血浆miR-320c、miR-126及miR-34c联合检测对慢性阻塞性肺疾病严重程度的预测价值

目的探讨血浆miRNA水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)严重程度的相关性。方法利用荧光定量PCR(qPCR)检测健康人群(10例)及COPD患者(10例)血浆miRNA的表达水平,筛选与COPD患者密切相关的miRNA。进一步在健康人群(28例)和COPD慢性阻塞性肺疾病全球创议(GOLD)Ⅰ级(30例)、Ⅱ级(32例)、Ⅲ级(30例)及Ⅳ级(28例)患者中明确候选miRNA单独及联合检测对COPD严重程度的预测价值。结果COPD患者血浆miR-320c、miR-126及miR-34c水平显著高于健康人群(P<0.01)。随着COPD级别的增加,血浆miR-320c、miR-126及miR-34c的表达水平亦增加。miR-320c、miR-126、miR-34c单独及联合检测预测中重度COPD患者的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))分别为0.822、0.705、0.783及0.892。结论血浆miR-320c、miR-126及miR-34c可预测COPD严重程度,其联合检测的预测效能显著高于单项miRNA。

利用光谱技术定量研究蛋清溶菌酶结构与功能关系

通过对蛋清溶菌酶(hen egg white lysozyme,HEWL)热处理过程中圆二色谱(CD)和紫外差谱(UV diff.)信号测定,利用蛋白质去折叠二态转变模型,对CD和UV diff.信号进行最小二乘法非线性拟合,定量获取蛋白质稳定性热力学数据.实验结果表明:随pH下降,蛋白质构象稳定性降低.功能性质分析发现:随pH下降,HEWL的酶活性降低,但表面活性(乳化性和乳化稳定性)升高.进一步,将蛋白质构象稳定性(ΔG_(25℃,water))数据和酶活性、乳化性和乳化稳定性数据进行相关性分析发现:蛋白构象稳定性与酶活性、乳化活性和乳化稳定性呈较好的相关性.这些结果说明:蛋白质构象稳定性降低引起蛋白质柔性增加,使其铺展到油水两相界面能力提高.该研究为从分子水平定量研究食品蛋白结构和功能关系奠定了基础.

miR-181a-5p靶向HMGB1调节急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的实验研究

目的探讨miR-181a-5p调控HMGB1的表达在雨蛙素(cerulein)联合脂多糖(lipopolyasccharide,LPS)诱导的严重急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的影响。方法以未处理的AR42J细胞作为正常组,1×10-8 mol/L的cerulein联合10μg/mL的LPS诱导AR42J细胞24 h建立体外严重AP组,用脂质体转染法将miR-NC(空载体)和miR-181a-5p mimic转染至严重AP组作为miR-NC对照组和miR-181a-5p过表达组。采用qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 m RNA的表达水平;Western Blot检测HMGB1和Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-181a-5p和HMGB1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果与正常组相比,严重AP组中miR-181a-5p mRNA表达水平显著下调(P<0.01),HMGB1 mRNA表达水平显著升高(P<0.01),Caspase-3 mRNA表达水平升高(P<0.05),HMGB1、Caspase-3的蛋白表达升高(P<0.05);与miR-NC对照组相比,miR-181a-5p过表达组miR-181a-5p mRNA表达水平显著上调(P<0.01),HMGB1、Caspase-3 mRNA表达水平显著下降(P<0.01),HMGB1、Caspase-3的蛋白表达下降(P<0.05);双荧光素酶报告基因显示miR-181a-5p可抑制野生型HMGB1细胞的荧光活性,miR-181a-5p可靶向调控HMGB1的表达;Pearson相关性分析显示,miR-181a-5p与HMGB1表达水平呈负相关(r=-0.905,P<0.01);miR-181a-5p与Caspase-3表达水平呈负相关(r=-0.809,P<0.01);HMGB1与Caspase-3表达水平呈正相关(r=0.691,P<0.05)。结论miR-181a-5p在cerulein+LPS诱导AR42J细胞中低表达,HMGB1和Caspase-3高表达,过表达miR-181a-5p可抑制凋亡相关基因Caspase-3的表达,其机制可能与靶向HMGB1有关,这将为AP的诊断及治疗提供新的思路。

长链非编码RNA TPTEP1在肺腺癌中的表达及作用研究

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)TPTEP1在肺腺癌中的表达及其作用。方法:收集86对肺腺癌患者的癌组织及癌旁组织样本、33例肺腺癌患者术前及术后的血浆样本,采用qRT-PCR检测TPTEP1在所收集组织、血浆样本及肺腺癌细胞株中的表达量。采用慢病毒过表达TPTEP1在肺腺癌细胞株A549中的表达后,利用CCK-8、Transwell实验评估肺腺癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。结果:肺腺癌组织的TPTEP1表达量与对照组相比明显降低,并且其表达量与肺腺癌的肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移和TNM分期明显相关。肺腺癌患者术后血浆中的TPTEP1表达量较术前出现了明显上升。过表达TPTEP1明显抑制了肺腺癌细胞株的增殖、侵袭和迁移能力。结论:TPTEP1在肺腺癌患者癌组织及术前血浆中的表达量明显降低,并且可以抑制肺腺癌细胞的增殖和转移能力,可能成为肺腺癌诊断治疗可行的潜在靶标。

