食源性甲型肝炎病毒快速检测技术研究进展

病毒在食源性疾病的爆发中起着至关重要的作用,其中,甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)感染后能够致人衰弱,并引发急性肝衰竭。由于其传染迅速,影响范围广,HAV污染已经给消费者带来了严重的健康风险,且在全球范围内造成了大规模的食源性疫情和经济损失。因此,早期快速准确的检测HAV对于食品安全和疫情暴发的溯源至关重要,以便及时确定并召回受污染的食品,防止感染的进一步发生。传统的HAV检测方法由于检出率不高以及病毒在细胞内的培养周期长等问题,往往耗时费力,无法快速有效地对其进行检测。本文对目前报道较多的HAV快速检测技术进行了阐述和梳理,对各项技术的检出限、检测时间以及优缺点进行了比较,并对HAV快速检测技术研究进行了展望,为后续HAV的快速检测研究提供依据,也有助于进一步探讨与开发HAV快速检测的新技术,以有效防止HAV的传播与危害。

中药煮散的历史渊源、应用特点及现代化研究进展

中药煮散历史悠久,具有良好的临床疗效,且溶出速度快,药材利用度高,可节省药材资源、降低医疗成本。如今我国优质野生中药材资源日益匮乏,造成中药材市场供需失衡,中药煮散具有不容忽视的研究与开发价值。本文通过综述中药煮散的历史渊源,与传统剂型对比分析煮散的应用特点,阐述煮散基于质量控制、药效学研究和临床研究的现代化研究概况,探讨了煮散现代化发展中存在的问题,为传承与发展中药煮散、缓解中药资源紧张提供路径和参考依据。

药用蛇及其水提物的DNA微型条形码鉴别研究

目的:建立药用蛇及其水提物的DNA微型条形码鉴别方法。方法:通过比对药用蛇及常见11种混伪品的16S rRNA序列,建立约220 bp的蛇类DNA微型条形码,并与16S rRNA标准条形码比较,对药用蛇原料及水提物进行测序鉴定。采用MEGA-X软件分析遗传距离并以邻接法(NJ)构建系统发育树。结果:DNA微型条形码引物对药用蛇原料及水提物的扩增率为100%,鉴定率为100%。药用蛇及其混伪品的种内平均遗传距离均小于种间平均遗传距离,且各物种在NJ系统发育树中具有良好的单系性,并与16S rRNA标准条形码原料的鉴定结果一致。结论:该研究建立的蛇类DNA微型条形码可有效实现药用蛇原料及水提物等制品的物种鉴别,为保障蛇类原料、临床汤剂及配方颗粒等药品的安全性和有效性提供了技术支撑。

不同基原水蛭特征多肽鉴别研究

本研究通过建立一种水蛭特征肽质谱测定方法,对不同基原水蛭进行鉴别,为水蛭的鉴别与质量评价提供依据。将供试品进行提取及胰蛋白酶酶解,选择质荷比(m/z)601(双电荷)→630.35和m/z 601(双电荷)→743.44,m/z 475(三电荷)→588.76和m/z 475(三电荷)→662.30作为检测离子对,采用UPLC-MS/MS液质联用仪、Agilent ZORBAX SB C 18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样量为2μL。结果显示蚂蟥能检出水蛭多肽Ⅰ和水蛭多肽Ⅱ,柳叶蚂蟥只能检出水蛭多肽Ⅱ,水蛭只能检出水蛭多肽Ⅰ,故通过该质谱鉴别方法能区分蚂蟥、柳叶蚂蟥与水蛭三种不同基原。采用SIMCA-P 14.0软件对22批样品进行偏最小二乘法分析,可将不同基原水蛭归为三类。本研究所建立的方法专属性强、灵敏度高、重复性好,可用于区分不同基原的水蛭,提高其质量控制水平,为相关药品临床用药的安全性和有效性提供了参考依据。

