牛副结核病的病原学和防控研究进展

牛副结核病是一种由副结核分枝杆菌引起的主要影响反刍动物的慢性消耗性疾病,也是一种潜在的人兽共患病。该病可导致腹泻、渐进性消瘦,甚至死亡,增加生产成本,是影响全球奶牛业最严重的传染病之一。牛副结核病难以诊断,病原分离周期长,我国相关研究报道较少且存在误区。因为潜伏期长,患病动物在感染早期体液免疫水平低,排菌量低,导致细菌分离培养和抗体检测都很难做出诊断;即使最灵敏的实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测方法也只能在部分感染动物的粪便样品中检出副结核分枝杆菌;皮肤变态反应试验和γ干扰素释放试验等方法易受其他结核分枝杆菌的影响,也难以普及。本文旨在提炼性的阐述牛副结核病的病原学研究进展,总结其流行病学和防控策略等信息,以期为该病的预防和控制工作提供参考。

基于不同抗原的犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金抗体试纸条的制备和比较

为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,分别对上述试纸条进行敏感性和特异性比较。结果显示:Omp31抗原的敏感性最高,其次是F14和BP26,而全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白的敏感性较差;特异性上,使用由5种抗原制备的胶体金试纸条检测30份犬布鲁氏菌病阴性血清,结果均为阴性;5种试纸条与沙门氏菌、大肠杆菌(O157)、大肠杆菌(H7)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、军团菌阳性血清均不发生交叉反应。另外,由F14和BP26制备的试纸条可识别羊布鲁氏菌病阳性血清,而由Omp31、全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白制备的试纸条均不能识别牛、羊布鲁氏菌病阳性血清。综上所述,Omp31、F14和BP26可作为制备犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金检测卡的备选抗原。本研究为粗糙型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病的诊断提供了技术支撑。

牛结核病荧光定量PCR引物探针的组合筛选比较

为比较牛结核病荧光定量PCR(qPCR)不同引物探针组合的特异性和敏感性,验证其临床检测效果,选取国际、国家、行业、地方标准及文献报道的11组qPCR鉴定引物探针组合,采用牛分枝杆菌基因组DNA国家二级标准物质、参考菌株核酸和临床奶样对其进行比较、验证。结果显示:11组引物探针均无非特异性扩增,表现出良好的特异性;国标IS1081引物检测灵敏度最高,最低检测限可达1.4×10^(-1);除国标Mtb(结核分枝杆菌)引物外,其他引物探针组合重复性良好(CV<10%);30份临床样品中国标IS1081引物阳性样品检出率明显高于其他引物。结果表明,国标IS1081引物探针组合特异、灵敏、临床检测效果更优,推荐用于实验室qPCR检测牛结核病。

重组酶介导等温扩增技术(RAA)在病原微生物检测中的应用进展

重组酶介导等温扩增(RAA)是一种恒温快速核酸扩增技术,是重组酶等温扩增技术中具有代表性和前沿性的检测技术,其弥补了现有核酸体外扩增技术需要热循环的局限性,使得核酸体外扩增更加简便快捷,目前已被广泛应用于动物疫病检测。本文介绍了RAA技术的检测原理、引物探针设计及优缺点,综述了其在病毒、细菌、寄生虫及抗生素耐药基因检测等方面的应用进展,总结了国内现有RAA技术标准及检测产品开发情况,以期为拓展RAA技术的应用提供参考。

微滴式数字PCR定量检测伯氏考克斯氏体方法的建立及应用

为建立伯氏考克斯氏体(Coxiella burnetii,Cb)微滴式数字PCR(Droplet Digital PCR, ddPCR)检测方法,研究以Cb IS1111基因为靶基因,并针对基因保守区域设计了特异性引物和探针,以使反应的条件更加完善,从而构建了ddPCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性及重复性作出了评估。结果显示,所采用的ddPCR方法最低可检测的浓度为0.52 copies/μL,敏感性较高;与动物布鲁氏菌、牛结核分枝杆菌、土拉杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌无交叉反应,特异性强;组内重复和组间重复变异系数均小于10%,重复性好。使用本实验建立的方法检测了42份疑似感染的临床样品,检测结果与荧光PCR鉴定结果一致。表明建立的ddPCR方法的特异性强、敏感性高、重复性和准确性好,可用于Cb的快速检测和精准定量,对Cb感染的防控具有重要意义。

