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宿主蛋白Rab11a对牛病毒性腹泻病毒复制的影响
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作者 权冉 葛丽娟 +3 位作者 陈俊贞 袁圆圆 付强 史慧君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期32-38,共7页
为了探索宿主蛋白Rab11a在感染牛病毒性腹泻病毒(BVDV)后,对细胞增殖的影响。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Rab11a基因稳定敲除的MDBK细胞株,设计靶向Rab11a基因的向导RNA表达载体,采用Western blot检测Rab11a基因敲除后的蛋白表达情... 为了探索宿主蛋白Rab11a在感染牛病毒性腹泻病毒(BVDV)后,对细胞增殖的影响。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Rab11a基因稳定敲除的MDBK细胞株,设计靶向Rab11a基因的向导RNA表达载体,采用Western blot检测Rab11a基因敲除后的蛋白表达情况;使用实时荧光定量qPCR、免疫荧光染色试验、Reed-Muench法等技术检测BVDV感染Rab11a KO细胞后病毒RNA水平、双链RNA(dsRNA)积累水平、病毒滴度及致细胞病变(CPE)情况等。Western blot检测结果显示,成功构建出Rab11a基因敲除的细胞Rab11a KO;Rab11a基因敲除显著抑制BVDV 5'UTR mRNA和dsRNA水平的积累,感染36 h后,Scramble细胞明显有大量细胞病变,出现皱缩、碎裂、形成空泡后脱落等现象,Rab11a KO细胞的CPE现象明显低于Scramble细胞;在BVDV感染细胞12 h后,与Scramble细胞相比,Rab11a KO细胞的病毒滴度显著性降低,结果证明了敲除MDBK细胞的Rab11a基因对BVDV在胞内复制起到抑制作用。本研究结果为了解宿主蛋白Rab11a与BVDV的相互作用,以及Rab11a对病毒的复制增殖的作用提供了新的科学依据。 展开更多
关键词 Rab11a 牛病毒性腹泻病毒 CRISPR/Cas9 复制
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求解安全约束机组组合问题的邻域搜索外逼近方法 被引量:2
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作者 全然 张晓菲 《河南科学》 2018年第11期1699-1706,共8页
提出一种求解安全约束机组组合(security constrained unit commitment,SCUC)问题的邻域搜索外逼近(outer approximation based on neighborhood search,NS-OA)法. OA将SCUC问题分解为一系列混合整数线性规划(mixed integer linear prog... 提出一种求解安全约束机组组合(security constrained unit commitment,SCUC)问题的邻域搜索外逼近(outer approximation based on neighborhood search,NS-OA)法. OA将SCUC问题分解为一系列混合整数线性规划(mixed integer linear programming,MILP)主问题和非线性规划(nonlinear programming,NLP)子问题,通过MILP主问题和NLP子问题的最优解来逼近SCUC问题的最优解.为克服迭代过程中MILP主问题规模大的不足,利用SCUC问题对应UC问题的最优解为中心来构造邻域,然后在此邻域内搜索MILP主问题的最优解.数值结果表明,所提邻域搜索能有效减小搜索空间,大大提高了算法的计算效率,所提NS-OA算法能有效求解大规模SCUC问题,具有良好的应用前景. 展开更多
关键词 安全约束机组组合问题 邻域搜索 外逼近法 混合整数非线性规划 混合整数线性规划 非线性规划
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源网荷储互动的直流配电网优化调度 被引量:28
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作者 权然 金国彬 +3 位作者 陈庆 李国庆 潘狄 石超 《电力系统及其自动化学报》 CSCD 北大核心 2021年第2期41-50,共10页
针对直流配电网内源荷的强随机性、波动性使得优化调度问题愈发复杂化,结合直流配电网低压网架灵活互联、可控的结构特点,深入分析可互动源荷特性基础上,提出源网荷储互动的直流配电网多目标优化调度方法。该方法通过提出源网荷储互动... 针对直流配电网内源荷的强随机性、波动性使得优化调度问题愈发复杂化,结合直流配电网低压网架灵活互联、可控的结构特点,深入分析可互动源荷特性基础上,提出源网荷储互动的直流配电网多目标优化调度方法。该方法通过提出源网荷储互动优化概念,综合考虑可互动负荷、储能及换流器的协同优化对系统运行成本和潮流分布的影响,建立了含光伏的多电压等级直流配电网多目标优化调度模型,使发电侧、用电侧和网侧均能参与直流配电网优化调度。仿真算例表明:源网荷储互动模型能大幅降低系统运行成本、网损率及电压偏差,有效提高光伏消纳水平,实现直流配电网安全可靠运行。 展开更多
