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快慢车模式下早高峰时空乘车路径选择研究
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作者 汪景 邵雨晨 +1 位作者 胡华 刘志钢 《交通运输系统工程与信息》 EI CSCD 北大核心 2024年第2期225-233,共9页
研究早高峰通勤乘客的时空出行规律有助于更好地组织快慢车运营模式。本文从一种常见的快慢车运营模式出发,首先,根据乘客的起点车次和直达/换乘方案联合选择构建乘车路径;其次,以出行时间、早到/迟到延误和车内拥挤度作为早高峰通勤乘... 研究早高峰通勤乘客的时空出行规律有助于更好地组织快慢车运营模式。本文从一种常见的快慢车运营模式出发,首先,根据乘客的起点车次和直达/换乘方案联合选择构建乘车路径;其次,以出行时间、早到/迟到延误和车内拥挤度作为早高峰通勤乘客出行选择的影响因素,对不同乘车路径下的出行成本进行构建;再次,以用户均衡理论建立乘车路径分配模型,并证明了该模型用户均衡路段解的存在性及唯一性;最后通过案例,对均衡模型进行验证。研究结果发现:短途乘客更愿意接受高拥挤但终点到达时刻接近工作开始时刻的车次,而长途乘客的车次选择分布较为均匀;除出行时间因素以外,延误惩罚和乘车拥挤同样影响早高峰通勤乘客的换乘行为,虽然换乘快车有可能降低出行时间,但高延误惩罚和拥挤成本会导致部分站点的乘客不选择换乘路径。 展开更多
关键词 城市交通 出行选择 用户均衡 轨道交通 快慢车模式 时间价值 拥挤成本
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2023年毛细管电泳技术年度回顾
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作者 邵宇辰 温亚伦 +1 位作者 赵新颖 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期401-409,共9页
为方便读者快速了解毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE)技术在2023年的发展,根据国际通用学术水平评价指标之一的影响因子(IF)选择期刊,结合与CE技术紧密相关的实验类工作回顾了2023年的重要研究和应用进展。在ISI Web of Scie... 为方便读者快速了解毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE)技术在2023年的发展,根据国际通用学术水平评价指标之一的影响因子(IF)选择期刊,结合与CE技术紧密相关的实验类工作回顾了2023年的重要研究和应用进展。在ISI Web of Science数据库中通过主题检索所获得的2023年CE技术相关的669篇研究论文中,重点介绍了IF大于10.0的Nature Communications,Nucleic Acids Research,Engineering,Journal of Medical Virology和Carbohydrate Polymers发表的5篇实验类论文;IF为5.0~10.0的代表性期刊Analytical Chemistry,Analytica Chimica Acta,Talanta和Food Chemistry的31篇实验类论文;对IF小于5.0但CE技术报道较为集中的Journal of Chromatography A和Electrophoresis以及国内重要中文核心期刊(北京大学)中的代表性实验研究进行了概述。2023年,IF≥10.0期刊报道的最新科研进展都是使用已报道的CE方法,为CE技术的推广应用提供了新的突破口。此外,CE与质谱的新应用研究依旧是热点;CE在3D打印和水下工作系统等硬件方面的报道增加,在固体颗粒、细胞囊泡、细胞、病毒和细菌等非溶液样品分析中有较大突破,在药物和成分分析方面依旧保持优势。中文期刊方面,CE应用论文数量多于往年,尤其是在印刷领域的新应用十分抢眼。 展开更多
关键词 毛细管电泳 2023 年度回顾
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长江口北支地形变化对倒灌盐水的影响
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作者 邵雨辰 刘懿 +3 位作者 周先水 王翔宇 吕紫君 吴德安 《城市道桥与防洪》 2024年第4期131-135,I0009,共6页
北支盐水入侵是长江口径潮动力的重要特征,受到径流、潮汐以及地形变化等多方面的影响.通过建立长江口潮流盐度模型,讨论不同地形条件对长江口北支潮位及盐水倒灌量的影响,研究倒灌盐水团的活动规律和盐度的变化.研究表明:2000-2017年... 北支盐水入侵是长江口径潮动力的重要特征,受到径流、潮汐以及地形变化等多方面的影响.通过建立长江口潮流盐度模型,讨论不同地形条件对长江口北支潮位及盐水倒灌量的影响,研究倒灌盐水团的活动规律和盐度的变化.研究表明:2000-2017年期间年地形变化使得北支倒灌明显减弱,中缩窄方案实施完成后将使得倒灌现象进一步减弱;地形改变造成的倒灌盐水量的变化对在南支活动的倒灌盐水团的盐度有显著的影响,但对盐水团在南支的活动规律影响较小. 展开更多
