ABO血型基因第7外显子695 T>C突变导致Bw11亚型的研究

目的:在中国彝族人群中发现罕见的ABO*BW.11/ABO*O.01.02血型基因亚型,探讨ABO*BW.11/ABO*O.01.02血型血清学特点、分子机制及遗传背景。方法:先证者为孕产妇,25岁,入院常规检测显示其ABO正反定型不符,在常规ABO血型血清学无法准确鉴定的情况下,对ABO基因第1-7外显子采用Sanger法进行测序分析,并利用野生型B糖基转移酶氨基酸系列同源建模,预测该位点突变对B糖基转移酶结构和功能的影响。结果:先证者及家系成员血型血清学结果与常见B亚型均不相符;ABO基因测序结果显示,先证者及家系成员4代共7人均存在ABO血型基因第7外显子存在c.695T>C错义突变,导致B糖基转移酶第232位亮氨酸被脯氨酸替换。同源建模显示,突变影响了蛋白质的肽键和氢键,导致其结构和功能发生改变,B糖基转移酶的活性降低,导致B抗原表达减弱。结论:ABO等位基因出现第7外显子c.695T>C.P.leu 232 Pro点突变是形成ABO*BW.11/ABO*O.01.02亚型的分子基础,此突变在此家系多成员中稳定遗传。

云南省昆明地区2022年柯萨奇病毒A16型的VP1区分子特征

目的对昆明市某医院2022年从手足口病患儿分离的柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)的全VP1基因区分子特征分析。方法对昆明市某医院2022年从手足口病(hand foot mouth disease,HFMD)患儿200份临床样品粪便标本进行处理,分别通过RD细胞和Vero细胞分离,对经3次培养后仍产生细胞效应(cytopathogenic effect,CPE)的细胞培养液提取病毒核酸,然后用通用引物222/224经RT-PCR扩增并测序,序列经BLAST比对确定其血清型,对鉴定为柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)的再用特异引物CA16VP1F/CA16VP1R扩增其全VP1区并测序和拼接。下载CVA16病毒标准序列,采用Geneious 5.4.1和MEGA 6.05等软件对本研究CVA16的全VP1区的核苷酸和氨基酸序列分析。结果经鉴定后共检出22株从Vero细胞分离CVA16和6株RD细胞分离的CVA16毒株,进一步通过特异引物扩增获得21株可用的CVA16VP1全长序列,基于全VP1基因系统进化分析,这21株CVA16全属于B1a基因型。21株CVA16全长VP1基因之间的核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,分别为91.9%~99.6%和89.2%~99.3%;与中国CVA16 B1a基因型的其他株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为89.7%~96.3%和89.2%~97.0%。与CVA16 B1b其他参考株对比,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别在84.3%~87.2%和89.2%~97.0%。与其它CVA16的B1a基因亚型相比较发现21个氨基酸位点出现变异。结论2022年中国云南省昆明某医院引起HFMD的CVA16毒株属于B1a基因型,应继续监测以明确其流行特征。

非编码RNA与人巨细胞病毒潜伏感染关系的研究进展

人巨细胞病毒(HCMV)是一种高宿主特异性疱疹病毒,其感染率高、潜伏感染激活后的致病性强。由于目前尚无针对病毒潜伏感染的监测手段,导致HCMV临床诊断困难。近年来有研究报道非编码RNA在疱疹病毒的潜伏感染过程中发挥重要作用,提示可以将HCMV感染相关的特异性非编码RNA应用于病毒潜伏感染期的诊断和监测。本文就与HCMV潜伏感染相关的非编码RNA调控机制作简要综述,进一步阐明非编码RNA与HCMV潜伏感染的关系。

基于虚拟仿真技术的药学专业群实训教学模式与效果评价研究--以《药剂学》为例

目的探讨基于虚拟仿真技术的教学模式在药学专业群核心课程《药剂学》实训教学中的效果。方法依托虚拟仿真实训教学资源共享及管理平台,在2021和2022级药学专业中积极探索“线上线下混合”和“虚实结合、虚实互补”的实训教学新模式,采用问卷调查教学效果。结果与往届相比,课程建设质量、人才培养质量和教师教学能力均得以提升,取得一系列可喜成绩,学生对虚拟仿真实训教学认可度高。结论在《药剂学》课程中采用基于虚拟仿真技术的教学是促进现代信息技术与传统实训教学深度融合、提高实训教学质量和推动实训教学改革的重要举措,需持续优化虚拟仿真平台资源,使之更好适应信息社会发展要求。