关键词 直流配电网 分布式光伏 储能系统 互动负荷 优化调度
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无核葡萄离体胚珠发育影响因子及其生理变化 被引量:5
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作者 李桂荣 全冉 +3 位作者 程珊珊 侯小进 樊秀彩 扈惠灵 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第22期4646-4657,共12页
【目的】研究无核葡萄离体胚珠发育影响因素,为提高无核葡萄胚挽救育种效率提供技术参考。【方法】选择‘红宝石’无核葡萄为材料,在自然授粉后65 d摘取葡萄幼果,消毒处理后,剥取胚珠接种到不同培养基上。研究不同培养基处理(4种不同的... 【目的】研究无核葡萄离体胚珠发育影响因素,为提高无核葡萄胚挽救育种效率提供技术参考。【方法】选择‘红宝石’无核葡萄为材料,在自然授粉后65 d摘取葡萄幼果,消毒处理后,剥取胚珠接种到不同培养基上。研究不同培养基处理(4种不同的基本培养基、附加4种不同蔗糖含量,共计16个处理)和不同培养时间对胚珠发育率和生理指标的影响,并对胚珠发育率和不同生理指标进行相关分析。【结果】在胚珠离体培养阶段,不同处理对胚珠发育率影响不同。采用固液双层基本培养基(改良MM3固体培养基+8 mg·L-1 ER液体培养基)、附加45 g·L-1蔗糖、培养49 d时,胚珠发育率最高,达到(42.23±6.93)%。不同处理对离体培养胚珠各生理指标影响不同。当培养时间相同、基本培养基为固液双层培养基时,胚珠淀粉含量变化差异不显著,而可溶性蛋白含量、总酚含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性均增加,过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性均降低;随着附加蔗糖含量的增加,胚珠淀粉含量变化差异不显著,而可溶性蛋白、总酚含量和SOD酶活性均出现先增加后下降的趋势,POD酶和PPO酶活性均出现逐渐升高的趋势。当培养基处理相同时,随着离体培养时间的延长,胚珠淀粉含量出现逐渐下降的趋势,可溶性蛋白含量、总酚含量和SOD酶活性均出现先增加后下降的趋势,POD酶和PPO酶活性均出现逐渐升高的趋势。相关分析发现,胚珠发育率与胚珠可溶性蛋白含量、总酚含量和SOD酶活性呈极显著正相关,与POD酶活性和PPO酶活性呈极显著负相关,与淀粉含量相关性不显著。【结论】采用固液双层基本培养基(改良MM3固体培养基+8 mg·L-1 ER液体培养基),附加45 g·L-1蔗糖,培养时间49 d时,胚珠发育率最高,离体培养的胚珠生理活性也较强。胚珠发育率与离体培养胚珠的可溶性蛋白含量、总酚含量和SOD酶活性呈极显著正相关,与POD酶活性和PPO酶活性呈极显著负相关。 展开更多
关键词 无核葡萄 胚挽救 离体培养 胚珠发育 生理指标
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稳定表达Cas9蛋白的BHK-21单克隆细胞系的建立与鉴定 被引量:1
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作者 葛丽娟 权冉 +4 位作者 陈俊贞 袁圆圆 付强 李泽宇 史慧君 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第9期12-17,共6页
为建立基于CRISPR/Cas9技术的基因敲除细胞文库,本研究采用慢病毒转导构建稳定表达Cas9蛋白的BHK-21-Cas9单克隆细胞系。将pMD2.G、pSPAX2和lentiCas9-Blast共转染HEK-293T细胞包装慢病毒,感染BHK-21细胞后经Blasticidin S进行阳性筛选... 为建立基于CRISPR/Cas9技术的基因敲除细胞文库,本研究采用慢病毒转导构建稳定表达Cas9蛋白的BHK-21-Cas9单克隆细胞系。将pMD2.G、pSPAX2和lentiCas9-Blast共转染HEK-293T细胞包装慢病毒,感染BHK-21细胞后经Blasticidin S进行阳性筛选,筛选5代后通过有限稀释法培养Cas9单克隆细胞,利用Western blot检测Cas9蛋白的表达。为获得Cas9活性强的BHK-21-Cas9单克隆细胞系,根据紧密连接蛋白(OCLN)基因序列,设计针对OCLN基因的sgRNAs,构建lentiGuide-Puro-OCLN sgRNA重组质粒,测序鉴定后将lentiGuide-Puro-OCLN sgRNA重组载体转染BHK-21-Cas9单克隆细胞系。使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,经过Western blot检测OCLN蛋白的表达。Western blot检测Cas9蛋白结果显示,共获得了17株BHK-21-Cas9单克隆细胞系;测序结果显示,lentiGuide-Puro-OCLN sgRNA载体构建成功,通过Western blot鉴定,有2株Cas9编辑效果好、具有高敲除效率的BHK-21单克隆细胞系。结果表明,本研究构建了稳定表达Cas9蛋白的BHK-21-Cas9单克隆细胞系,可以用于CRISPR/Cas9敲除文库的转导,建立基因敲除细胞文库,为筛选影响病毒感染和复制的功能基因提供了科学依据。 展开更多