三化汤化学成分鉴定

目的 利用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS法对三化汤化学成分进行鉴定。方法 分析采用Waters CORTECS T3色谱柱(2.1 mm×150 mm, 1.6μm);流动相乙腈-0.2%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温30℃;检测波长260 nm;加热电喷雾离子源(HESI);正负离子监测模式;质量扫描范围m/z 100~1 200。采用Xcalibur 2.1软件并结合文献报道、质谱数据对化学成分进行定性鉴别。结果 从三化汤中共鉴定出166个化合物,包括黄酮类、蒽醌及蒽酮类、香豆素类、木脂素类、生物碱类等,其中对照品指认的成分有30种。结论 该方法可实现对三化汤化学成分的快速鉴别,为后续探究该经典名方药效物质基础、建立其质量标准奠定基础。

基于高通量测序分析建曲发酵过程中微生物多样性变化

目的:明确建曲在发酵过程中微生物种类、优势类群的组成和功能特征的变化。方法:通过高通量测序技术对建曲不同发酵时间点的细菌和真菌群落结构和功能进行分析。结果:建曲发酵过程中,真菌的优势类群为曲霉菌属(Aspergillus, 36.57%),其中溜曲霉(Aspergillus tamarii, 22.30%)和小菌核曲霉(Aspergillus minisclerotigenes,21.19%)为发酵后的优势菌种。细菌由红串红球菌(Rhodococcus erythropolis,29.56%)和类肠膜魏斯菌(Weissella paramesenteroides,25.24%)先后成为优势类群。在整个发酵过程中,建曲的优势菌群均出现明显的变化,反映了建曲发酵过程中存在清晰的群落演替。功能预测分析显示,建曲中存在丰富的与代谢途径相关的真菌和细菌功能基因,且不同发酵时间点微生物发挥的功能也不同。结论:建曲发酵后的真菌主要为溜曲霉和小菌核曲霉,细菌主要为红串红球菌和类肠膜魏斯菌,不同发酵时间点其菌群相对丰度和功能有所不同,为后续建立稳定可控的建曲现代发酵工艺提供参考依据。

基于HPLC指纹图谱成分含量和化学模式识别不同产地防风与水防风

目的基于特征图谱及主要成分的含量,并结合化学模式,比较防风与水防风的化学成分差异。方法Phenomenex Kinetex XB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长254 nm。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A)”进行相似度评价,建立共有模式。以色谱峰信息为数据来源,采用3种化学模式识别方法综合分析防风、水防风药材差异。结果建立了不同产地防风的HPLC指纹图谱共有模式,标定了17个特征峰,相似度基本>0.9。聚类分析和主成分分析能对不同产地防风及伪品水防风进行明显区分;正交偏最小二乘法判别分析表明导致差异的主要化学标记物为升麻素苷、升麻素、6″-O-apiosyl-5-O-methylvisammiosid、亥茅酚苷、补骨脂素、花椒毒素、3-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素。5-O-甲基维斯阿米醇苷与亥茅酚苷含量之和与升麻素含量的比值在防风与水防风中区别较大,具有一定的鉴别意义。结论该方法可用于分析防风、水防风药材质量的差异性,为规范防风药材使用的评价提供参考。

