基于核磁共振氢谱的组学技术在中药制药过程研究中的应用与展望

中药制药过程工艺复杂,过程控制水平与产品质量直接相关。进行制药过程质量评价与质量控制研究,提高制药过程理解,对保证中药制剂的安全性与有效性具有重要的意义。随着核磁共振技术的发展,核磁共振氢谱已在中药质量评价与代谢组学研究等领域得到广泛应用。本文主要介绍了氢核磁共振组学技术应用于中药炮制、提取等制药过程研究时,在辨识过程化学标志物、研究代谢物在过程中的转化转移规律等方面的应用进展,同时展望了基于氢核磁共振技术的过程组学研究在中药制药领域的应用前景。

Speciation analysis of metals (Tl,Cd and Pb) in Tl-containing pyrite and its cinder from Yunfu Mine,China,by ICP-MS with sequential extraction

The speciation of heavy metals such as thallium,cadmium and lead existing in pyrite and pyrite cinder was analyzed by ICP-MS with a sequential extraction procedure.The distribution patterns of these metals including exchangeable,reducible,oxidizable and residual fractions were obtained.Tl,Cd and Pb in pyrite and pyrite cinder samples from each extraction step were determined by inductively coupled plasma mass spectrometry(ICP-MS).Under the optimized instrumental conditions,detection limits of Tl,Cd and Pb in different matrices were within the range of 0.006-0.07 μg/L,and the relative standard deviations ranged from 0.8% to 1.2%.The accuracy of Tl,Cd and Pb determination was checked by analyzing two certified reference materials.The results demonstrate that trace Tl,Cd and Pb in the samples can be accurately determined.The sequential extraction results revealed that the percent contents of Tl,Cd and Pb in exchangeable,reducible and oxidizable fractions in pyrite cinder are different from those in pyrite and in pyrite cinder.Tl,Cd and Pb mostly are distributed in residual fraction.Therefore,the mobility of metals in pyrite is higher than that in pyrite cinder.Although distributions of Tl,Cd and Pb in the non-residual fraction are not dominant in pyrite cinder,the total concentrations of them could not be ignored.Consequently,attention must be paid to the risk of potential pollution by pyrite cinder.

^(1)H-NMR定量测定黄芪注射液中亲水性成分和疏水性成分

目的建立黄芪注射液中亲水性成分和疏水性成分的^(1)H-NMR定量分析方法。方法以10%氘代水(10%D2O)和氘代甲醇(CD3OD)为氘代溶剂制备黄芪注射液亲水性成分和疏水性成分的^(1)H-NMR样品。使用Bruker Avance Ⅲ 600型核磁共振波谱仪采集^(1)H-NMR图谱,具体实验参数如下:Noesygppr1D脉冲序列;温度为298 K,数据点32 K,采集时间(AQ)为2.980 s,脉冲宽度(SW)为7211.54 Hz,弛豫延迟时间(D1)分别为15.0 s和20.0 s,频率偏移(O1)分别为2816.65 Hz和2930.31 Hz,接收器增益(RG)值为57,扫描次数(NS)32次。结果在^(1)H-NMR图谱中归属出33种成分,分别是异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、乳酸、焦谷氨酸、天冬酰胺、γ-氨基丁酸、脯氨酸、甲酸、乙酸、富马酸、苹果酸、琥珀酸、丙二酸、蔗糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、胆碱、甜菜碱、葫芦巴碱、尿苷、腺苷、胞苷、鸟苷、腺嘌呤、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-葡萄糖苷以及异黄烷苷。对其中27种化学成分(异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、乳酸、焦谷氨酸、天冬酰胺、γ-氨基丁酸、脯氨酸、甲酸、乙酸、富马酸、苹果酸、琥珀酸、丙二酸、蔗糖、果糖、葡萄糖、胆碱、甜菜碱、葫芦巴碱、尿苷、腺苷、鸟苷、腺嘌呤、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷)进行定量,可定量的成分占注射液固含量90%以上。该方法的精密度、重复性、样品稳定性和耐用性良好,各个成分线性关系良好,r 2大于0.9990,加样回收回收率为98.19%~101.40%。结论建立了一种简单、快速、可靠的^(1)H-NMR定量方法用于测定黄芪注射液中的亲水性成分和疏水性成分,为黄芪注射液的质量评价提供了新的分析手段。

