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miR-369-5p对SD大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响 被引量:5
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作者 代晨 陶辉 +1 位作者 石开虎 徐盛松 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1693-1697,共5页
目的探讨miR-369-5p对大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)活化增殖的影响。方法差速贴壁离心法提取CFs,并于倒置相差显微镜下进行形态鉴定。分别向各组细胞瞬时转染miR-369-5p抑制物、miR-369-5p模拟物、阴性对照组(NC)24~4... 目的探讨miR-369-5p对大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)活化增殖的影响。方法差速贴壁离心法提取CFs,并于倒置相差显微镜下进行形态鉴定。分别向各组细胞瞬时转染miR-369-5p抑制物、miR-369-5p模拟物、阴性对照组(NC)24~48 h后,应用实时定量PCR检测miR-369-5p、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原前胶原A1(Col1A1)的蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;Western blot测定α-SMA和Col1A1蛋白表达。结果 miR-369-5p在模拟物组CFs中表达上调;而在抑制物组中的表达下降。Western blot结果显示,α-SMA和Col1A1蛋白在模拟物组中的表达明显降低,在抑制物组中的表达明显增加。CFs瞬时转染miR-369-5p模拟物后培养48 h,CFs增殖活力明显下降,而抑制物组的CFs活力明显增强。结论 miR-369-5p表达下调能够促进CFs的活化增殖,提示miR-369-5p是心肌纤维化的可能作用靶点。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 心肌纤维化 miR-369-5p 增殖 Α-平滑肌肌动蛋白 COL1A1
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DNA甲基化转移酶3A调控心肌成纤维细胞活化过程中胶原的表达
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作者 代晨 陶辉 +1 位作者 石开虎 徐盛松 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第12期1237-1241,共5页
目的目前关于甲基化对心肌纤维化形成的作用机制仍不明确。文章旨在探讨DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对心肌成纤维细胞活化过程中胶原表达变化的调控。方法选取50只乳鼠,提取培养SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs),进行细胞转染,根据CFs转染的试... 目的目前关于甲基化对心肌纤维化形成的作用机制仍不明确。文章旨在探讨DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对心肌成纤维细胞活化过程中胶原表达变化的调控。方法选取50只乳鼠,提取培养SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs),进行细胞转染,根据CFs转染的试剂分为5组:DNMT3A组(CFs转染重组的DNMT3A基因过表达质粒)、空载体组(CFs转染p EGFP-C3空载体质粒)、DNMT3A siRNA组(CFs转染小干扰DNMT3A siRNA)、DNMT3A siRNA NC组(CFs转染DNMT3A siRNA NC空载体质粒)、空白对照组(CFs不作转染处理)。ELISA检测空白对照组、DNMT3A组、DNMT3A siRNA组细胞上清液胶原变化。qRT-PCR检测5组相关mRNA的表达,Western blot法检测除DNMT3A siRNA NC组外其余4组CFs中ColⅠ、ColⅢ和DNMT3a蛋白的表达及CCK8法检测4组细胞的增殖活性。结果 DNMT3A组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原明显高于空白对照组(P<0.05),DNMT3A siRNA组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量明显低于空白对照组(P<0.05)。DNMT3A组的ColⅠ、ColⅢ及DNMT3A表达量较空白对照组、空载体组明显升高(P<0.05),而DNMT3A siRNA组明显低于空白对照组及空载体组(P<0.05)。DNMT3A组细胞活力(2.087±0.317)明显高于空载体组(1.063±0.223)、空白对照组(1.082±0.207),差异有统计学意义(P<0.05); DNMT3A siRNA组(0.463±0.087)明显低于空载体组、空白对照组(P<0.05)。结论 DNMT3A可以促进CFs的活化增殖,并且能够增加胶原的表达,从而对心肌纤维化产生促进作用。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 心肌纤维化 DNA甲基化转移酶3A 增殖 ColⅠ ColⅢ
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DNMT1在SD大鼠心肌成纤维细胞增殖中的作用 被引量:4
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作者 丁季飞 陶辉 +1 位作者 石开虎 徐盛松 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1129-1133,共5页
目的探讨DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)在SD大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖中的作用。方法取1~3 d的SD大鼠的心脏,剪碎消化后提取CFs,在显微镜下观察鉴定形态。细胞贴壁生长后分别向各组细胞转染s... 目的探讨DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)在SD大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖中的作用。方法取1~3 d的SD大鼠的心脏,剪碎消化后提取CFs,在显微镜下观察鉴定形态。细胞贴壁生长后分别向各组细胞转染siDNMT1(小干扰DNMT1)及阴性对照组(NC)24~48 h,运用qRT-PCR方法检测DNMT1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原前胶原A1(Col1A1)的mRNA表达量;CCK-8法检测细胞增殖活性;Western blot检测DNMT1、α-SMA和Col1A1的蛋白表达量;细胞周期实验检测细胞周期分布情况。结果CFs中siDNMT1组中DNMT1表达下调。Western blot及qRT-PCR结果显示,α-SMA和Col1A1在siDNMT1组中的表达明显下降。CFs转染siDNMT1后培养48 h,CFs活力明显下降。细胞周期实验表明CFs转染siDNMT148 h后,与NC组相比,G 0和G 1期细胞比例升高明显,细胞周期被阻滞明显。结论DNMT1表达下调能抑制CFs的增殖,提示DNMT1可能是心肌纤维化发生发展中的关键调节点。 展开更多
关键词 DNMT1 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 增殖 Α-SMA COL1A1
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丹参酚酸B通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进自噬减轻大鼠心肌纤维化的研究 被引量:11
