基于miR-223-3p研究淫羊藿苷治疗大鼠颅脑外伤后神经损伤的作用机制

目的基于miR-223-3p探讨淫羊藿苷治疗大鼠颅脑外伤神经损伤的作用机制。方法随机选取70只大鼠,建立局部脑挫裂伤模型,将建模成功的60只大鼠随机分为模型组、淫羊藿苷(30mg/kg)组、淫羊藿苷(30mg/kg)+阴性对照组和淫羊藿苷(30mg/kg)+miR-223-3pantagomir组,每组15只,另取15只大鼠作为对照组。给予相应药物进行干预,末次干预2 h后,对各组大鼠进行改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,m NSS);测定各组大鼠脑组织含水量;采用ELISA法检测各组大鼠脑组织白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和IL-1β水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠脑组织病理变化;采用TUNEL染色法观察各组大鼠脑组织神经元凋亡情况;采用q RT-PCR法检测各组大鼠脑组织miR-223-3p和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-bindingoligomerizationdomain-likereceptor protein 3,NLRP3)m RNA表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠脑组织NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达情况;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-223-3p对NLRP3的靶向性。结果与模型组比较,淫羊藿苷组大鼠m NSS显著降低(P<0.05),脑组织含水量显著降低(P<0.05),脑组织IL-18和IL-1β水平显著降低(P<0.05);脑组织损伤面积和红细胞数减少;神经元细胞凋亡指数显著降低(P<0.05);脑组织miR-223-3p mRNA表达水平升高,NLRP3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);脑组织NLRP3、Caspase-1和Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与淫羊藿苷组比较,淫羊藿苷+miR-223-3pantagomir可显著逆转上述指标(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示,miR-223-3p可靶向调控NLRP3。结论淫羊藿苷对大鼠颅脑外伤神经损伤具有改善作用,其作用机制可能与调控miR-223-3p从而靶向抑制NLRP3表达、抑制炎性反应、减少神经元细胞凋亡有关。

小干扰RNA介导神经纤毛蛋白-1对西地尼布治疗脑胶质细胞瘤细胞学功能的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)介导神经纤毛蛋白-1(NRP-1)对西地尼布(Ced)治疗脑胶质细胞瘤细胞学功能的影响,为脑胶质细胞瘤患者的个体化诊疗提供依据。方法选取3种恶性程度不同的人脑胶质细胞瘤细胞系U87、U251和H4进行研究。用细胞计数法(CCK-8)检测4个不同浓度梯度(0,3,6,9 mg·mL^(-1))西地尼布处理后3种胶质细胞瘤细胞系增殖能力以筛选其最适治疗浓度。本研究共3种细胞类型,每种细胞类型分为4组。NRP-1-siRNA组:NRP-1-siRNA序列分别转染脑胶质瘤细胞; Ced-NRP-1-siRNA联合组:在NRP-1-siRNA组基础上加入最适治疗浓度西地尼布;西地尼布组:最适治疗浓度西地尼布处理;空白对照组:未做任何处理。用CCK-8法和流式细胞仪分别检测各组细胞增殖和凋亡能力;用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测各组细胞中NRP-1mRNA和血管内皮细胞生长因子受体-1(VEGFR-1)蛋白表达水平。结果 U87细胞的空白对照组、西地尼布组、NRP-1-siRNA组和Ced-NRP-1-siRNA联合组在第4天细胞凋亡率分别为(6. 46±0. 56)%,(10. 81±1. 19)%,(20. 16±1. 89)%和(32. 48±1. 77)%;U251细胞的空白对照组、Ced组、NRP-1-siRNA组和Ced-NRP-1-siRNA联合组在第4天细胞凋亡率分别为(9. 12±0. 62)%,(13. 68±1. 08)%,(15. 45±0. 75)%和(22. 34±1. 64)%;与U251细胞比较,U87细胞各组细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。与U251细胞比较,U87细胞各组细胞NRP-1 mRNA和VEGFR-1蛋白表达水平增高,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 NRP-1在U87中表达水平高于U251和H4,靶向敲除其可增强西地尼布治疗脑胶质瘤疗效,以高恶性U87更为明显,为脑胶质瘤的个体化靶向治疗奠定了基础。

基于Notch信号转导通路洋川芎内酯Ⅰ对大鼠颅脑损伤后中枢神经再生修复作用

目的研究洋川芎内酯Ⅰ(SEⅠ)基于Notch信号转导通路对颅脑损伤大鼠中枢神经再生修复功能的影响。方法大鼠随机分为假手术组,模型组,SEⅠ低(SEⅠ-L,36 mg·kg^(-1))、中(SEⅠ-M,72 mg·kg^(-1))、高(SEⅠ-H,144 mg·kg^(-1))剂量组以及SEⅠ(144 mg·kg^(-1))+γ分泌酶抑制剂DAPT(50μg·kg^(-1))组,每组15只。采用改良Feeney自由落体法制备大鼠颅脑损伤模型,于造模成功后24 h内完成第一次给药,连续给药7 d;假手术组仅开颅不致伤。给药结束后对大鼠进行神经功能缺损评分(NSS);采用ELISA法检测外周血清脑源性神经营养因子(BDNF)与神经生长因子(NGF)含量;HE染色观察海马齿状回颗粒下区组织病理变化,q RT-PCR法检测海马组织中Notch1 mRNA的表达情况,Western blot法检测海马组织中Notch1、Hes1、Hes5蛋白表达水平。结果HE染色结果显示,假手术组大鼠海马形态正常,未见损伤;模型组存在明显结构异常,神经元坏死、排列紊乱;SEⅠ3个剂量组随药物剂量升高,神经元排列逐渐整齐有序,坏死情况改善;SEⅠ+DAPT组与SEⅠ-H组相比,神经元改善情况较差。与假手术组比较,模型组大鼠NSS,外周血清BDNF、NGF含量以及海马组织中Notch1 mRNA和Notch1、Hes1、Hes5蛋白表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,SEⅠ3个剂量组NSS均显著降低,BDNF、NGF含量以及Notch1 mRNA和Notch1、Hes1、Hes5蛋白表达均显著升高(P<0.05),且存在剂量依赖性(P<0.05);与SEⅠ-H组比较,SEⅠ+DAPT组NSS显著升高,BDNF、NGF含量以及Notch1 mRNA和Notch1、Hes1、Hes5蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论SEⅠ能够促进颅脑损伤大鼠中枢神经的再生修复,其机制可能与Notch信号转导通路有关。

Stage 3B Coats＇ disease in a premature and low-birth-weight infant

Coats＇ disease is characterized by the formation of telangiectatic and microaneurysms changes of theretinal vessels and a large amount of yellowish subretinal exudates but withont appreciable signs of retinal or vitreal traction. It usually occurs unilaterally and mainly in young males. According to the appearance of the fundns, Coats＇ disease has been classified as stage 1-5.z The age at diagnosis has been as young as 3 months m one case,