双黄补温敏凝胶的制备及体外释放考察

目的:制备双黄补温敏凝胶,并考察其体外释放行为。方法:以提取时间、料液比、提取次数为影响因素,黄芩苷和盐酸小檗碱含量的综合评分为评价指标,采用正交试验优化提取工艺。以温敏凝胶基质用量为影响因素,胶凝温度为考察指标,优化处方工艺。最后通过透析袋法考察其体外释药行为。结果:最佳提取工艺为60%乙醇作为溶剂,提取时间0.5 h,料液比1∶20(m/V),提取3次;双黄补温敏凝胶最佳处方是17.0%的泊洛沙姆407(P407),1.0%的泊洛沙姆188(P188),0.7%的提取物,胶凝温度为34.3℃;黄芩苷的体外释放符合Higuchi方程,盐酸小檗碱的释放符合一级动力学方程。结论:双黄补温敏凝胶制备工艺稳定可行,为双黄补的开发提供了新剂型。

BMI-1通过激活PI3K/Akt信号通路促进裸鼠体内淋巴瘤生长的机制研究

目的:探讨原癌基因BMI-1对裸鼠体内淋巴瘤生长的影响及潜在分子机制。方法:培养鼠源淋巴瘤细胞FOX-NY,并对细胞进行BMI-1沉默和过表达处理,以及联合PI3K/Akt抑制剂处理。CCK-8法检测各组细胞增殖情况。通过腋窝下接种鼠源淋巴瘤细胞FOX-NY、沉默BMI-1的FOX-NY(BMI-1^(-)-FOX-NY)、过表达BMI-1的FOX-NY(BMI-1^(+)-FOX-NY)建立裸鼠淋巴瘤动物模型。裸鼠分为:对照组、质粒空载组、BMI-1^(-)-FOX-NY组、BMI-1^(+)-FOX-NY组。对裸鼠体重、肿瘤体积和质量等指标进行检测。采用PCR技术测定裸鼠体内BMI-1 mRNA表达。采用苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理学情况。采用免疫组化染色和蛋白印迹检测裸鼠瘤体BMI-1、p-PI3K、p-Akt蛋白表达。结果:和空载组相比,BMI-1^(-)组细胞增殖能力显著降低,BMI-1^(+)组细胞增殖能力显著升高。和BMI-1^(+)组细胞相比,BMI-1^(+)-Miltefosine组细胞增殖能力显著降低。与空载组比较,BMI-1^(-)-FOX-NY组裸鼠体重显著降低(P<0.001)、肿瘤体积显著减小(P<0.001)、肿瘤组织病理学显著改善,瘤体BMI-1 mRNA水平显著降低(P<0.001)、瘤体BMI-1、p-PI3K、p-Akt蛋白水平显著降低(P<0.001)。反之,BMI-1^(+)-FOX-NY组裸鼠体重显著增加(P<0.01)、肿瘤体积显著增加(P<0.01,P<0.001)、肿瘤组织病理学显著恶化,瘤体BMI-1 mRNA水平显著升高(P<0.001)、瘤体BMI-1、p-PI3K、p-Akt蛋白水平显著升高(P<0.01,P<0.001)。结论:BMI-1在淋巴瘤组织中表达显著升高,BMI-1可以促进DLBCL的生长并激活PI3K/Akt信号通路。

信息化时代食品安全预警体系的结构与构建技术研究进展

在信息化时代,食品安全信息呈现出复杂化、传播快、数据量大、有效信息密度低等显著特征,这给现代化食品安全预警体系的构建带来了困难和挑战。基于此背景,本文首先从构建适应当前信息化发展趋势的食品安全预警体系出发,结合国内外研究进展,总结归纳了食品安全预警体系的定义和该体系中的3个主要构成系统,即食品安全信息收集系统、预警信息分析系统和预警反应系统。其次阐述了结合数据库的食品安全预警体系的模块化设计路径。最后探讨了爬虫、云计算、物联网、关联分析、情感分析、深度学习等智能化信息技术在构建高效、智能的食品安全预警系统方面的最新实践。本文以期为构建适应现代化信息时代食品安全风险管理需求的预警体系提供重要的理论和技术参考。

正交试验优选吴茱萸汤提取工艺

目的优选吴茱萸汤的提取工艺。方法以乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数为考察因素,吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量的综合评分为评价指标,采用L9(34)正交试验法优选最佳提取工艺,并验证。结果最佳提取工艺为加70%乙醇,料液比为1∶20(m/V),提取2次,每次0.5 h。结论该提取工艺稳定、可行,可为吴茱萸汤的开发提供参考。

