旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将4...旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外,其余各组实验兔经口感染1×10^(4)个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,攻虫后观察各组临床表现,每周定时采血、称重,感染21 d后剖检观察肝组织病理变化,并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现,Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录,且转录水平存在差异,在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状,而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示,免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低,虫体数量较少。综上,斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。展开更多
本研究旨在观察斯氏艾美耳球虫裂殖生殖阶段特异性表面抗原Es-SAG13和Es-SAG14的原核表达产物对兔的免疫保护效果。利用相对荧光定量PCR分析Es-SAGs在未孢子化卵囊时期、孢子化卵囊时期、裂殖生殖时期和配子生殖时期的转录水平,并对裂...本研究旨在观察斯氏艾美耳球虫裂殖生殖阶段特异性表面抗原Es-SAG13和Es-SAG14的原核表达产物对兔的免疫保护效果。利用相对荧光定量PCR分析Es-SAGs在未孢子化卵囊时期、孢子化卵囊时期、裂殖生殖时期和配子生殖时期的转录水平,并对裂殖生殖阶段特异性表达的Es-SAG进行原核表达;然后将40只45日龄无球虫幼兔随机分为4组,分别是空白对照组、攻虫对照组、rEs-SAG13免疫组和rEs-SAG14免疫组,分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL(100μg·mL^(-1))rEs-SAG13、1 mL(100μg·mL^(-1))rEs-SAG14,首免14 d后,同等剂量加强免疫,二免14 d后,除空白对照外经口感染1×104个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊·只-1,观察各组临床症状并于感染21 d后剖检,并统计各组的卵囊排出量、相对增重、料肉比、肝指数和肝病变记分。结果显示:Es-SAGs在各阶段的转录水平存在差异,其中,SAG13、SAG14属于裂殖生殖阶段特异表达的成员,原核表达的rEs-SAG13和rEs-SAG14均具有良好的反应原性。免疫保护试验表明:感染后攻虫对照组出现兔肝球虫病典型症状,而免疫组症状不明显;rEs-SAG13免疫组和rEs-SAG14免疫组的卵囊减少率分别达82.8%和51.9%;免疫组平均相对增重均显著大于攻虫对照组(P<0.05);rEs-SAG13免疫组与攻虫对照组的肝指数、肝病变记分差异均显著(P<0.05),而rEs-SAG14免疫组与攻虫对照组的肝指数、肝病变记分差异均不明显(P>0.05)。rEs-SAG13和rEs-SAG14均能不同程度地减少增重损失和卵囊排出,减轻肝病变,其中rEs-SAG13免疫保护效果更佳。展开更多
1 Introduction From geological point of view, the development of shale pore is dually controlled by external and internal factors. The external factors include tectonic position, tectonic stress, sedimentary diagenesi...1 Introduction From geological point of view, the development of shale pore is dually controlled by external and internal factors. The external factors include tectonic position, tectonic stress, sedimentary diagenesis and high abnormal pressure caused by hydrocarbon generation; internal factors include organic carbon content, maturity and mineral composition etc. Therefore, to study influencing factors in the development of shale porosity is of great significance for the shale gas commercial exploitation.展开更多
文摘旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外,其余各组实验兔经口感染1×10^(4)个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,攻虫后观察各组临床表现,每周定时采血、称重,感染21 d后剖检观察肝组织病理变化,并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现,Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录,且转录水平存在差异,在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状,而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示,免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低,虫体数量较少。综上,斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。
文摘本研究旨在观察斯氏艾美耳球虫裂殖生殖阶段特异性表面抗原Es-SAG13和Es-SAG14的原核表达产物对兔的免疫保护效果。利用相对荧光定量PCR分析Es-SAGs在未孢子化卵囊时期、孢子化卵囊时期、裂殖生殖时期和配子生殖时期的转录水平,并对裂殖生殖阶段特异性表达的Es-SAG进行原核表达;然后将40只45日龄无球虫幼兔随机分为4组,分别是空白对照组、攻虫对照组、rEs-SAG13免疫组和rEs-SAG14免疫组,分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL(100μg·mL^(-1))rEs-SAG13、1 mL(100μg·mL^(-1))rEs-SAG14,首免14 d后,同等剂量加强免疫,二免14 d后,除空白对照外经口感染1×104个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊·只-1,观察各组临床症状并于感染21 d后剖检,并统计各组的卵囊排出量、相对增重、料肉比、肝指数和肝病变记分。结果显示:Es-SAGs在各阶段的转录水平存在差异,其中,SAG13、SAG14属于裂殖生殖阶段特异表达的成员,原核表达的rEs-SAG13和rEs-SAG14均具有良好的反应原性。免疫保护试验表明:感染后攻虫对照组出现兔肝球虫病典型症状,而免疫组症状不明显;rEs-SAG13免疫组和rEs-SAG14免疫组的卵囊减少率分别达82.8%和51.9%;免疫组平均相对增重均显著大于攻虫对照组(P<0.05);rEs-SAG13免疫组与攻虫对照组的肝指数、肝病变记分差异均显著(P<0.05),而rEs-SAG14免疫组与攻虫对照组的肝指数、肝病变记分差异均不明显(P>0.05)。rEs-SAG13和rEs-SAG14均能不同程度地减少增重损失和卵囊排出,减轻肝病变,其中rEs-SAG13免疫保护效果更佳。
文摘1 Introduction From geological point of view, the development of shale pore is dually controlled by external and internal factors. The external factors include tectonic position, tectonic stress, sedimentary diagenesis and high abnormal pressure caused by hydrocarbon generation; internal factors include organic carbon content, maturity and mineral composition etc. Therefore, to study influencing factors in the development of shale porosity is of great significance for the shale gas commercial exploitation.