关键词 盐水入侵 北支 潮流盐度模型 地形变化
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肠道条件和粒径对加工山核桃体外消化的影响 被引量:1
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作者 邵宇辰 穆宏磊 +6 位作者 陈杭君 殷军艺 房祥军 吴伟杰 刘瑞玲 韩延超 郜海燕 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第8期1734-1742,共9页
根据健康成人和胰腺外分泌功能不全(exocrine pancreatic insufficiency,EPI)人群的肠道条件,设置不同的胆盐浓度、肠道pH和胰脂酶浓度,分析加工山核桃基质降解率(matrix degradation rate,MDI)、脂肪和蛋白质消化率、总酚和抗氧化活性... 根据健康成人和胰腺外分泌功能不全(exocrine pancreatic insufficiency,EPI)人群的肠道条件,设置不同的胆盐浓度、肠道pH和胰脂酶浓度,分析加工山核桃基质降解率(matrix degradation rate,MDI)、脂肪和蛋白质消化率、总酚和抗氧化活性,探究不同肠道条件和粒径大小对加工山核桃体外消化的影响。结果显示,粒径大小对加工山核桃体外消化影响最显著,小颗粒加工山核桃MDI、抗氧化活性以及脂肪和蛋白质消化率均高于大颗粒加工山核桃。pH和胆盐浓度与脂肪消化和抗氧化活性相关,pH 7,胆盐浓度为10 mmol·L^(-1)时,脂肪消化效果更好;胰脂酶浓度越高,脂肪和蛋白质消化率越高。因此,EPI人群可适量摄入补充益生元、胰酶制剂,提高对山核桃制品营养素消化利用率。 展开更多
关键词 山核桃 肠道条件 粒径大小 体外消化 抗氧化活性
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金属有机骨架纳米材料-固相萃取环境水样中亚硝胺类消毒副产物 被引量:2
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作者 李小蒙 王旭坤 +5 位作者 吴怡秋 邵子纯 邵煜晨 陈坤 高仕谦 张占恩 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1258-1265,共8页
将通过水热合成法制备的金属有机骨架材料[MIL-101(Cr)]作为吸附剂应用于吸附环境水样中的亚硝胺类消毒副产物,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)进行测定.通过SEM、TEM和FT-IR技术对MIL-101(Cr)的表面形态和特征基团进行表征... 将通过水热合成法制备的金属有机骨架材料[MIL-101(Cr)]作为吸附剂应用于吸附环境水样中的亚硝胺类消毒副产物,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)进行测定.通过SEM、TEM和FT-IR技术对MIL-101(Cr)的表面形态和特征基团进行表征,并对影响萃取效率的主要因素,如MIL-101(Cr)的用量、萃取时间、水样的pH值和解吸条件等进行考察.研究表明,当MIL-101(Cr)用量为6.0 mg,pH=9.0,30℃下9 min内可达吸附平衡,回收率高于63.5%,3种亚硝胺的检出限为0.029-0.283μg·L^-1.将方法应用于环境水样的测定,加标回收率在77.9%-107.2%范围内,相对标准偏差低于5.4%.该方法操作简单快速、准确可靠、检出限低,可用于水样中痕量亚硝胺类消毒副产物的检测. 展开更多
关键词 金属有机骨架材料 固相萃取 亚硝胺类消毒副产物 环境水样
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一次中国东部大范围强浓雾的传播与扩展机制分析 被引量:5
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作者 邵禹晨 张雪蓉 +1 位作者 王博妮 濮梅娟 《气象》 CSCD 北大核心 2019年第4期496-510,共15页
本文利用常规气象观测资料、NCEP再分析资料对2016年12月31日至2017年1月4日中国东部持续近5天的大范围强浓雾过程进行了分析,重点对强浓雾的传播与扩展机制进行了诊断研究。结果表明:这次浓雾过程以1日晚间冷高压南下为分界点,在高压... 本文利用常规气象观测资料、NCEP再分析资料对2016年12月31日至2017年1月4日中国东部持续近5天的大范围强浓雾过程进行了分析,重点对强浓雾的传播与扩展机制进行了诊断研究。结果表明:这次浓雾过程以1日晚间冷高压南下为分界点,在高压南下之前强浓雾范围局限于河北中南部,高压南下之后,强浓雾增强并大范围传播,影响江苏、安徽、河南、河北、山东等多个省。冷高压南下导致低层逆温层加强,逆温区范围扩大,是强浓雾得以大范围传播的重要条件。由海上经江苏、安徽、河南至河北的水汽平流输送则为浓雾的大范围传播提供了充足的水汽条件。 展开更多
关键词 强浓雾 强逆温 水汽条件 大范围传播
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2022年毛细管电泳技术年度回顾 被引量:2