基于HPLC指纹图谱和含量测定的不同产地半边莲药材质量评价研究

建立半边莲药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并对有效成分地奥司明和蒙花苷的含量进行测定,为不同产区半边莲药材的质量评价提供参考。HPLC指纹图谱的建立采用Thermo Acclaim C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液,流速为1.0 mL/min,梯度洗脱,检测波长为340 nm,柱温为35℃,进样量为10μL;通过质谱分析结合对照品比对,对共有峰进行鉴定;借助中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.130723版本)对指纹图谱进行相似度评价,通过聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别式分析(OPLS-DA)比较不同产区半边莲药材的质量差异;并对半边莲药材地奥司明和蒙花苷的含量进行测定。结果显示,18批半边莲药材指纹图谱具有11个共有峰,质谱分析和对照品比对,共确证4个共有峰,分别为木犀草素7-二葡萄糖苷酸、海常黄苷、地奥司明和蒙花苷;与mzCloud标准数据库比对,对另外4个共有峰进行了结构预测。相似度评价结果显示,河南、安徽两个产区的半边莲药材较为相似,另外4个产区的半边莲药材相似度较为一致。HCA和PCA均将不同产区的半边莲药材分为两类,其中河南、安徽两个产区的样品归为一类,湖北、贵州、江西和湖南产区的样品归为另一类,结果与相似度评价结果基本一致。OPLS-DA发现7个差异性标志物,根据VIP值排序,分别为峰2>峰1>峰10>峰11>峰3>峰8>峰5。含量测定结果显示,3批河南产区和安徽产区的半边莲药材地奥司明和蒙花苷的含量明显高于其他产区。该方法可以有效评价不同产区半边莲药材的质量差异性,为其质量控制和药材选购提供参考。

基于UPLC特征图谱和多成分定量的不同产地绵茵陈药材质量评价

目的:建立绵茵陈药材超高效液相色谱法(UPLC)特征图谱和6个酚酸类成分含量测定方法,为全面评价其质量提供依据。方法:采用UPLC建立绵茵陈药材特征图谱,对不同产地药材进行相似度评价和聚类分析;同时对6个酚酸类成分含量进行测定。结果:建立了绵茵陈UPLC特征图谱,确定7个共有特征峰,指认了其中6个特征峰,19批绵茵陈药材相似度均大于0.95;聚类分析可将不同产地的药材分为两类,表明不同产地药材存在一定差异;所建立的特征图谱方法可有效地区分不同采收期的花茵陈和绵茵陈药材;含量测定结果显示,河南和甘肃产地药材绿原酸含量和6个酚酸类成分总含量较高且稳定。结论:该方法可以有效评价不同产区绵茵陈药材的质量差异性,为其质量控制和药材选购提供参考。

桑叶药材芦丁含量及其质量评价研究

目的 测定桑叶药材芦丁含量及高效液相(HPLC)特征图谱,结合多种化学计量分析方法综合评价桑叶药材质量。方法 采集34批不同产地的桑叶药材HPLC特征图谱,通过相似度评价,化学模式识别和AHPCRITIC混合加权法对桑叶特征成分进行差异性研究。另测定桑叶芦丁含量,评价其与桑叶药材色度值的相关性。结果 34批桑叶样品确定了7个共有峰,指认了其中3个成分;各批样品HPLC特征图谱与对照图谱的相似度均>0.903,聚类分析和主成分分析结果表明34批桑叶样品可大致分成3类,正交偏最小二乘判别分析表明3(隐绿原酸),5,1(新绿原酸),7号色谱峰为区分桑叶质量差异的标志物,AHP-CRITIC混合加权法结果显示综合评分>42分的桑叶药材质量较优。桑叶芦丁含量与色度值的相关性分析结果表明偏亮黄色的桑叶芦丁含量较高。结论 本研究方法能较全面、真实地反映桑叶药材的内在质量,可为桑叶药材的质量控制提供参考。