关键词 Cas9蛋白 BHK-21细胞系 慢病毒 紧密连接蛋白
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热休克蛋白HSP90B1影响牛病毒性腹泻病毒复制的研究
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作者 陈俊贞 权冉 +5 位作者 付强 葛丽娟 袁圆圆 张成远 李建林 史慧君 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期683-693,共11页
旨在探究热休克蛋白90β家族成员1(heat shock protein 90 beta family member 1,HSP90B1)对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的影响。本研究通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase... 旨在探究热休克蛋白90β家族成员1(heat shock protein 90 beta family member 1,HSP90B1)对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的影响。本研究通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot检测BVDV感染MDBK细胞后HSP90B1 mRNA和蛋白的表达情况,利用CRISPR/Cas9技术构建HSP90B1 KO细胞,计数检测敲除HSP90B1对细胞生长的影响,BVDV TC株感染HSP90B1 KO和对照组Scramble细胞后,使用qRT-PCR、免疫荧光、病毒滴度以及细胞病变效应(cytopathic effects,CPE)检测BVDV的复制情况。结果表明,qRT-PCR检测显示BVDV感染24 h时与空白组相比HSP90B1 mRNA转录水平显著升高(P<0.05),36 h后极显著升高(P<0.01),同时Western blot显示BVDV感染组HSP90B1蛋白的表达水平较未感染组明显增加;Western blot检测显示,与MDBK细胞相比HSP90B1 KO细胞中的HSP90B1蛋白表达量明显降低;细胞计数显示,相同生长时间的Scramble、HSP90B1 KO细胞与MDBK细胞的数量未见差异;qRT-PCR结果显示,与对照组相比,HSP90B1 KO细胞中BVDV 5′UTR RNA水平在BVDV感染12 h后显著降低(P<0.05),36 h后极显著降低(P<0.01);免疫荧光检测结果显示,与对照组相比,HSP90B1 KO细胞中的绿色荧光明显减少;BVDV感染后病毒滴度与对照组相比,12 h后HSP90B1 KO的病毒滴度显著降低(P<0.05),36 h后极显著降低(P<0.01),CPE显示,在感染12 h后对照组细胞出现明显CPE,而HSP90B1 KO细胞仅显示出少量CPE,感染36 h后HSP90B1 KO细胞出现明显CPE,此时对照组细胞出现大量CPE并有细胞脱落。以上结果表明BVDV诱导MDBK细胞中HSP90B1的表达;利用CRISPR/Cas9技术成功敲除MDBK细胞的HSP90B1基因,构建HSP90B1 KO细胞,试验表明敲除HSP90B1能够抑制BVDV的复制。 展开更多
关键词 热休克蛋白 牛病毒性腹泻病毒 CRISPR/Cas9 复制
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无核葡萄胚挽救畸形苗发生及转变正常植株的研究 被引量:3
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作者 李桂荣 全冉 +3 位作者 程珊珊 侯小进 蔡祖国 扈惠灵 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期819-829,共11页