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作者 杜琎 石开虎 +3 位作者 赵扬 胡定辉 李航 刘尊涛 《现代生物医学进展》 CAS 2019年第20期3812-3817,共6页
目的:研究丹参酚酸B(SA-B)能否通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进自噬,从而减轻大鼠心肌纤维化。方法:选用SD大鼠40只,完全随机化分为对照组、模型组、低剂量SA-B治疗组和高剂量SA-B治疗组,采用皮下注射异丙肾上腺素(ISO)构建大鼠心肌纤维... 目的:研究丹参酚酸B(SA-B)能否通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进自噬,从而减轻大鼠心肌纤维化。方法:选用SD大鼠40只,完全随机化分为对照组、模型组、低剂量SA-B治疗组和高剂量SA-B治疗组,采用皮下注射异丙肾上腺素(ISO)构建大鼠心肌纤维化模型。低、高剂量SA-B治疗组在造模同时灌喂丹参酚酸B水溶液,对照组和模型组分别灌胃等体积0.9%生理盐水。测定心重指数(HW/BW)和左心室重指数(LVW/BW);ELISA法测定心肌中Ⅰ型、Ⅲ型胶原水平;Western blot检测自噬相关蛋白PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、Beclin1、LC3-Ⅱ水平;大鼠心肌HE染色评估心肌纤维化程度。结果:与对照组比较,模型组中大鼠的心重指数、左心室重指数和心肌中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的水平升高(P<0.05),HE染色结果提示心肌组织发生明显的纤维化。模型组大鼠心肌细胞中的自噬相关蛋白PI3K、AKT、p-AKT、mTOR表达升高,Beclin1、LC3-Ⅱ表达较对照组明显降低(P<0.05)。SA-B组中心重指数、左心室重指数和心肌中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的水平明显降低,HE染色未见明显纤维化病灶,其自噬相关蛋白PI3K、AKT、p-AKT、mTOR表达降低,Beclin1、LC3-Ⅱ表达较模型组明显升高(P<0.05)。结论:丹参酚酸B能够抑制ISO所致的大鼠心肌纤维化,且具有剂量依耐性,其机制与抑制PI3K/AKT/mTOR传导通路促进细胞自噬密切相关。 展开更多
关键词 丹参酚酸B 自噬 心肌纤维化 PI3K/AKT/MTOR BECLIN1 LC3-Ⅱ Western BLOT
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Preliminary results of combined carotid endarterectomy and off-pump coronary artery bypass grafting in patients with coexistent carotid and coronary artery diseases 被引量:2
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作者 CHEN Xu-jun CHEN Xin +2 位作者 XIE Dong-hua shi kai-hu XU Ming 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2009年第24期2951-2955,共5页
Background Coexistent carotid and coronary artery diseases are common and patients with them remain at a high risk for perioperative stroke or myocardial infarction after coronary bypass surgery. The aim of this study... Background Coexistent carotid and coronary artery diseases are common and patients with them remain at a high risk for perioperative stroke or myocardial infarction after coronary bypass surgery. The aim of this study was to investigate the effect of combined carotid endarterectomy (CEA) and off-pump coronary artery bypass grafting (CABG) in patients with coexistent carotid and coronary artery diseases. Methods Between January 2002 and December 2007, consecutive patients with coexistent carotid and coronary artery diseases underwent one-stage unilateral CEA and off-pump CABG in Heart Institute of Nanjing First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University. Perioperative complications were assessed and follow-up was carried out. Results A total of 51 cases of isolated off-pump CABG and unilateral CEA, including 34 right and 17 left, were performed. The mean blocked time of carotid artery in CEA was (25.5_±7.0) minutes. The mean number of distal grafts per patient was 3.30±0.45. The mean ventilation time, intensive care unit stay, and postoperative hospital stay was (11.3±5.4) hours, (2.1±0.9) days, and (12.5±6.1) days respectively. None of the patients had stroke or myocardial infarct. There was one perioperative death due to acute cardiac failure, resulting in an operative mortality of 1.96%. Follow-up was completed for 47 patients (92.16%) with a mean follow-up of (39.5±12.5) months. None of the patients manifested stroke, new angina or newly developed cardiac infarct. No late death occurred. Conclusion Combined CEA and off-pump CABG is a safe and effective procedure in selected patients with coexistent carotid and coronary artery diseases. 展开更多
关键词 coronary artery bypass off-pump endarterectomy carotid coronary artery disease carotid stenosis
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