耐药淋球菌差异DNA消减文库的构建

为克隆和研究淋球菌耐药相关基因,分别从耐药性淋球菌菌株RSM292C4和WHO标准参考淋球菌株WHO-A细胞中提取DNA,用Rsa 酶切成400～600bp的片段。将酶切耐药菌株基因DNA片段分别与不同的接头连接,再与标准参考菌株DNA进行消减杂交及抑制性PCR检测,将所得PCR产物与克隆载体连接,构建差异DNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,获得2500个克隆。随机挑取96个制备质粒进行PCR检测,均扩增出100～600bp大小的片段。耐药淋球菌差异DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆耐药淋球菌特异的未知新基因奠定了基础。