miR-let-7b-5p对急性胰腺炎AR42J细胞凋亡及自噬的作用研究

目的探讨miR-let-7b-5p对急性胰腺炎AR42J细胞凋亡和自噬的影响。方法以未处理的AR42J细胞作为正常对照组,1×10^(-8) mol/L浓度的雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)24h建立体外急性胰腺炎模型,慢病毒携带miR-let-7b-5p的模拟物(miRNA mimic)、抑制物(miRNA inhibitio)和空病毒转染急性胰腺炎模型细胞作为miR-let-7b-5p过表达组、低表达组和阴性对照组,RT-qPCR验证转染效果,检测凋亡基因Caspase-3 mRNA和自噬基因LC3ⅡmRNA的表达量;Western Blot检测Caspase-3及LC3Ⅱ的蛋白表达。结果与正常对照组相比,阴性对照组的miRlet-7b-5p表达量显著降低(P<0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01),自噬基因LC3ⅡmRNA及蛋白表达增加(P<0.05)。与阴性对照组相比,过表达组miR-let-7b-5p表达量显著增加(P<0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表达均减少(P<0.05),LC3ⅡmRNA及蛋白表达均增加(P<0.05);低表达组miR-let-7b-5p表达量显著降低(P<0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05)、自噬基因LC3ⅡmRNA及蛋白表达均增加(P<0.05)。结论miR-let-7b-5p可调控急性胰腺炎AR42J细胞的凋亡基因Caspase-3和自噬基因LC3Ⅱ的表达,从而影响胰腺细胞的凋亡和自噬。

miR-9-5p通过SIRT1/NF-κB通路促进胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨miR-9-5p通过调控SIRT1及NF-κB表达对胰腺癌细胞(PANC-1)凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法使用miR-9-5p mimic慢病毒转染人胰腺癌PANC-1细胞建立稳转株(mimic组),空载体转染作为阴性对照组(NC组),以未处理的PANC-1细胞作为空白对照组(空白组)。采用qRT-PCR检测PANC-1细胞中miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA的表达水平;Western Blot检测SIRT1、NF-κB通路相关蛋白及Caspase-3蛋白表达量;ELISA检测细胞裂解液中SIRT1及Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-9-5p和SIRT1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果mimic组miR-9-5p mRNA表达较对照组明显升高,结果有统计学意义,提示转染成功。与空白组及NC组相比,mimic组SIRT1 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65上调(P<0.01),Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-9-5p可抑制野生型SIRT1细胞的荧光活性,miR-9-5p可靶向调控SIRT1的表达;Pearson相关分析发现miR-9-5p和SIRT1的表达水平呈负相关(r=-0.849,P<0.05);miR-9-5p和Caspase-3的表达水平呈正相关(r=0.796,P<0.05)。结论过表达miR-9-5p可促进PANC-1细胞凋亡相关基因Caspase-3的表达,其机制可能与靶向调控SIRT1继而调节NF-κB通路有关,这将为胰腺癌的诊断及治疗提供新的思路。

RPS4X在肺腺癌患者中的表达情况及临床意义

目的探讨RPS4X在肺腺癌患者中的表达及其潜在的临床意义。方法从cBioPortal、TCGA数据库分析差异表达基因;收集肺腺癌组织,采用qRT-PCR检测RPS4X的表达水平;结合临床资料论证RPS4X的表达情况、临床意义,并采用Kaplan-Meier曲线分析患者的总生存期,采用Cox模型分析单因素和多因素指标。结果RPS4X在肺腺癌中高表达,且在女性肺腺癌患者中明显高于男性患者。进一步分析发现,与肿瘤大小≤3 cm组比,RPS4X在>3 cm组中呈高表达;与低分化组比,RPS4X在中分化、高分化组中呈低表达;与无淋巴结转移组比,RPS4X在有淋巴结转移组中高表达;高表达RPS4X的肺腺癌患者较低表达RPS4X患者预后差,可作为患者预后的独立预测因素。结论RPS4X在肺腺癌患者中表达显著升高,且与性别、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移有关,可作为诊治肺腺癌潜在的新靶标。

miRNA-125与胰腺癌关系的研究进展

miRNAs(microRNAs)是一种新型非编码RNA分子,能在转录后水平调节基因表达。miRNA参与调控不同的生物过程,在维持细胞稳态、细胞迁移、细胞增殖及凋亡与疾病的发生发展中发挥重要作用。越来越多的研究证明,胰腺癌中异常表达的miRNA-125通过抑制或者上调靶基因的表达,进而影响胰腺癌的发展、侵袭、迁移、增殖及凋亡,有望成为胰腺癌的生物标志物和治疗新靶点。本文就miRNA-125作为胰腺癌诊断标志物及治疗新靶点做一综述。

临床见习教学中高清腔镜手术视频展示应用的作用初探

高清腔镜手术视频是在腔镜基础上发展的手术全程记录技术,其在外科临床本科生的见习教学中的应用值得尝试。高清的手术录像展示可以让见习本科学生更加直观的了解胸心外科中重要的临床结构解剖,熟悉课本中的手术治疗方式,同时还可以很大程度提高临床医学本科生的学习兴趣,从而提高见习质量。本文通过分组见习带教,并且对见习后的学生考核,分析统计其成绩,研究高清腔镜手术视频展示在外科见习教学中的积极作用。

Biocompatibility and in vitro antineoplastic drug-loaded trial of titania nanotubes prepared by anodic oxidation of a pure titanium

TiO2 nanotube (NT) arrays have been prepared by anodic oxidation of a Ti sheet,and carbon-deposited TiO2 NT arrays have been prepared by annealing TiO2 NT arrays in carbon atmosphere. The biocompatibility of the as-prepared NT arrays was investigated by observing the growth of osteosarcoma (MG-63) cells on the NT arrays. The application of the TiO2 NT arrays as a drug delivery vehicle was investigated. Both the TiO2 NTs and the carbon-modified TiO2 NTs have good biocompatibility supporting the normal growth and adhesion of MG-63 cells with no need of extracellular matrix protein coating. The one end-opened TiO2 NTs can be easily filled with drugs,working as an efficient drug delivery vehicle.