【目的】探究胚挽救无核葡萄畸形苗发生原因及转变成正常葡萄试管苗的方法,提高无核葡萄胚挽救育种效率。【方法】‘无核白’(‘Thompson seedless grape’)、‘火焰无核’(‘Flame seedless grape’)、‘赫什无核’(‘Heshi seedless g... 【目的】探究胚挽救无核葡萄畸形苗发生原因及转变成正常葡萄试管苗的方法,提高无核葡萄胚挽救育种效率。【方法】‘无核白’(‘Thompson seedless grape’)、‘火焰无核’(‘Flame seedless grape’)、‘赫什无核’(‘Heshi seedless grape’)及‘红宝石无核’(‘Ruby seedless grape’)自交以及和不同父本杂交后进行胚挽救,研究不同亲本基因型和不同胚萌发培养基对胚挽救畸形苗产生的影响。通过不同培养基及培养方式离体培养胚挽救畸形苗,进一步研究胚挽救畸形苗转变成正常葡萄试管苗的方法。【结果】‘无核白’和‘赫什无核’作母本,用MS培养基培养易产生胚挽救畸形苗。畸形胚萌发苗可总结为5大类:白化苗、玻璃化苗、徒长苗、子叶扭曲无根苗和无生长点的有根苗。转接在WPM+6-BA 2.0 mg·L^-1+IAA 2.0 mg·L^-1+琼脂6 g·L^-1+蔗糖20 g·L^-1+活性炭2.0 g·L^-1培养基上培养,每隔14 d进行继代转接,将畸形苗转变成正常葡萄试管苗效果较好。【结论】无核葡萄胚挽救产生的畸形苗及时转接到不同培养基上或者采取合适方式进行继代培养,可以将胚挽救畸形苗转变成正常葡萄试管苗。 展开更多
关键词 无核葡萄 胚挽救 畸形胚挽救苗 正常葡萄试管苗 驯化移栽
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基于Web of Science数据库的果树害虫文献计量学分析 被引量:2
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作者 程珊珊 李桂荣 +2 位作者 全冉 邹路明 王保全 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1163-1172,共10页
【目的】分析果树害虫国内外相关科技文献,深入了解果树害虫在全世界范围内的研究热点和趋势。【方法】利用文献计量学的方法,以Web of Science数据库为数据源,对果树害虫研究的年度和国家进行了科研合作、关键词、论文发表数量的统计... 【目的】分析果树害虫国内外相关科技文献,深入了解果树害虫在全世界范围内的研究热点和趋势。【方法】利用文献计量学的方法,以Web of Science数据库为数据源,对果树害虫研究的年度和国家进行了科研合作、关键词、论文发表数量的统计分析。【结果】通过Web of Science核心合集数据库,检索出美国、中国、巴西、澳大利亚和意大利等20个国家在1995—2020年发表了8551篇果树害虫相关文献。国内外果树害虫发表文献数量最多的国家分别是美国和中国,在果树类型、虫害和虫害管理3个方面频次出现最高的分别为杧果、果蝇和生物防治。高频关键词的聚类分析发现果树害虫的研究热点与绿色可持续防控相关,尤其侧重有害生物综合治理(Integrated Pest Management,IPM)和生物防治两个方面的研究。【结论】近25年国内外对果树害虫的研究关注度除了2019年之外,整体处于上升趋势,研究内容涵盖果树害虫寄主植物、虫害种类和防控技术等方面。IPM和生物防治作为新兴的防治方法,通过利用有益生物及其产物控制有害生物种群数量,达到了避免化学农药防治害虫对果实的危害和影响,以及利于食用者身体健康的双赢效果,已经在果树虫害防治中得到了广泛的应用。 展开更多
关键词 果树害虫 文献计量学 Web of Science 生物防治
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樱桃砧木抗盐性筛选及转录组测序分析 被引量:1
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作者 全冉 廖方舟 +4 位作者 李焕勇 刘昊 王芝学 张晓玉 杨丽芳 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第18期5955-5966,共12页
樱桃对盐碱敏感,筛选耐盐碱砧木意义重大。本研究以4种樱桃砧木‘考特’‘马哈利’‘ZY-1’‘兰丁2号’为试验材料,用0.1 mol/L Na Cl溶液浇灌,测定高盐条件下樱桃抗氧化酶和光合指标,筛选抗性砧木,同时对其转录组进行分析。结果表明,以... 樱桃对盐碱敏感,筛选耐盐碱砧木意义重大。本研究以4种樱桃砧木‘考特’‘马哈利’‘ZY-1’‘兰丁2号’为试验材料,用0.1 mol/L Na Cl溶液浇灌,测定高盐条件下樱桃抗氧化酶和光合指标,筛选抗性砧木,同时对其转录组进行分析。结果表明,以‘ZY-1’为砧木的嫁接苗在高盐胁迫条件下H2O2产生量最低,保护性酶CAT、POD和SOD活性最高,而且其净光合速率降幅最小,故相较其他材料‘ZY-1’砧木具有较强的抗盐性。同时对高盐胁迫下以‘ZY-1’为砧木的嫁接苗进行转录组测序,获得51.52 Gb的Clean reads,各测序样品的Q20值均大于97.66%,GC含量为41.39%,其测序结果可行性好;通过数据库比对,共有38 861条Clean data得到基因功能注释,其中包括盐胁迫24和48 h时差异表达基因763和2 065个。差异表达基因的生物学功能分析表明,参与激素信号转导、淀粉和蔗糖代谢、转录因子、抗氧化酶、光合及离子转运等的基因可能在樱桃抗盐过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 樱桃 抗盐 砧木 生理指标
