抗Nef蛋白单抗的制备与鉴定及应用——Ⅰ:应用合成Nef蛋白肽分析抗Nef蛋白单抗的特异性

本文报告了应用杂交瘤技术制备出97个鼠抗HIV重组Nef蛋白的单抗,并应用24个按Nef蛋白氨基酸顺序合成的部分重叠的肽(Over lapping peptides)鉴定其肽特异性以及采用“肽扫描”(Pepscan;Pin ELISA)法进一步研究单抗的抗原表位特异性。文中对合成肽在抗原性分析以及抗蛋白单抗的肽特异性和表位特异性鉴定上的应用与优点进行了讨论。

应用人工合成的HIV nef蛋白肽制备抗nef单抗

本文用人工合成的HIV nef蛋白肽免疫Belb/c小鼠,应用活体融合法制备了11个抗nef单克隆抗体。ELISA测定表明,11个单抗均能与nef肽和nef蛋白反应,其中3、7、9、10和11号抗体与nef肽和nef蛋白的反应性相近似;4、5、6和7号抗体与nef蛋白的反应性明显比肽强。所有单抗均不与HIV的其它蛋白反应。应用免疫荧光检测抗nef单抗与HIV感染细胞的反应性表明,大部分抗体均与细胞浆着色,而无一般膜荧光的典型征象。

HIV-1及其nef蛋白存在有与正常人组织呈交叉反应的表位

本文报导了从大量抗HIV-1结构蛋白单抗和抗nef肽、nef蛋白单抗中发现的HIV-1及其nef蛋白存在有与正常人组织呈交叉反应的表位。这些单抗的特异性为抗HIV-1 p55+p24;抗gp160+gp120+gp41;抗p18+p27;抗nef蛋白(表位为由LHGM组成的四个氨基酸顺序)及抗nef蛋白肽(表位为由HPE或HPEY组成的氨基酸顺序)。它们与正常人扁桃体中的基质、血管内皮或平滑肌起反应。文中对AIDS病人自身免疫反应性进行了讨论。

抗HIV-1单抗的制备,鉴定与经验

本文报导了应用HIV-1病毒裂介物免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备了大量单抗,继用FACS、免疫印染法(Western Blot;WB)、组织切片免疫酶染色法及不同HIV-1 ELISA试剂盒进行单抗特异性鉴定。确定了48个特异性抗HIV-1结构基因表达的蛋白成分的单抗;同时也发现了由于免疫抗原不纯,一般市售HIV-1抗体筛选用ELISA试剂盒及WB试剂盒存在着污染的人细胞成份,故使制备的单抗中很大一部分为抗污染的人细胞蛋白成分的非特异性抗体。