人胰岛素基因逆转录病毒旋转感染Phoenix细胞的表达

目的:观察新构建人胰岛素基因逆转录病毒表达载体(pM54)在Phoenix和HepG2等细胞的表达情况。方法:1)脂质体法转染pM54质粒进入pT67、Phoenix和3T3细胞系;2)用新构建质粒的父本质粒p54和pCMVβGal质粒做转染基因对照;3)制备转染后细胞培养拟逆转录病毒上清液;4)旋转感染Phoenix及HepG2细胞;5)ELISA法检测转染、感染后上清液INS含量。结果:ELISA法检测证实感染细胞培养上清液中含较高水平目的蛋白INS的表达。对照结果均为阴性。结论:人胰岛素基因逆转录病毒介导旋转感染Phoenix等细胞,目的蛋白INS获得了预期的表达。实验为基因治疗或基因结合干细胞治疗糖尿病的进一步相关研究提供了重要数据。

LPKp-人胰岛素基因逆转录病毒载体的构建与鉴定

目的构建肝型丙酮酸激酶启动子(LPKp)与人胰岛素基因(hINSg)逆转录病毒表达载体并鉴定。方法1)母本pMDN-SIN及父本p54质粒扩增、纯化、酶切鉴定;2)取相关片段构建pM54载体并扩增、纯化、鉴定;3)脂质体法转染pM54进入pT67等细胞系,p54等质粒做对照基因;4)用转染后细胞上清液感染3T3细胞;5)ELISA法检测转染、感染后上清液INS含量鉴定质粒。结果酶切鉴定质粒大小与预期相符;ELISA法检测转染、感染上清液中均含较高水平INS。对照结果均阴性。结论LPKp-hINSg逆转录病毒表达载体pM54构建成功。实验为基因治疗或基因结合干细胞治疗糖尿病的进一步相关研究奠定了基础。