荧光免疫层析技术原理及其在病原微生物检测中的研究进展

荧光免疫层析技术是近年来开发的一种新型免疫检测技术,以荧光微球为标记物,既保留了传统胶体金试纸条检测速度快、价格便宜、操作简单、携带方便等优点,又通过荧光技术提高了检测的灵敏度。荧光免疫层析技术对实验设备、资源的要求低,特别适合在条件有限的实验室及野外开展动物疾病快速诊断。本文详细介绍了荧光免疫层析技术的原理及其在病毒、细菌、寄生虫等病原检测方面的应用研究,以期为病原微生物现场快速诊断技术的开发提供参考。

羚角钩藤汤辅助西医治疗对中风后偏瘫患者中医症候、肢体功能的影响研究

目的:观察羚角钩藤汤辅助西医治疗对改善中风后偏瘫患者中医症候、肢体功能的影响。方法:选取2020年7月—2022年2月平顶山市第二人民医院收治的129例中风后偏瘫患者作为研究对象,经随机数表法分为观察组(65例,予以中药羚角钩藤汤+西医治疗)和对照组(64例,仅予以西医治疗),比较两组患者治疗后的中医症候、肢体功能及脑组织血液流变学改善情况,对所有患者开展为期6个月的短期随访,观察患者脑神经功能恢复情况以及药物相关副反应发生情况。结果:治疗后,观察组的头痛眩晕、心烦易怒等主证以及面赤身热,气粗口臭等次证均低于对照组,差异有统计学意义(t=3.252、2.760、2.895、3.255,P<0.05);治疗后,观察者的Fugl-Meyer运动功能评分量表(FMA)高于对照组,差异有统计学意义(t=3.016、3.220,P<0.05);治疗后,观察组血浆黏度(PSV)、全血高切黏度(HSV)、全血低切黏度(LSV)均低于对照组,差异有统计学意义(t=3.021、3.000、3.498,P<0.05);随访期间,观察组的卒中量表(NIHSS)评分低于对照组,改良Barthel指数(MBI)评分高于对照组,差异有统计学意义(t=2.950、3.081,P<0.05);随访期间,观察组的不良反应发生率略高于对照组,差异无统计学意义(χ^(2)=0.160,P>0.05)。结论:在予以中风后偏瘫患者常规西医治疗的同时采用羚角钩藤汤配合治疗可促进患者症候恢复,还可以有效改善患者肢体功能、促进脑组织血液流变学及神经功能恢复,且此疗法安全性较高。

牛病毒性腹泻病毒1型RT-RAA快速诊断方法的建立

为解决牛病毒性腹泻病毒(BVDV)现场快速诊断难点,提升应急响应速度,根据BVDV 1型基因组5’-UTR保守区序列设计特异性引物和探针,建立了BVDV 1型重组酶聚合酶等温核酸扩增方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-RAA),并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果显示:该方法在39℃等温条件下检测时间为20 min,对BVDV 1型核酸检测下限为1.2×10^(2) copies/μL;3个浓度梯度的核酸组内重复性试验的变异系数(CV)分别为3.24%、9.48%和8.79%,均在10.00%以内,重复性好;建立的方法与猪瘟病毒、牛冠状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等无特异性反应。对66份临床样品进行检测,发现所建立的方法与荧光定量PCR检测结果符合率为98.48%,Kappa值为0.881(P<0.001)。结果表明,本研究建立的RT-RAA快速诊断方法特异性强、灵敏度高、操作便捷,可用于BVDV 1型的现场快速检测。

多重数字PCR及其在疾病检测中的研究进展

数字PCR(dPCR)是一种新兴的核酸检测技术,继承了PCR和荧光定量PCR(qPCR)的优点,并开创了新的发展方向。dPCR最独特之处在于,它可以在无需标准曲线的情况下,对核酸样本实现绝对定量分析。而多重数字PCR(mdPCR)更是dPCR的主要发展方向。在众多研究领域中,特别是疾病检测方面,mdPCR已展现出卓越的优势和广阔的应用前景。本文介绍了dPCR和mdPCR的原理,探讨了mdPCR在细菌检测、病毒检测、癌症诊断等方面的研究现状,并深入分析了mdPCR的优势及不足,以期为未来mdPCR的应用提供重要的理论指导。

脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)在结核病诊断中的应用

脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan,LAM)是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)细胞壁的组成成分,是一种糖脂,可使巨噬细胞失活,并清除氧化自由基。LAM存在于结核病患者的尿液、血清和肺部,因此人们开发了以LAM作为生物标志物的床旁检测(point-of-care-testing,POCT)方法,以减少诊断延迟,及时采取相应干预治疗措施阻断结核病传播。与检测单纯结核病患者相比,LAM检测技术对于诊断晚期免疫缺陷和CD4细胞计数低的艾滋病病毒(HIV)感染相关结核病患者具有更好的敏感性,对于这部分患者以及无法产生痰液的儿童、重症结核病患者等具有较好的应用价值。本文通过介绍LAM的结构、功能及其在结核病诊断中的应用研究进展,以期为未来结核病防控提供参考和思路。