新型口服抗凝药物治疗高龄非瓣膜性房颤患者的疗效探讨

目的观察高龄非瓣膜性心房颤动(房颤)患者采用新型口服抗凝药物治疗的有效性。方法236例高龄非瓣膜性房颤患者,随机分为普通治疗组与抗凝治疗组,每组118例。普通治疗组接受普通药物治疗,抗凝治疗组接受新型口服抗凝药物治疗。比较两组患者治疗前后的凝血功能指标(凝血酶原时间、凝血酶时间、纤维蛋白原、活化部分凝血活酶时间),不良事件发生情况,栓塞事件发生情况。结果治疗后,两组患者的凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血活酶时间长于本组治疗前,纤维蛋白原低于本组治疗前,且抗凝治疗组患者的凝血酶原时间(13.72±2.11)s、凝血酶时间(13.27±1.44)s、活化部分凝血活酶时间(38.44±0.56)s长于普通治疗组的(11.42±2.52)、(11.67±2.52)、(34.52±1.76)s,纤维蛋白原(3.76±0.42)g/L低于普通治疗组的(4.11±1.50)g/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。抗凝治疗组不良事件发生率5.1%低于普通治疗组的12.7%,差异具有统计学意义(P<0.05)。抗凝治疗组栓塞事件发生率4.2%低于普通治疗组的11.9%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论高龄非瓣膜性房颤患者采用新型口服抗凝药物治疗,可以更好地调整患者凝血功能,降低不良事件和栓塞的发生率,临床可以推广应用。

混菌发酵对产纤维素酶的影响及菌剂在大豆秸秆降解中的应用

为提高秸秆还田过程中的腐解效率,减轻还田产生的病害加重现象,以稻草、麸皮为基本培养基,以黄绿木霉菌(拮抗真菌)、角毛壳菌及绿色木霉菌(纤维素高效降解微生物)为研究材料,测定3种不同菌种及混合菌发酵液处理下滤纸酶、棉花酶与羧甲基纤维素酶的活性变化。通过秸秆翻埋试验测定混菌发酵液和商业菌剂处理大豆秸秆发酵前后纤维素、半纤维素含量变化并探讨最适秸秆翻埋长度和深度。探讨混菌培养对纤维素酶产生能力及对大豆秸秆纤维素与半纤维素降解速率的影响。结果表明:滤纸酶活性、棉花酶活性与羧甲基纤维素酶活性均为黄绿木霉菌、角毛壳菌和绿色木霉菌3株菌混菌发酵的产酶能力最强,混合菌发酵的3种纤维素酶活性分别为385. 12,454. 30和495. 12 U。混菌发酵液处理与商业菌剂处理的大豆秸秆粉纤维素与半纤维素含量与空白对照差异显著,混菌发酵液处理的纤维素与半纤维素降解率分别可达66%和76%。大豆秸秆降解率与秸秆强度的变化说明:在大豆秸秆长度为3 cm,翻埋深度为10 cm时,秸秆降解率最高。添加混合菌剂的处理的秸秆降解率较对照提高50%以上,同时秸秆的强度降低约5倍,穿刺力降低。结果证实了3株不同真菌在秸秆降解中复合应用的可行性,可作为大豆秸秆还田中有效的腐解微生物资源。

通过AMH、抑制素B探讨腹腔镜卵巢囊肿剥除术对卵巢功能的影响

目的 通过患者血清抗苗勒管激素(AMH)、抑制素B(INHB)水平的变化情况,探讨腹腔镜下卵巢囊肿剥除术对卵巢储备功能的影响。 方法 选择2016年6月至2017年6月期间在我院经腹腔镜手术诊治的98例卵巢囊肿患者为研究对象,根据囊肿病理类型、直径大小以及发生部位分别分为内异症组与非异症组、<5cm组与≥5cm组、单侧组与双侧组。测定所有患者术前及术后3个月的AMH、INHB、E2、FSH及LH,同时进行窦卵泡计数(AFC),统计分析术前术后各激素水平的变化。 结果 术后3个月共90例患者完成回访。内异症组术后AMH、INHB下降的程度较非内异症组更为显著(P<0.05);囊肿直径≥5cm的患者术后血清AMH下降的程度较<5cm的患者显著(P<0.05),而INHB下降程度差异无统计学意义;囊肿单双侧的患者术后血清AMH和INHB下降程度差异均无统计学意义(P>0.05)。 结论 腹腔镜下卵巢囊肿剥除术对卵巢储备功能有一定程度的损坏,且对卵巢子宫内膜异位囊肿、囊肿直径≥5cm的患者更为显著。

