基于FⅧ探讨不同脱盐方式的效果及对其成分的影响

目的基于人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)比较5种脱盐方法的脱盐效果及对FⅧ成分的影响,为蛋白脱盐方式提供参考。方法分别用Sephadex G-25 Medium凝胶、Fractogel EMD BioSEC凝胶、超滤、室温透析和4℃透析5种方法对人FⅧ进行脱盐处理。通过Na^(+)、柠檬酸根离子、甘氨酸去除率评估脱盐效果。通过脱盐前后FⅧ蛋白回收率、FⅧ活性(coagulation factorⅧactivity,FⅧ∶C)、VWF抗原(VWF antigen,VWF∶Ag)、VWF活性(VWF activity,VWF∶Ac)、VWF多聚体及SDS-PAGE分析,评估其对FⅧ成分的影响。结果在脱盐效果方面:Na+在超滤脱盐时去除率最低,为(97.90±0.06)%,Fractogel EMD BioSEC凝胶脱盐去除率最高,为(99.82±0.07)%。除Sephadex G-25 Medium凝胶脱盐与Fractoge EMD BioSEC凝胶脱盐间Na^(+)去除率无统计学意义(P=0.90)外,其他4种方法间Na+去除率存在统计学意义。甘氨酸在超滤脱盐时去除率最低,为(95.78±0.42)%,Fractogel EMD BioSEC凝胶脱盐去除率最高,为(99.81±0.08)%。除超滤脱盐外,其他4种脱盐方法间甘氨酸去除率无统计学意义。柠檬酸根离子在5种方法间去除率均无统计学意义(P=0.85)。对于FⅧ成分的影响方面:超滤脱盐FⅧ∶C、VWF∶Ag、VWF∶Ac及蛋白回收率最高,分别为(18.34±1.99)IU/mL、(11.81±0.33)IU/mL、(12.26±0.58)IU/mL、(97.13±1.37)%。5种方法脱盐前后VWF∶Ac/VWF∶Ag无明显变化。SDS-PAGE及VWF多聚体分析表明,不同脱盐方法对蛋白组成种类影响不明显。结论尽管不同方式脱盐对FⅧ蛋白组成种类无明显影响,但脱盐效果存在差异,不同方式脱盐对蛋白回收率、FⅧ∶C、VWF∶Ag及VWF∶Ac影响显著。蛋白处理过程中,对于脱盐方式的选择应给予足够重视。

不同β-淀粉样蛋白抗体含量的IVIG对阿尔茨海默病模型小鼠认知功能干预效果初探

目的 探讨市售不同β-淀粉样蛋白(Aβ)抗体含量的静注免疫球蛋白(IVIG)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠认知功能的干预效果。方法 选取市售的国内8个不同血液制品公司的IVIG(IVIG1~8),酶联免疫吸附(ELISA)法检测其Aβ_(40/42)抗体含量后,按高、中、低分为3种Aβ_(42/40)抗体水平的IVIG做动物干预实验:将40只3月龄三转基因AD(3xTg-AD)小鼠随机均分为4组,雌雄各半,实验组(实验组1~3)分别腹腔注射高、中、低3种Aβ_(42/40)抗体水平IVIG(1 g·kg^(-1)剂量、2次/周,持续12周),对照组等量生理盐水腹腔注射。注射24次后立即利用小鼠行为学分析系统对4组小鼠做认知行为学检测及分析。结果 8种国内不同厂家生产的IVIG Aβ抗体含量(μg/mL)差异较大,Aβ_(40)单体抗体为0.7±0.05~3.1±0.05、Aβ_(40)寡聚体抗体为11.7±0.7~32.0±2.2、Aβ_(42)单体抗体为1.8±0.1~27.9±0.3、Aβ_(42)寡聚体抗体为2.3±0.1~49.4±2。从高、中、低Aβ_(42/40)抗体水平的IVIG中各选择1种(IVIG-1、IVIG-8、IVIG-6)分别注射给3个实验组小鼠;不同IVIG干预后实验组1~3组与对照组小鼠认知行为检测分析:旷场试验中进入中心区域时间(s)分别为0.5±0.9、23.4±6.1(P<0.01)、4.6±2.8、2.6±2.3,粪便数量(粒)分别为1.6±0.7、1.2±0.4、2.4±0.5、3.8±0.8(P<0.01);新物体识别试验:探索新物体分值分别为71.3±29.5、71.8±20.5、75.9±26.9、25.6±23.7(P<0.05);巴恩斯迷宫试验:实验组2与对照组小鼠探索目标洞时间(min)在d6为(50.3±19.3 vs 21±14.6(P<0.05)、d13为58.2±20.9 vs 19.2±15.9(P<0.05),其他各实验组与对照组相比无明显变化。结论 目前市售的产自国内的IVIG制品的Aβ_(40)/_(42)抗体水平存在明显差异;3月龄3xTg-AD小鼠经过其连续干预3个月后,认知功能均有所改善,改善效果与IVIG中Aβ抗体有关,但与抗体浓度不呈正相关。