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作者 温亚伦 邵宇辰 +1 位作者 赵新颖 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期377-385,共9页
该文为2022年毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)技术年度回顾。归纳总结了以“capillary electrophoresis-mass spectrometry”或“capillary isoelectric focusing”或“micellar electrokinetic chromatography”或“capillar... 该文为2022年毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)技术年度回顾。归纳总结了以“capillary electrophoresis-mass spectrometry”或“capillary isoelectric focusing”或“micellar electrokinetic chromatography”或“capillary electrophoresis”为关键词在ISI Web of Science数据库中进行主题检索(排除“capillary electrochromatography”“microchip”“microfluidic”“capillary monolithic column”)得到的2022年CE技术相关研究论文881篇。重点介绍了影响因子(IF)大于10.0的Lancet Global Health,ACS Central Science,Microbiome,Trends in Food Science&Technology,TrAC-Trends in Analytical Chemistry,Journal of Pharmaceutical Analysis,Journal of Cachexia,Sarcopenia and Muscle,Food Hydrocolloids,Science of the Total Environment和Carbohydrate Polymers发表的16篇论文;IF在5.0~10.0内的代表性期刊Analytical Chemistry,Analytica Chimica Acta,Talanta和Food Chemistry的46篇论文;对IF小于5.0但CE技术报道较为集中的Journal of Chromatography A和Electrophoresis以及国内重要的中文核心期刊(北京大学)中的代表性工作进行了概述。本文根据国际通用学术水平评价指标之一的影响因子选择期刊,结合期刊发表CE论文代表性工作进行介绍,便于读者快速了解CE技术在过去一年的重要研究进展。 展开更多
关键词 毛细管电泳 2022 年度回顾
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新医改以来我国社区卫生服务机构人员绩效考核实施进展 被引量:11
8
作者 袁林林 邵雨辰 +1 位作者 任乐濛 孙晓杰 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2018年第28期3417-3422,3429,共7页
完善的绩效考核不仅能充分激发医务人员的积极性,同时也能有效促进社区卫生服务机构的服务模式转变、完善服务功能、提高服务质量和效率。本文介绍了新医改以来我国社区卫生服务机构人员绩效考核的典型做法,并总结其中的经验与不足。为... 完善的绩效考核不仅能充分激发医务人员的积极性,同时也能有效促进社区卫生服务机构的服务模式转变、完善服务功能、提高服务质量和效率。本文介绍了新医改以来我国社区卫生服务机构人员绩效考核的典型做法,并总结其中的经验与不足。为进一步完善社区卫生服务机构人员绩效考核,建议在设计绩效考核体系时,合理划分不同性质工作岗位、合理选取考核指标、构建科学动态的绩效评价指标体系、加强考核结果利用、加强绩效反馈改进,充分利用"互联网+"助推绩效考核,最终发挥社区卫生服务机构健康"守门人"的作用。 展开更多
关键词 社区卫生服务机构 社区卫生工作者 绩效考核
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Effect of tidal currents on the transport of saline water from the North Branch in the Changjiang River estuary 被引量:3
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作者 DING Jian shao yuchen WU De’an 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2018年第6期2085-2097,共13页
