草生欧文氏菌CSHl065Fib基因定位、克隆及酶切分析

利用Tn5诱导突变,DNA分子杂交及克隆技术发现并证实了草生欧文氏菌Erwinia herbicola CSH1065Fib(Fungiinhibition)基因定位于其180kb质粒上,包含彼此分离的8.3、8.5、8.6和9.5kb EcoRⅠ片段,建立了CSH1065质粒基因组pBR325及pLAFB1基因库,通过DNA酶切分析及亚克隆(Subclone)证实获得了CSH1065部分Fib基因(群)及其物理图谱。

草生欧文氏菌(E.herbicola)CSH1065质粒的重组标记及Fib基因的遗传转移

利用DNA分子克隆技术及遗传重组方法,在E.herbicola CSH1065质粒上插入了Km_R及Mob基因,利用细菌间的接合转移,使E.herbicola CSH1065质粒转移到E.coli HB101中,从而获得了E.herbicola CSH1065的Fib(fungi inhibition)基因在E.coli HB101中的表达,进一步证明E.herbicola CSH1065 Fib基因功能只涉及其细胞内的大质粒,与其染色体基因组无关,其黄色色素基因与Fib功能无关。这些结果还为DNA分子杂交方法所证实。