牛脑Ca^(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的纯化和鉴定

通过一系列层析法,首次从牛脑纯化得到胶凝电泳匀一的Ca^(2+)/CaM PKⅡ。凝胶过滤法测定全酶分子量为550kD,SDS-PAGE法测定亚基分子量为55kD,推测牛脑Ca^(2+)/CaM PK Ⅱ由十个相同的亚基组成。该酶活性绝对依赖于Ca^(2+)和CaM,以63kD PDE同工酶为底物,其AC_(50)分别为0.85μmol/L和0.18μmol/L;以酪蛋白为底物,其AC_(50)分别为0.22μmol/L和0.06μmol/L。牛脑Ca^(2+)/CaM PK Ⅱ旣能催化63kD PDE同工酶等多种蛋白或酶磷酸化,又能进行自身磷酸化。该酶催化63kD PDE同工酶最大磷酸参入量为1mol/mol亚基。磷酸化型63kD PDE同工酶的Ca^(2+)的AC_(50)高于非磷酸化型。

二氢吡啶类钙拮抗剂对钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的抑制机理

用单克隆抗体纯化的60kd为亚基的牛脑钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的动力学研究表明,二氢吡啶类钙拮抗剂Nicardipine和Felodipine是该酶的“部分”竞争性抑制剂。因为近饱和浓度的药物抑制该酶活性仅能达到某限定值,且Dixon作图法不呈直线关系。该酶被一定浓度Felo-dipine抑制时,增加Nicardipine浓度可逆转酶的抑制而达到Nicardipine的最大抑制水平,Nicardipine不影响典型的竞争性抑制剂甲基异丁基黄嘌呤对该酶的抑制作用,说明该酶活性中心以外存在和二氢吡啶结合的部位。