Based on the MIKE 21 numerical model combined with measured data, a numerical model for the coupling of water and salinity in the Changjiang(Yangtze) River estuary was established, and based on good verification, the ... Based on the MIKE 21 numerical model combined with measured data, a numerical model for the coupling of water and salinity in the Changjiang(Yangtze) River estuary was established, and based on good verification, the influence of the tidal current intensity on the transport and variations of salinity concentrations in saline water from the North Branch to the South Branch was numerically evaluated. The time and space mean root mean square of the tidal current velocity can be expressed as a parabolic function of an adjustment coefficient for the amplitude of the M2 tidal constituent along the open boundaries of the model. Under the advection of runof f and tidal currents, the saline pool is transported downstream in an oscillatory pattern. With the enhancement of tidal current intensity, the oscillatory motion of the saltwater pool is increasingly significant in a tidal cycle forced by rising and falling tides. Along four set paths, the daily average concentrations of the saline core were generally similar, and in the process of transportation downstream, the concentrations of saltwater declined. The decay of the tidal-period-averaged salinity of the saltwater was linearly related to the square of the tidal current. Thus, the tidal current has a significant and direct impact on saltwater transport and diffusion in the Changjiang River estuary. 展开更多
关键词 CHANGJIANG RIVER ESTUARY saltwater INTRUSION numerical simulation TRANSPORT and diffusion ATTENUATION
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限制性内切酶NcoⅠ的高效重组表达、硒代与结晶条件初步筛选 被引量:2
10
作者 程艺 马超 +5 位作者 陈晓雨 邵钰晨 王潇 杨雪丽 苏蓉 李婷婷 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期81-88,共8页
来源于珊瑚诺卡氏菌Nocardia corallina的限制性内切酶NcoⅠ是基因工程中常用的工具酶之一。然而目前NcoⅠ蛋白质三维结构尚未被解析,对其基因改造缺乏理论指导。为了解析NcoⅠ的三维结构,采用大肠杆菌表达系统,高效重组表达和纯化,获... 来源于珊瑚诺卡氏菌Nocardia corallina的限制性内切酶NcoⅠ是基因工程中常用的工具酶之一。然而目前NcoⅠ蛋白质三维结构尚未被解析,对其基因改造缺乏理论指导。为了解析NcoⅠ的三维结构,采用大肠杆菌表达系统,高效重组表达和纯化,获得了纯度>95%的NcoⅠ野生型和Se-NcoⅠ硒代蛋白。质谱分析表明,重组Se-NcoⅠ蛋白中所有硫原子成功被硒原子取代。酶切实验表明,硒代蛋白与野生型具有相似的限制酶活性。采用坐滴法筛选重组NcoⅠ蛋白结晶条件,已在3种条件下获得针状晶体,1种条件下获得颗粒状晶体。X射线衍射初步分析晶体分辨率在0.8 nm左右,为下一步解析NcoⅠ三维结构提供了基础。 展开更多
关键词 限制性内切酶 NcoⅠ 表达纯化 硒代 结晶
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非线性方程组求解器全局优化求解能力对比研究
11
