人3型腺病毒六邻体基底区重组蛋白的克隆表达和纯化

目的克隆、表达人腺病毒六邻体蛋白基底区片段,为后续研究六邻体蛋白的抗原性及蛋白结构,进而研发腺病毒的基因工程疫苗及诊断试剂奠定基础。方法以3型人腺病毒核酸为模板,用PCR法扩增六邻体基底区片段,将该片段定向克隆至p QE32质粒,在大肠杆菌表达系统中表达带有组氨酸标签的重组蛋白片段,利用镍亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果构建出重组表达质粒,通过测序验证了克隆结果的正确性;在大肠杆菌表达体系中获得了高效表达。结论成功表达并获得了纯化的人3型腺病毒六邻体基底区重组蛋白片段。

临床标本呼吸道病毒感染检测与腺病毒分离鉴定

目的了解哈尔滨地区住院患者呼吸道病毒感染状况及流行趋势,为疾病防治和腺病毒流行监测提供参考。方法采用直接免疫荧光法,检测2017年3月~2018年2月哈尔滨地区住院患者痰液标本呼吸道病毒的感染情况。选择1例腺病毒阳性标本利用空斑实验进行分离纯化,利用PCR扩增六邻体L1区、纤突和E1A区并进行PCR产物序列测定和Blast比对分析鉴定型别。结果七种常见呼吸道病毒检测总体阳性率为14.36%。呼吸道合胞病毒阳性率最高为4.18%,腺病毒阳性率为1.82%。不同季节病毒检测阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。从腺病毒检测阳性标本中分离到一株人腺病毒毒株,进行PCR产物测序和分析,初步鉴定该毒株为人腺病毒3型。结论哈尔滨地区呼吸道病毒感染的病原体主要以呼吸道合胞病毒为主。呼吸道病毒感染流行季节为冬春季节,应加强哈尔滨地区呼吸道病毒流行情况监测。