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一种新型无钩豆状囊尾蚴的鉴定和18S DNA序列分析 被引量:1
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作者 潘耀谦 孔令芸 +3 位作者 李鹏 岳峰 吴玉平 刘兴友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2283-2289,共7页
旨在鉴别无钩豆状囊尾蚴与有钩豆状囊尾蚴的区别。用扫描电镜对自然感染的豆状囊尾蚴头节进行超微结构观察,对其18S DNA进行PCR扩增和序列分析,并与其他动物的囊尾蚴作了进化树比较。结果显示:超微结构观察无钩和有钩豆状囊尾蚴的主要... 旨在鉴别无钩豆状囊尾蚴与有钩豆状囊尾蚴的区别。用扫描电镜对自然感染的豆状囊尾蚴头节进行超微结构观察,对其18S DNA进行PCR扩增和序列分析,并与其他动物的囊尾蚴作了进化树比较。结果显示:超微结构观察无钩和有钩豆状囊尾蚴的主要区别位于顶突,而吸盘和原始体节的结构是相同的。从囊泡中取出的豆状囊尾蚴多处于相对静止状态。无钩豆状囊尾蚴的顶突如同数层圆饼叠放在一起,表面比较平坦,中央有一个较大的结节,结节的直径约为20μm,周边有数层齿轮状花纹,形成重合式齿轮状构造。有钩豆状囊尾蚴顶突的前端比较钝,通过皮肌柱与形似鸡爪样的小钩相连。小钩表面光滑,富有光泽,具有坚硬的外观,长120~150μm。通过用18S-P1和18S-P2引物对无钩和有钩豆状囊尾蚴的目的基因、感受态细胞的培养液和菌体质粒的PCR检测,均获得相同的目的基因条带。测序结果表明18S-P1引物扩增的无钩豆状囊尾蚴与有钩豆状囊尾蚴750 bp序列的差别比18S-P2引物扩增的666 bp序列的区别明显。与其他动物囊尾蚴相关序列的进化比较显示,无钩豆状囊尾蚴与牛囊尾蚴有亲缘性,而有钩豆状囊尾蚴则与猪囊尾蚴有亲缘关系。总之,无钩和有钩豆状囊尾蚴虽然同属豆状囊尾蚴,但无钩豆状囊尾蚴是一种新发现的豆状囊尾蚴。 展开更多
关键词 无钩豆状囊尾蚴 有钩豆状囊尾蚴 18S脱氧核糖核酸 序列分析 进化树
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Two New Identification Methods for Encephalitozoon cuniculi on Tissue Section
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作者 pan yaoqian Li Ruizhen +3 位作者 Song Gaojie Zhang Zhonghua Quan Suopei Fu Yanfang 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2016年第2期75-78,共4页
[ Objective] The paper aimed to search new identification methods of Encephalitozoon cuniculi on tissue sections. [ Method] Using improved Gram staining method and methyl green pyronin staining method, the pathologica... [ Objective] The paper aimed to search new identification methods of Encephalitozoon cuniculi on tissue sections. [ Method] Using improved Gram staining method and methyl green pyronin staining method, the pathological sections of sick rabbits were stained and identified. [ Result] The pathological changes in brain tissue could be clearly observed on sections, but parasites were not examined in pathological brain tissues stained by common staining method. When the pathological section was stained by improved Gram staining method, the pathological changes in brain tissue were not ouly stained very clearly, but blue parasites were also found in brain tissues. The parasites in epithelioid cells were stained into purple ones by methyl green pyronin staining method. [ Conclusion] The im- proved Gram staining method and methyl green pyronin staining method performed good staining effects of E. cuniculi in pathological sections, which were conducive to rapid diagnosis of encephalitozoonosis in rabbit. 展开更多
