铁引起的早期PC12细胞nAchRs缺失及抗氧化剂的干预

目的 探讨铁对nAchRs表达的影响机制和可能的干预途径。方法 用Annexin Ⅴ、配体结合、Western印迹、RPA等方法 ,观察铁侵害早期PC1 2细胞损伤机制及抗氧化剂的保护作用。结果 FeSO4 在低浓度 (1～ 1 0 0 μM )引起PC1 2细胞膜脂质过氧化和细胞毒性作用并呈剂量依赖性增加 ,但不引起凋亡和坏死。该浓度范围可降低〔1 2 5I〕α BTX结合位点 ,α3、α7受体亚单位蛋白及α7亚单位mRNA水平 ,但预先用抗氧化剂处理 ,可干预铁对〔1 2 5I〕α BTX和〔3H〕Epibatidine亲和力的影响。结论 铁诱导的脂质过氧化能减少〔1 2 5I〕α BTX结合位点 ,选择性抑制nAchRs亚单位在蛋白质、mRNA水平表达 ,铁对nAchRs的损伤可早于凋亡和坏死的发生 ,可能是AD患者病程早期nAchRs缺失的一个机制。

α_3、α_7-nAChRs缺损AD模型的建立及茶多酚的干预

目的 建立 β -Amyloidpeptides(Aβ)诱导α3 、α7-烟碱型胆碱能受体nAChRs受体亚型缺失AD病理模型 ,探讨Aβ的毒性作用机理 ,并观察茶多酚 (EGCG)的可能干预。方法 纳摩尔Aβ慢性处理PC12细胞建立α3 、α7亚单位缺失细胞模型。用MTT比色法、AnnexinV -FITC、配体结合实验、WesternBlot、RPA法深入探讨Aβ损伤α3 、α7nAChRs亚型的机制以及EGCG的保护作用。结果 用纳摩尔浓度Aβ1-40 和Aβ2 5-3 5能明显降低PC12细胞 [12 5I]α -Bungarotoxin和 [3 H]Epibatidine结合位点数量 ,α3 、α7亚单位蛋白和mRNA水平 ,但不诱导凋亡 ,却明显抑制MTT。而预先加入 10 μMEGCG几乎完全抑制Aβ对 [3 H]epibatidine和 [12 5I]α -BTX的结合力的影响 ,可显著抑制Aβ对α3 、α7nAChRs受体亚单位蛋白的损伤。结论Aβ诱导nAChRs缺损神经细胞模型 ,是目前较理想研究AD的细胞模型 ;

原发老年性痴呆淀粉样β_(25～35)多肽诱导乙酰胆碱能受体缺损的研究

目的:探讨活性肽段Aβ25～35是否可以直接改变神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nAchRs)亚型的表达及其机制。方法:实验于2002/2003在瑞典皇家医学院老年病研究所中心进行。采用配体结合实验以及WesternBlot,RPA法,观察在Aβ25～35侵害早期,PC12细胞损伤机制。结果:用nmol浓度Aβ25～35能明显降低PC12细胞nAchRs结合位点数量,引起α7等亚单位蛋白和mRNA水平不同程度的下降,Aβ25～35(0.1～100nmol/L)作用后,[3H]epibatidine结合力平均显著下降37.4%,Aβ25～35(10～100nmol/L)共同孵育,[125I]α-BTX结合力平均降低为28.2%。α7亚单位随Aβ25～35(1～100nmol/L)呈剂量依赖性递减分别为23.4%,α3亚单位随Aβ25～35(0.1～100nmol/L)呈剂量依赖性递减分别为42.8%。α7亚单位mRNA水平随Aβ25～35(1～100nmol/L)呈浓度依赖性下降分别为33.8%。对照组反转肽段Aβ35～25对PC12细胞nAchRs结合位点,α3,α7,β2亚单位的蛋白和mRNA水平无明显影响。nmol浓度Aβ25～35与nAchRs的特异结合力较弱,但明显抑制细胞活性。结论:在AD病程早期,Aβ可直接引起nAchRs退行性改变;细胞内在信号传导系统的失衡可能是引起nAchRs生物合成降低的原因之一。