吴茱萸汤临床效用分析

吴茱萸汤源自东汉末年医圣张仲景的《伤寒论》,该方具有温中补虚、降逆止呕之功效,是治阳明中寒、厥阴虚寒兼肝胃陈寒证的主方,治疗症状以“虚、寒、逆”为主,多见于头痛、眩晕、呕吐等病症。现就吴茱萸汤方剂现代临床应用的高频病案及其用药规律,分析其潜在的临床效用。

IL-6/CTRP3对急性脑梗死出血性转化的预测价值

目的:本研究通过检测急性脑梗死患者血清中炎症因子的变化,探讨血清炎症因子在脑梗死出血转化(hemorrhagic transformation,HT)过程中的作用,进而为HT的预测及治疗提供理论基础。方法:回顾性分析2015年1月至2020年1月我院神经内科收治的急性脑梗死患者相关临床资料,根据是否发生HT将患者分为HT组和非HT组。收集两组患者详细资料、影像学检查结果及检测血清炎症因子水平。比较两组患者临床资料、炎症因子差异,将各项资料纳入至logistic回归,分析HT发生的危险因素。结果:最终纳入HT组患者31例,非HT组患者71例,HT组中美国公立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分明显高于非HT组,HT组中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、TNF-α水平明显高于非HT组,而肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)水平明显低于非HT组。IL-1β、IL-6及TNF-α与NIHSS评分正相关,CTRP3与NIHSS评分呈负相关。logistic回归发现IL-6,TNF-α及梗死面积均为HT的危险因素,而CTRP3为保护因素。进一步发现IL-6/CTRP3的AUC、特异性及敏感性分别为0.91、0.89、0.96,其预测HT的可靠性明显高于其他变量。结论:炎症因子在HT发生中发挥重要作用,而众多危险因素中,IL-6/CTRP3预测HT的可靠性明显高于其他变量。

下一代测序技术在遗传相关性智力障碍诊断中的应用

智力障碍(intellectual disability,ID),是一种严重危害儿童身心健康的综合症,不但影响患者自身的生活质量,也给其家庭和社会带来沉重负担。ID病因十分复杂,既有外在的环境因素又有内在的遗传因素。近年来,下一代测序技术(next-generation sequencing,NGS)从一种新兴技术变成了主流检测技术被逐渐应用于临床诊断,其通量高、快速、高效等优势为遗传性疾病的诊断研究带来重大变革。本文将从智力障碍概述、病因分析、遗传性检测技术以及NGS在遗传性智力障碍诊断中的应用4个方面进行综述,以期为相关性智力障碍病人的临床诊断方法的选择提供帮助。

α地中海贫血筛查及诊断技术的进展

α地中海贫血在我国东南沿海地区发病率高,预防和准确诊断该病尤为重要。先进的实验筛查及诊断技术,是预防及治疗α地中海贫血的基石。本文综述近年来α地中海贫血的相关实验诊断技术的进展,以期增加对不同的实验诊断技术及发展的了解,为各种技术方法的应用和改进拓宽视野和思路。

1例基因KIF1A错义突变致常染色体显性智力障碍9型病例报道

目的通过系统遗传学分析揭示1例KIF1A基因突变是导致常染色体显性遗传智力障碍9型的原因。方法采用全外显子基因测序方法对昆明市儿童医院收治的5岁语言发育迟缓,走路不稳易跌倒患儿及家系进行检测,后经Sanger验证及家系分析。结果KIF1A基因的变异位点是导致患儿常染色体显性智力障碍9型致病原因;找到了导致该病的KIF1A基因一个新发致病位点c.914C>T(p.Pro305Leu)的错义突变。结论证实了全外显子检测是诊断该病的关键方法;丰富了K1F1A基因致病突变谱和表型特征;同时发现一个遗传病家族成员中可能同时存在多个遗传学病因。

《原本玉篇》残卷重文“野王案”考释

为了研究南北朝时期的重文现象,以顾野王编撰的《原本玉篇》残卷为研究对象,对顾野王勘定重文的音、形、义及重文字形之间关系进行考释。通过与东汉许慎的《说文解字》的比较,对两部典籍在重文的辑录方面加以考察,发现南北朝时期重文数量明显增加,字形变化丰富,文字之间相互换用和借用现象频繁。