鸡内金炮制前后化学成分变化研究

目的:建立鸡内金质量评价方法,研究其炮制前后的化学成分变化。方法:分别采用薄层鉴别、质谱检查以及HPLC特征图谱对鸡内金炮制前后的样品进行分析,寻找其差异成分,并采用偏最小二乘法分析(PLS-DA)对氨基酸类成分进行分析。结果:18批炒鸡内金样品中均能检出与鸡内金样品不一致的斑点,并能明显检出质荷比为(m/z)706.41→369.3、m/z 706.41→300.2的特征峰,偏最小二乘法分析(PLS-DA)结果显示鸡内金与炒鸡内金各分为一类。结论:鸡内金炮制后的成分发生明显变化,本研究建立的方法为鸡内金质量评价提供了参考方法。

加减温经汤单煎与合煎颗粒治疗寒凝血瘀型功能性月经病的随机对照研究

目的评价加减温经汤以不同煎取制粒方法治疗寒凝血瘀型功能性月经病的临床疗效与安全性。方法采用非劣性、随机、双盲加安慰剂对照试验设计,将330例寒凝血瘀型功能性月经病患者分为单煎制粒组109例,合煎制粒组114例,安慰剂组107例,分别给予加减温经汤单药煎取制成的配方颗粒和混合煎取制成的合煎颗粒,以及安慰剂颗粒,疗程8周。采用COX痛经症状量表和月经不调症状量表评定各组患者治疗前后症状评分变化,评价各组患者临床疗效及安全性,以及随访3个月复发率,采用非劣性检验可信区间法对单煎制粒组与合煎制粒组疗效进行分析。结果 (1)治疗后单煎制粒组痛经和月经不调症状评分均较治疗前下降,且均低于安慰剂组,差异具有统计学意义(P <0.001)。(2)治疗后单煎制粒组与合煎制粒组痛经、月经不调临床总有效率均高于安慰剂组,差异具有统计学意义(P <0.001)。(3)随访3个月单煎制粒组与合煎制粒组痛经、月经不调复发率均优于安慰剂组,差异具有统计学意义(P <0.05)。(4)3组试验中未出现严重不良事件。(5)单煎制粒组与合煎制粒组痛经、月经不调疗效有效率差值的95%可信区间下限分别为-4.02%、-10.21%,均大于非劣性界值(-δ=-15%),说明单煎制粒组疗效不劣于合煎制粒组。结论加减温经汤单煎与合煎颗粒均可有效治疗寒凝血瘀型功能性月经病,单煎或合煎的制粒方法对疗效与安全性无影响。

口腔综合治疗台治疗用水污染危险因素调查

目的了解上海市徐汇区口腔综合治疗台治疗用水污染状况,并分析污染的危险因素。方法采集上海市徐汇区9家医疗机构34台综合治疗台不同时段三种管道的治疗用水,进行细菌菌落总数计数,同时收集相关资料进行危险因素分析。结果上午开诊前、第一个病人诊疗后、上午诊疗结束后治疗用水合格率分别为57.6%,70.7%,87.0%。综合治疗台当日的使用时间短是影响治疗用水菌落总数的主要因素。治疗用水合格率的危险因素分析中,回吸强度大、采用储水罐供水方式、水处理设备管理水平差及当日管道冲洗时间短都是独立的危险因素。结论口腔综合治疗台治疗用水污染情况严重,存在引起医院感染的隐患。影响污染状况的因素较多,需要有综合措施对综合治疗台水路污染状况进行控制。

小学规模对学生学业成绩的影响研究——以明德品牌建设工程项目为例

目前国外对于学校规模与学生学业成绩的相关研究认为在初等教育阶段学校规模与学业成绩有较强的相关性,小规模学校更有利于学生学业成绩提高。而国内对学校规模的看法却并不统一,本研究将运用调查问卷法,以全国11省507所明德小学的校长、教师以及学生为研究对象,对学校规模与学生学业成绩之间的相关影响进行研究。采用相关分析,并在此基础上建立回归方程式。发现学校规模是影响学生学业成绩的重要因素,并且呈正相关关系。

