甲烷氧化细菌(Methylosinus methanica)81Z中与甲醇氧化有关基因的克隆

以大肠杆菌(E.coli)DH-1菌株和考斯质粒pLA 2917为宿主-载体系统,建立了甲烷氧化细菌(Methylosinus methanica)81Z染色体基因文库。甲醇利用菌(Methylobacterium organophilum)XX的甲醇脱氢酶(MDH)结构基因片段(2.5kb)经α-^(32)P标记后作为探针对该文库进行筛选,得到两个杂交阳性重组质粒,即pG5和pH11,其中pG5的插入片段为25.4kb,互补分析表明:pG5的插入片段能使包括MDH和细胞色素C(Cyt.c)基因突变株在内的5株甲醇利用菌(Methylobacterium sp.)AM1的甲醇氧化阻滞突变株恢复在甲醇上的生长能力,并且能使3株甲醇利用菌XX的甲醇氧化阻滞突变株恢复野生型生长。至少有4个与甲醇氧化有关的基因位于该片段上。Southern blot杂交进一步证实:该插入片段与探针同源的区域在其4.8kb Sal Ⅰ片段内。