关键词 Encephalitozoon cuniculi Improved Gram staining method Methyl green pyronin staining method Pathological tissue section
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具核梭杆菌体外对小鼠巨噬细胞超微形态和机能的影响
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作者 张艳芳 李鹏 +2 位作者 刘金宵 潘耀谦 刘兴友 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期285-293,共9页
本研究对具核梭杆菌(F.nucleatum)感染鼠巨噬细胞进行共同培养之后,分别在10个时段采取上清液和巨噬细胞,用ELISA、qRT-PCR法和扫描电镜检测TNF-α、 IL-1α、 IL-6和IL-8细胞因子,并观察巨噬细胞的超微形态变化。结果显示,4种细胞因子... 本研究对具核梭杆菌(F.nucleatum)感染鼠巨噬细胞进行共同培养之后,分别在10个时段采取上清液和巨噬细胞,用ELISA、qRT-PCR法和扫描电镜检测TNF-α、 IL-1α、 IL-6和IL-8细胞因子,并观察巨噬细胞的超微形态变化。结果显示,4种细胞因子均有高水平表达;IL-8在共培养6~72 h呈高水平表达;IL-6和TNF-α表达水平也较高;IL-1从3 h表达,12 h达最高值,48 h后无表达。qRT-PCR检测结果显示,TNF-α的RNA表达呈波浪式,分别于6,60 h各出现1个高峰值;IL-1α和IL-6呈现正态表达,从3 h开始明显表达至60 h达峰值,此后缓慢下降;IL-8从6 h逐渐上升,至72 h仍呈高水平表达。超微形态观察显示,在F.nucleatum感染的前24 h,巨噬细胞呈收缩状,其表面和周围有大量发育良好F.nucleatum,并呈团块状黏附,巨噬细胞逐渐伸出伪足。30 h后F.nucleatum逐渐发育不良,小而细,而巨噬细胞表面粗糙,有许多大小不一的结节,伪足变粗大。48 h巨噬细胞表面出现胞吐孔,少量细小的F.nucleatum仍然黏附于巨噬细胞伪足。此后,发现少量巨噬细胞凋亡。结果表明,F.nucleatum可诱导巨噬细胞产生大量炎性细胞因子,并能长时间与巨噬细胞共生;巨噬细胞能够吞噬F.nucleatum,其胞吐作用可传递F.nucleatum抗原信息。 展开更多
关键词 具核梭杆菌 鼠巨噬细胞 炎性细胞因子 超微结构性
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兔脑炎原虫性脑肉芽肿形成与PI3K/AKT信号通路的关系
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作者 潘耀谦 李瑞珍 +7 位作者 郭东光 李雪华 李鹏 岳峰 张艳芳 刘金宵 王选年 刘兴友 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1450-1456,共7页
为了研究兔脑炎原虫性脑肉芽肿形成与PI3K/AKT信号通路的关系,对患脑炎原虫病兔和正常对照兔的脑组织进行了组织切片和特异性蛋白提取,并用普通染色、特殊染色、免疫组织化学技术和Western blot技术分别对脑炎原虫性脑肉芽肿病变进行了... 为了研究兔脑炎原虫性脑肉芽肿形成与PI3K/AKT信号通路的关系,对患脑炎原虫病兔和正常对照兔的脑组织进行了组织切片和特异性蛋白提取,并用普通染色、特殊染色、免疫组织化学技术和Western blot技术分别对脑炎原虫性脑肉芽肿病变进行了观察;对病兔和对照兔脑组织内与PI3K/AKT信号通路中血管内皮生长因子(VEGF)、磷脂酰肌醇3激酶的调节亚单位P85(P85)、催化亚单位P110(P110)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)等关键性蛋白的表达丰度进行了检测。结果显示,病兔的脑组织中均有不同形态的脑肉芽肿形成和非化脓性脑炎变化;免疫组化染色显示,VEGF、P85、P110、AKT和p-AKT的表达在组成肉芽肿中的巨噬细胞、上皮样细胞、星形胶质细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞中明显增高,呈强阳性反应;Western blot检测结果显示,病兔脑组织中的VEGF、P85、P110、AKT和p-AKT等信号通路关键蛋白表达丰度明显高于健康兔,差异极显著。结果表明,PI3K/AKT信号通路在兔脑炎原虫性脑肉芽肿形成的形成过程起到重要作用;正是由于PI3K/AKT信号通路的激活才有效地促进了脑肉芽肿中各种细胞的增殖。 展开更多
关键词 兔脑炎原虫 脑肉芽肿 PI3K/AKT信号通路 星形胶质细胞 血管内皮细胞
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