作者 程培澄 程培聪 +2 位作者 王萌 邵宇辰 亓路宽 《计算机应用与软件》 北大核心 2022年第10期1-10,24,共11页
首次总结提出一套共14道低维但高难度非线性方程组案例题集,从效果与效率两方面对比测试了国内外目前认可度很高的5款优秀全局优化求解器Baron、Antigone、Couenne、Lingo和1stOpt,给出这5款求解器在非线性方程组全局优化求解能力方面... 首次总结提出一套共14道低维但高难度非线性方程组案例题集,从效果与效率两方面对比测试了国内外目前认可度很高的5款优秀全局优化求解器Baron、Antigone、Couenne、Lingo和1stOpt,给出这5款求解器在非线性方程组全局优化求解能力方面的综合表现及排名,探讨了非线性方程组求解过程中“除法陷阱”和“冗余项影响”问题及解决方法,确定性优化算法的优缺点以及全局最优化求解器研发者的“卡耐基梅隆”及“跨行业”现象。 展开更多
关键词 全局最优化 非线性方程组 优化求解器
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指向核心素养的小学语文整本书阅读教学策略研究——以SOLO分类理论为视角 被引量:3
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作者 邵宇晨 《科教文汇》 2023年第23期174-178,共5页
随着小学语文新课标的出台,整本书阅读再次引起广大师生的关注。但在实际教学过程中,整本书阅读依然遇到了缺乏理论指引的困境。SOLO分类理论作为一种将思维发展进行可视化分析的理论,和整本书阅读的内在价值有诸多相似之处。SOLO分类... 随着小学语文新课标的出台,整本书阅读再次引起广大师生的关注。但在实际教学过程中,整本书阅读依然遇到了缺乏理论指引的困境。SOLO分类理论作为一种将思维发展进行可视化分析的理论,和整本书阅读的内在价值有诸多相似之处。SOLO分类理论视角下的整本书阅读教学策略贯彻课堂各阶段。教师可以通过课前预习、小组讨论、思维导图、课堂分享、任务布置等方式,落实新课标中“整本书阅读”学习任务群的要求,培养学生的语文核心素养。 展开更多
关键词 小学语文 核心素养 整本书阅读 SOLO分类理论 教学策略
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京杭运河边滩取水口工程水流特性研究 被引量:1
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作者 程博 曹洋 +2 位作者 邵雨辰 周先水 曹昌志 《江苏水利》 2019年第2期32-36,41,共6页
边滩取水口的建设改变了原来河道的平面尺寸和断面尺寸,对取水口附近的河道水流产生一定程度的影响,进而对航道通航安全以及河道行洪能力产生一定的影响。结合宿迁市河湖连通工程——应急水源地取水口工程建设实例,应用数学模拟技术,分... 边滩取水口的建设改变了原来河道的平面尺寸和断面尺寸,对取水口附近的河道水流产生一定程度的影响,进而对航道通航安全以及河道行洪能力产生一定的影响。结合宿迁市河湖连通工程——应急水源地取水口工程建设实例,应用数学模拟技术,分析边滩取水口的建设对航道水流特性的影响,结论表明:拟建边滩取水口的布置不会在取水口前沿航道水域产生不良流态,取水口建成后局部航道的横向流速有小幅增加,但对航道通航条件的影响不大,此外取水口采用开挖河滩加抛石护底的工程方案,增加了河道的断面尺寸,有利于河道行洪。 展开更多
关键词 取水口 流场 横向流速 京杭运河
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顺岸挖入式码头前沿航道水流特性研究 被引量:1
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作者 邵雨辰 王健 +2 位作者 池丽敏 程博 曹洋 《江苏水利》 2018年第3期15-18,共4页
顺岸挖入式港池的布置形式改变了原来河道的平面尺寸和断面尺寸,对港池附近的河道水流产生一定程度的影响,进而对航道通航安全以及河道行洪能力产生一定的影响。结合泰州港某LNG加气站码头的工程建设实例,应用数学模拟技术,分析顺岸挖... 顺岸挖入式港池的布置形式改变了原来河道的平面尺寸和断面尺寸,对港池附近的河道水流产生一定程度的影响,进而对航道通航安全以及河道行洪能力产生一定的影响。结合泰州港某LNG加气站码头的工程建设实例,应用数学模拟技术,分析顺岸挖入式码头建设对航道水流特性的影响。结论表明:拟建码头港池的布置不会在码头前沿航道水域产生不良流态,码头建成后局部航道的横向流速有小幅增加,但对航道通航条件的影响不大,此外码头港池的布置增加了河道的断面尺寸,有利于河道行洪。 展开更多
关键词 顺岸挖入式港池 流场 横向流速 水流特性
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限制性内切酶DpnⅡ及其硒代衍生物的制备
15
作者 邵钰晨 杨琪 +4 位作者 王鹏 吴尚成 王东晖 司鑫鑫 曹阳 《江苏海洋大学学报(自然科学版)》 CAS 2021年第1期72-76,共5页
