of W-CNTs/Cu composites were lower than those of CNTs/Cu composites, which was due to that the interracial bonding at (W-CNTs)-Cu interface was better than that at CNTs-Cu interface. The friction coefficient of composites did not vary obviously with increasing applied load, while the wear loss of composites increased significantly with the increase of applied load. 展开更多
关键词 carbon nanotubes tungsten layer COPPER friction coefficient wear loss
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颗粒尺寸对15%SiC_p/2009Al复合材料断裂韧性的影响 被引量:12
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作者 魏少华 聂俊辉 +3 位作者 刘彦强 郝心想 马自力 樊建中 《稀有金属》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期147-152,共6页
采用粉末冶金+挤压工艺制备了含不同粒径SiC颗粒(3.5, 5.0, 10.0和15.0μm)的15%SiCp/2009A1复合材料挤压棒材,利用光学显微镜(OM)、扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)和万能试验机研究了SiC颗粒尺寸对15%SiCp/2009Al复合材料力学性能的影... 采用粉末冶金+挤压工艺制备了含不同粒径SiC颗粒(3.5, 5.0, 10.0和15.0μm)的15%SiCp/2009A1复合材料挤压棒材,利用光学显微镜(OM)、扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)和万能试验机研究了SiC颗粒尺寸对15%SiCp/2009Al复合材料力学性能的影响。结果表明, SiC颗粒尺寸对复合材料强度和韧性的影响效果十分显著。随着SiC颗粒从3.5μm增大至15μm,复合材料的强度逐渐减小,而延伸率则逐渐增大。SiC颗粒尺寸为5.0μm时,复合材料的强度和塑性最佳,抗拉强度(Rm)、屈服强度(Rp0.2)分别为582, 382 MPa,延伸率(A)为10%,断裂韧性(KIC)为33.7 MPa·m1/2。SiC颗粒尺寸为3.5μm时,复合材料的断裂以SiC颗粒周围的铝基体韧性撕裂为主, SiC颗粒尺寸超过5.0μm时,复合材料断裂方式为SiC颗粒周围的铝基体韧性撕裂和SiC颗粒脆性断裂的共同作用,由于SiC-Al界面结合较好,未发现SiC-Al界面脱粘的失效形式。 展开更多
关键词 粉末冶金 SICP/AL复合材料 颗粒尺寸 断裂韧性 断裂机制
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