水平井抽水引起的咸水锥进过程试验与模拟研究

滨海地区的海水入侵使地下水呈上层淡水、下层咸水的分布结构,在开采地下水时易发生咸水锥进现象,使抽取的地下水发生咸化。水平井能有效延迟深层咸水的锥进过程,可有效避免上层地下淡水的污染。开发了模拟水平抽水井抽水引起的咸水锥进过程的试验设备,实现了水平抽水井以恒定流量抽水所导致的咸水锥进过程;然后基于Dagan和Bear竖直井的解析解(DB模型),推导出了水平井抽取无限侧边界地下水引起的咸水锥进过程的解析解,解析解显示咸淡水界面为初始水平、中间突出、向上锥进至井口的锥进过程,与试验过程的中间阶段的锥进过程较为符合;随后利用TOUGH2/T2DM模拟了水平井抽水引起的咸水锥进过程的试验,数值模拟得到的咸淡水界面向上锥进的模拟结果与试验结果拟合较好;在数值模拟的基础上,进一步分析了边界条件和介质的非均质性对咸水锥进过程的影响。研究通过模型试验、解析解模型和数值模拟模型研究了试验室尺度的咸水锥进过程,可为咸水锥进问题的进一步研究提供技术支撑。

饲料中添加复合芽孢杆菌对石斑鱼生长、免疫及肠道菌群的影响

研究以斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)为试验对象,将分离自健康斜带石斑鱼肠道的3株芽孢杆菌Bacillus aerius B18、 B. aryabhattai B20和B. licheniformis B25以等比例浓度添加至饲料中,制成含菌量1×107CFU/g的饲料,评价其对石斑鱼生长、免疫及肠道菌群的影响。选取120尾平均体重3.5 g的健康石斑鱼,随机分为2组,每组3个重复,每个重复20尾鱼。试验期28 d。结果显示,与对照组相比,复合芽孢杆菌组石斑鱼的体增重和特定生长率显著提高(P<0.05),饵料系数显著降低(P<0.05),石斑鱼血清中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶及补体C3的活性显著提高(P<0.05),石斑鱼脾中免疫基因MHCIa、IgM、MHCIIa和CD8a的表达量显著上调(P<0.05),石斑鱼肠道中有利于改善鱼类肠道健康水平的厚壁菌门(Firmicutes)、罗姆布茨菌属(Romboutsia)和鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)的丰度显著增加(P<0.05)。研究表明,该复合芽孢杆菌具有促进斜带石斑鱼生长、增强鱼体免疫力和改善肠道健康的作用。

二基原赤芍HPLC指纹图谱的建立和5种成分的含量测定

目的:建立二基原赤芍HPLC指纹图谱,并同时测定5种指标性成分(没食子酸、羟基芍药苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、丹皮酚)的含量,评价其综合质量。方法:采用Agilent TC-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%冰醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长260 nm;柱温30℃;流速0.8 mL/min。结果:建立了二基原赤芍HPLC指纹色谱图,其中北赤芍标定23个共有峰,川赤芍标定13个共有峰;5种成分中没食子酸在2.022～32.346μg/mL、羟基芍药苷在4.160～99.840μg/mL、芍药苷在47.934～287.602μg/mL、苯甲酰芍药苷在5.040～13.440μg/mL、丹皮酚在0.934～3.268μg/mL浓度范围内线性关系良好,r均>0.9990,加样回收率分别为101.5%、102.1%、98.4%、99.3%、101.8%。结论:HPLC指纹图谱结合相似度评价和5种成分定量测定分析法,可快速、准确地鉴别北赤芍与川赤芍;不同基原的赤芍化学成分存在较大差异,应制定规范的赤芍药材质量标准,指导临床合理、安全、有效用药。