来源于肺炎双球菌Diplococcus pneumoniae的Ⅱ型限制性内切酶DpnⅡ是分子生物学领域中常用的一种工具酶,它在基因工程等领域发挥着重要作用,目前其三维结构尚未被解析。为了解析DpnⅡ的蛋白结构,进一步阐明DpnⅡ的分子机制,构建了pET28b... 来源于肺炎双球菌Diplococcus pneumoniae的Ⅱ型限制性内切酶DpnⅡ是分子生物学领域中常用的一种工具酶,它在基因工程等领域发挥着重要作用,目前其三维结构尚未被解析。为了解析DpnⅡ的蛋白结构,进一步阐明DpnⅡ的分子机制,构建了pET28b-DpnⅡ重组表达载体,并采用大肠杆菌表达系统,利用BL21(DE3)pLysS菌株高效表达了DpnⅡ及其硒代衍生物,经Ni亲和层析、阴离子交换、凝胶过滤层析、肝素亲和层析等4步纯化获得了纯度在95%以上的重组蛋白和硒代蛋白,质量浓度均为10 mg/mL,产量分别为6.5 mg/L和5.5 mg/L。酶活研究发现,硒代蛋白和重组蛋白对底物pUC19质粒切割产生了大小一致的条带,表明硒代蛋白的活性未受到明显影响。 展开更多
关键词 限制性内切酶 DpnⅡ 硒代蛋白 表达纯化
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湫湖灌区1号过水桥改造工程设计与计算
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作者 楚雷刚 池丽敏 邵雨辰 《城市道桥与防洪》 2022年第12期121-125,I0011,共6页
过水桥在丘陵灌区应用十分广泛,为丘陵地区跨流域调水提供了便利基础条件。湫湖灌区1号过水桥改造,为满足过水桥的设计过流能力及减少占地等要求,使改造后过水桥的断面和跨度均有所增加。过水桥30 m跨度槽身采用后张法预应力技术,通过... 过水桥在丘陵灌区应用十分广泛,为丘陵地区跨流域调水提供了便利基础条件。湫湖灌区1号过水桥改造,为满足过水桥的设计过流能力及减少占地等要求,使改造后过水桥的断面和跨度均有所增加。过水桥30 m跨度槽身采用后张法预应力技术,通过三维有限元分析计算,表明通过预应力钢筋的施加,可以大大减少运行期的混凝土拉应力,提高结构的安全度。 展开更多
关键词 过水桥改造 后张法预应力 三维有限元
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天然边滩游泳场整治工程泥沙冲淤特性研究
17
作者 邵雨辰 冯佳佳 +2 位作者 陈丹 程博 周先水 《江苏水利》 2019年第5期5-8,共4页
天然游泳场的冲淤变化是影响边滩游泳场正常稳定运营的关键。首先分析闽江西河流态和输沙特征,表明闽江西河边滩及附近河段的输沙不平衡将很大程度上危及该天然游泳场的边滩稳定性。在此分析结论的基础上,结合数值模拟技术,计算出工程... 天然游泳场的冲淤变化是影响边滩游泳场正常稳定运营的关键。首先分析闽江西河流态和输沙特征,表明闽江西河边滩及附近河段的输沙不平衡将很大程度上危及该天然游泳场的边滩稳定性。在此分析结论的基础上,结合数值模拟技术,计算出工程整治措施对边滩游泳场及其附近河段冲淤变化的影响。研究结果表明:对旧洪山大桥桥下深槽进行抛石填充以及对游泳场边滩进行平整能够有效的抑制游泳场的弯道环流,改善本河段的流速分布,从而改善边滩河段纵向及横向的输沙不平衡的现象。因此,工程措施能够减弱游泳场上游淤积下游冲刷的现状,对促进边滩的稳定起到积极的作用。 展开更多
关键词 数值模拟 推移质 输沙平衡 边滩
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限制性内切酶Mlu Ⅰ蛋白及其硒代衍生物的制备 被引量:1
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作者 邵钰晨 马燕燕 +5 位作者 谷庆花 鲍渴望 孙晓宇 陈晓雨 李婷婷 司鑫鑫 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1528-1537,共10页
【背景】限制性内切酶Mlu Ⅰ是一种常用的工具酶,在分子生物学领域发挥着重要的作用,其三维结构尚未被解析。【目的】在大肠杆菌中克隆表达、纯化重组Mlu Ⅰ蛋白及其硒代蛋白,并进行结晶条件的研究。【方法】构建重组表达载体pET28b-Mlu... 【背景】限制性内切酶Mlu Ⅰ是一种常用的工具酶,在分子生物学领域发挥着重要的作用,其三维结构尚未被解析。【目的】在大肠杆菌中克隆表达、纯化重组Mlu Ⅰ蛋白及其硒代蛋白,并进行结晶条件的研究。【方法】构建重组表达载体pET28b-Mlu Ⅰ,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达,利用亲和层析和凝胶过滤层析纯化重组Mlu Ⅰ蛋白和硒代Mlu Ⅰ蛋白。对蛋白进行质谱检测、圆二色谱检测以及酶活检测,利用坐滴法进行结晶条件的筛选。【结果】构建了重组表达载体pET28b-Mlu Ⅰ并纯化获得达到结晶纯度的蛋白,通过质谱检测确定硒代Mlu Ⅰ蛋白中的8个甲硫氨酸全部被取代,结合酶活测试及圆二色谱检测确定了硒代对Mlu Ⅰ蛋白的活性、结构无明显影响。采用坐滴法进行初步的晶体生长研究,重组蛋白目前已在1种条件下获得针状晶体并进行初步衍射,获得分辨率在0.32 nm左右的衍射数据。【结论】Mlu Ⅰ蛋白及硒代Mlu Ⅰ蛋白纯化体系的构建和结晶条件的研究,可为下一步解析Mlu Ⅰ三维结构、作用机制的探讨及定向改造奠定基础。 展开更多
关键词 限制性内切酶 MluⅠ 硒代蛋白 结晶
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