基于APP/PS1双转基因小鼠初探输血传播阿尔茨海默症的风险

目的初探输血传播阿尔茨海默病(alzheimer disease,AD)的风险。方法3、6、9月龄APP/PS1小鼠各10只,雌雄各半,认知行为学能力测定,同龄C57小鼠作对照;采集上述尚未出现行为学改变的最大月龄APP/PS1小鼠血液,检测Aβ_(40)、Aβ_(42)含量后备用。制备Aβ_(40)、Aβ_(42)聚合物,免疫印迹分析后备用。6~7月龄昆明小鼠随机分为6组(10只/组,雌雄各半),实验组1~2尾静脉注射APP/PS1小鼠血液(100μL/只),1组为高频次注射(3次/周),2组为低频次注射(1次/周);实验组3~4注射Aβ_(40)、Aβ_(42)聚合后混合物(100μL/只),分别为高、低频次注射,具体同上;对照组1~2注射等量生理盐水,分别为高、低频次注射。上述组别注射均持续4周,注射完毕1周后进行认知行为学能力检测及分析,最后检测昆明小鼠血液Aβ_(40)、Aβ_(42)含量。结果3、6月龄APP/PS1小鼠未出现认知行为能力改变,9月龄APP/PS1小鼠出现认知行为能力改变。6~7月龄APP/PS1小鼠血液中Aβ_(40)、Aβ_(42)含量(pg/mL)分别为418.40±2.18、15.68±0.20。所制备Aβ_(40)、Aβ_(42)聚合后混合物除单体外,多为二、三聚体。无论是高频,还是低频,输注APP/PS1小鼠血液的昆明小鼠(实验组1~2)与对照组相比,在旷场试验和条件恐惧试验中出现一定焦虑样行为和短期记忆缩短,但无显著差异;其它实验组(实验组3~4)与对照组相比,在旷场试验、新物体识别、巴恩斯迷宫、条件恐惧认知行为学分析中无明显区别。ELISA检测所有实验及对照组的昆明小鼠血液Aβ_(40)、Aβ_(42)含量(pg/mL)为10.30±0.08、3.360±0.005,组间差异不明显。结论输注APP/PS1小鼠血液及Aβ_(40)、Aβ_(42)聚合后混合物对健康昆明小鼠认知功能在短期内无明显影响,AD传播风险较小。

Detection and Response Mechanism of CN Using Ag_(2)S Coated Piezoelectric Crystal Sensor

A new method of determination of trace CNin water was proposed.A thin film of AgS was electrochemically deposited on both sides of a silver coated piezoelectric crystal.The AgS Ag films can react with CN selectively,which causes the frequency shifts of the piezoelectric crystal.The frequency shifts are proportional to the concentration of CN in the range of 106~10'g/L.XPS experiments indicated the sensing film was AgiS Ag.A coordination complex Ag-CNwas formed when AgiS Ag film contacted with solution containing CNion.A response mechanism was proposed based on the XPS data.