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Inter-glacial isolation caused divergence of cold-adapted species:the case of the snow partridge
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作者 Hongyan Yao Yanan Zhang +7 位作者 Zhen Wang Gaoming Liu quan ran Zhengwang Zhang Keji Guo Ailin Yang Nan Wang Pengcheng Wang 《Current Zoology》 SCIE CAS CSCD 2022年第4期489-498,共10页
Deciphering the role of climatic oscillations in species divergence helps us understand the mechanisms that shape global biodiversity.The coldadapted species may have expanded their distribution with the development o... Deciphering the role of climatic oscillations in species divergence helps us understand the mechanisms that shape global biodiversity.The coldadapted species may have expanded their distribution with the development of glaciers during glacial period.With the retreat of glaciers,these species were discontinuously distributed in the high-altitude mountains and isolated by geographical barriers.However,the study that focuses on the speciation process of cold-adapted species is scant.To fill this gap,we combined population genetic data and ecological niche models(ENMs)to explore divergence process of snow partridge(Lerwa lerwa).Lerwa lerwa is a cold-adapted bird that is distributed from 4,000 to 5,500 m.We found 2 genetic populations within L.lerwa,and they diverged from each other at about 0.40–0.44 million years ago(inter-glacial period after Zhongliangan glaciation).The ENMs suggested that L.lerwa expanded to the low elevations of the Himalayas and Hengduan mountains during glacial period,whereas it contracted to the high elevations,southern of Himalayas,and Hengduan mountains during inter-glacial periods.Effective population size trajectory also suggested that L.lerwa expanded its population size during the glacial period.Consistent with our expectation,the results support that inter-glacial isolation contributed to the divergence of cold-adapted L.lerwa on Qinghai-Tibetan Plateau.This study deepens our understanding of how climatic oscillations have driven divergence process of cold-adapted Phasianidae species distributed on mountains. 展开更多
关键词 climate fluctuations DIVERGENCE Qinghai-Tibetan Plateau QUATERNARY snow partridge
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