同时测定复方阿胶浆中间体中17种化学成分的定量核磁方法

目的建立定量核磁方法,同时测定复方阿胶浆(Compound E’jiao Jiang,CEJ)的药材提取液中多类成分的含量,为中间体的质量评价提供可靠的分析手段。方法采用水信号预饱和脉冲序列Noesygppr1d采集样品的1H-NMR图谱。通过文献调研、数据库检索以及加标实验的方式进行核磁谱峰归属。进一步确定各化合物的定量峰,采用内标法定量。开展方法学考察,考察项包括线性、精密度、稳定性、重复性、耐用性、准确度。另基于核磁共振氢谱的信噪比确定方法的检测限和定量限,并对3批中间体样本进行分析。结果共指认22种化合物,其中17种可同时定量分析,包括缬氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、焦谷氨酸、γ-氨基丁酸5种氨基酸,乙酸根、富马酸根、丙酮酸根、琥珀酸根、甲酸根、乳酸6种小分子有机酸根,葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖4种糖类以及尿苷、胆碱。线性考察结果得出相关系数均不小于0.9995,精密度考察结果显示,RSD均小于2.7%,重复性考察RSD均小于2.5%,耐用性及稳定性考察RSD均小于2.6%,加样回收实验得出平均回收率为90.0%~105.0%、RSD小于2.2%,分析值与参考值平均相对偏差小于4.0%。对3批样品进行定量分析,17种成分的测定结果均高于定量限,且满足线性范围。3批样品可定量部分占总固体含量的质量分数分别为71.09%、84.44%、70.09%。结论各方法学考察均满足要求;研究开发的定量核磁方法检测时间短、制样方式简单,能有效提高分析效率,为CEJ的生产过程物质转移规律研究打下基础。

恤彤注射液中间体丹参提取液的指纹图谱分析及多指标含量测定

目的建立恤彤注射液中间体丹参提取液的HPLC-UV指纹图谱,并对其中的5-羟甲基糠醛、丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸A及丹酚酸B共7种指标成分进行定量分析。方法采用Waters Cortecs C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.7μm),流动相0.4%甲酸水溶液(A)-0.4%甲酸乙腈(B),流速0.8 mL·min^-1,梯度线性程序洗脱,进样量3μL,柱温25℃,检测波长280 nm。结果在建立的色谱条件下,指纹图谱峰型对称,分离度较好,能较全面地反映丹参提取液的化学信息。共确定了24个共有峰,10批丹参提取液的指纹图谱相似度均>0.960;在一定质量范围内,7种指标成分的峰面积与质量浓度均呈良好的线性关系,加样回收率为96.49%~100.18%,RSD为1.24%~2.27%(n=9),所测定的7种指标成分总量为8202.2~12078.7mg·g^-1。结论建立的分析方法准确、简单、重复性好,HPLC-UV指纹图谱结合定量测定能更全面地反映丹参提取液的质量,可用于恤彤注射液中间体丹参提取液的质量评价。

HPLC-ELSD同时测定丹参川芎嗪注射液中间体中7种糖类成分

目的建立同时测定丹参川芎嗪注射液中间体中果糖、葡萄糖、蔗糖、蜜二糖、棉子糖、甘露三糖和水苏糖7种糖类成分的HPLC-ELSD方法,并研究丹参川芎嗪注射液生产过程中糖类成分的变化规律。方法采用Prevail Carbohydrate ES色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,柱温为25℃,进样量为5μL,流速为0.6 mL·min^(-1),ELSD检测器雾化器温度为70℃,漂移管温度为60℃,氮气流量1.0 L·min^(-1)。结果7种糖类成分在定量范围内线性关系良好,R2均>0.9980,进样、日内、日间和中间精密度RSD值均<5%,供试品溶液在10 h内稳定,低、中、高浓度平均加样回收率为97.00%~104.34%。结论建立的分析方法稳定、准确、重复性好,可用于丹参川芎嗪注射液中间体中7种糖类成分含量测定。本研究推进了丹参川芎嗪注射液安全性再评价质量控制研究,也为其他中药制剂中糖类成分的定量、转移、转化规律研究提供了参考。