忍冬藤胶囊的制备及其质量标准

目的制备忍冬藤胶囊,并建立其质量标准。方法以休止角、吸湿率、堆密度为指标,制备忍冬藤胶囊。然后,TLC法定性鉴别绿原酸、马钱苷,HPLC法测定绿原酸、马钱苷含有量。结果最佳制备工艺为微晶纤维素与淀粉比例3∶1,吸湿率10.7%,选用1号胶囊。TLC斑点清晰,阴性对照无干扰;绿原酸、马钱苷分别在10.2~306、7~525 mg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.8%、98.67%,RSD分别为1.79%、2.41%。结论该方法合理可行,专属性强,重复性好,可用于忍冬藤胶囊的质量控制。

山东省不同区域桔梗药材中桔梗皂苷D的测定

目的通过对山东省不同区域桔梗中桔梗皂苷D进行质量相关性研究,建立桔梗中桔梗皂苷D的含量测定方法。方法采用HPLC法测定桔梗皂苷D的含量,色谱条件为Zorbax SB C18色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)(25∶75),流速1.0 ml/min,检测波长210 nm,柱温25℃,进样量10μl。结果山东淄博生产的桔梗药材中桔梗皂苷D含量最高,质量最好,其次为山东青岛。结论该含量测定方法简便,准确,可作为测定桔梗皂苷D的定量方法。

达原饮胃漂浮片的提取工艺研究

目的建立达原饮胃漂浮片处方药材提取工艺。方法以芍药苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芒果苷和新芒果苷含量为评价指标,采用正交试验法筛选最佳提取工艺。结果通过正交试验和验证试验,达原饮胃漂浮片的最佳提取工艺为A_(2)B_(3)C_(2)D_(2),即85%乙醇,料液比为20倍量,提取时间为1 h,提取2次。结论达原饮胃漂浮片处方药材提取操作简单、工艺可行。

不同炮制方法对党参指标性成分含量的影响

目的研究不同炮制方法对党参指标性成分党参炔苷、党参多糖(codonopsis pilosula polysaccharides,CPPS)和5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)含量的影响。方法以党参生品及不同炮制品作为研究对象,采用HPLC法测定党参炔苷、5-HMF的含量,采用苯酚-硫酸法测定党参多糖的含量。结果党参炔苷含量依次为:生品>米炒>清蒸>麸炒>蜜炙;党参多糖含量依次为:生品>米炒>麸炒>蜜炙>清蒸;5-HMF含量依次为:清蒸>蜜炙>麸炒>米炒>生品。结论党参采用不同方法炮制后,所含指标性成分均有不同程度的变化,进而会影响党参的功效。

RP-HPLC法测定不同产地杉寄生药材中落新妇苷和芦丁的含量

目的:建立同时测定杉寄生药材中2种黄酮类成分落新妇苷和芦丁含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,并比较不同产地药材中2种成分的含量。方法:色谱柱为SHISEIDO-SPOLAR C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86,V/V),流速为1.0m L/min,检测波长为291 nm,柱温为35℃,进样量为10μL;对来源于广西和广东6个市/县的杉寄生药材进行含量测定及比较分析。结果:落新妇苷和芦丁的检测质量浓度线性范围分别为22~440、12~240μg/m L(r分别为0.999 6、0.999 1),平均加样回收率分别为99.44%、99.96%(RSD分别为1.38%、1.50%,n=9);杉寄生中落新妇苷含量在各省/区及各市/县之间均相似(0.862 5~0.901 1 mg/g),芦丁含量在同一省/区的市/县间相似,但在2个省/区之间差异较大(平均值分别为0.431 3、0.214 9 mg/g)。结论:本法简便、准确、稳定、重现性好,可用于杉寄生药材的质量控制。

半夏泻心结肠靶向片的制备及其体外释放行为

目的制备半夏泻心结肠靶向片,并考察其体外释放行为。方法以粉碎度、乙醇体积分数、乙醇用量、渗漉速度为影响因素,黄芩苷、盐酸小檗碱含有量为评价指标,正交试验优化提取工艺。制备包衣片后,小杯法测定黄芩苷、盐酸小檗碱体外释放度,筛选包衣处方。结果最佳提取工艺为粉碎度粗粉,乙醇体积分数70%,乙醇用量10倍,渗漉速度2~3 mL/(min·kg),黄芩苷、盐酸小檗碱含有量分别为14.687 4%、6.993 0%;最佳包衣处方为4.4%Eudragit S100,0.6%邻苯二甲酸二乙酯,1%滑石粉,包衣增重8%。结肠靶向片在0.1 mol/L HCl(2 h)、磷酸盐缓冲液(pH 6.8,4 h)中累积释放度小于5%,而在磷酸盐缓冲液(pH 7.8~8.0,1 h)中达到85%以上。结论半夏泻心结肠靶向片可实现结肠定位释药的目的。