荧光实时定量PCR检测NSCLC中PEDF基因表达状态的研究

背景与目的SYBRGreenⅠ是一种较为常用的非探针类定量PCR的方法,其主要优点在于操作过程简单,结果具有一定特异性。本研究的目的是建立检测色素上皮衍生因子(pigmentepitheliumderivedfactor,PEDF)mRNA的SYBRGreenⅠ实时定量PCR的方法,了解肺癌组织及其远癌肺组织中PEDF的表达水平,研究肺癌组织中PEDF的表达水平与各种临床病理特征之间的关系。方法利用RTPCR的方法扩增并纯化PEDF以及内对照GAPDHmRNA的目的片段,倍比稀释后作为定量模板。利用相对定量的方法,检测21例肺癌及相应远癌肺组织中PEDFmRNA相对于GAPDHmRNA的表达量,进行相对定量分析。结果21例肺癌组织及相应的远癌肺组织中均可检出PEDF的表达,肺癌组织中PEDF的相对表达量为0.5505±0.3590(0.11～1.11),远癌肺组织中为0.7219±0.2582(0.29～1.31)(P=0.024)。早期(Ⅰ～Ⅱ期)肺癌患者和肿瘤较小时(T1)PEDF的表达量显著高于晚期(Ⅲ～Ⅳ期,P=0.010)和肿瘤较大者(T2～4,P=0.007)。结论所建立的SYBRGreenⅠ实时定量PCR方法可以成功地检测PEDF基因的表达量。初步检测结果显示PEDF可能是一种肺癌发生发展过程中的保护因素。