广东传统文化元素在室内空间设计中的应用研究

广东这片富饶且多元的土地,孕育了独特的岭南文化。这片土地上的传统元素,既是历史的积淀,也是当代生活的重要表达。近年来,随着对传统文化的重视与回归,广东传统文化元素在室内空间中的应用逐渐成为设计界的一种趋势。本文将详细探讨广东传统文化元素在室内空间中的应用,以期为相关领域的研究提供有价值的参考。

全球兽用抗菌药物使用情况

细菌耐药性问题是全球关注的重要问题。本文梳理了世界动物卫生组织(OIE)《兽用抗菌药物使用情况年报》,以及英国、美国等国家的抗菌药物使用情况。在146个提供信息的国家和地区中,86个禁止将抗菌药物用作促生长剂,37个允许作促生长用,23个国家未作相关要求;养殖中最常用抗菌药是四环素类(45.2%),其次是青霉素类(13.9%);亚太地区、美洲、欧洲和非洲活畜禽抗菌药物用量分别为257.85、160.69、89.78和70.04 mg/kg,亚太地区用药量几乎为欧洲的3倍;美国食品动物使用的重要抗菌药物占抗菌药物使用总量的60%,非重要抗菌药物占40%;英国食品动物抗菌药物用量从2014年的62 mg/kg降至2016年的45 mg/kg,总量从445吨降到337吨。上述数据提示亚洲和美洲地区在慎用抗菌药物及研制新型抗菌药物等方面应作出更大努力。

欧盟国家非洲猪瘟流行情况及对我国防控工作的启示

非洲猪瘟(ASF)1957年首次扩散到欧洲,2014年再次从高加索地区传入,并迅速在波罗的海周边国家蔓延,至2018年4月已扩散至欧盟8个成员国,且逐渐呈现地方性流行态势。本文重点介绍了欧洲国家的ASF扩散史,综述了病毒在欧盟国家扩散的主要途径,梳理了欧盟的ASF防控法规和措施,并对我国ASF防控提出了建议,以期为ASF防控提供帮助。

我国陆生动物疫病检测诊断技术标准化发展分析

动物疫病检测和诊断类标准是检测和判断动物疫病的主要依据。本文梳理了我国动物疫病检测和诊断技术标准的建设现状,并将其与我国《一、二、三类动物疫病病种名录》以及OIE《陆生动物疫病诊断和疫苗手册》和《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》中的陆生动物疫病目录进行对比。分析发现:我国动物疫病检测和诊断技术标准体系对我国一、二、三类动物疫病的覆盖率为92.6%,其中80%的标准有PCR和(或)ELISA检测方法 ;对OIE陆生动物疫病诊断和疫苗手册名录疫病的覆盖率为88.3%,其中73%的标准有PCR和(或)ELISA检测方法 ;对我国进境动物检疫名录疫病的覆盖率为87.7%,其中73%的标准有PCR和(或)ELISA检测方法。由此提出了提高我国动物疫病检测和诊断技术标准覆盖率,强化快速诊断检测技术标准化建设的建议。

美国动物卫生保护制度框架浅析

基于对美国《动物卫生保护法》的研究,本文概述了其立法宗旨,动物疫病预防、突发疫情应急处置、国内流行病控制消灭等制度框架,以及生产经营者主体责任、调运监管制度、动物卫生实验室体系、兽医认证计划、监督执法制度、经费预算方式等保障措施,以期为完善我国立法体系提供借鉴。

2014年4月22日新疆寒潮天气过程锋面结构演变特征分析

选取2014年4月22日北疆发生大风降温,南疆发生强沙尘暴的一次冷锋过境寒潮天气过程,利用常规气象数据和1度NCEP再分析资料,分析了500 hPa天气形势和地面气压场,计算了冷暖平流、温度梯度和锋生函数,分析了其在水平面以及西北东南向垂直剖面上的三维结构和演变特征。表明:500 hPa偏东位置欧洲脊在暖平流作用下快速向北发展,西西伯利亚槽在冷平流作用下加强并东移南下,受其影响,地面图上锋面气旋发展旺盛,冷空气东移时遇到平均海拔高度3000 m的天山高大陡峭地形,在对流层中下层的水平面上,等温线沿天山密集分布,梯度很大;在垂直剖面图上,天山附近位温线密集,呈带状准垂直分布;同时锋生函数F>0,发生锋生。冷锋在天山北麓位置少动,呈准静止状态。

新疆百里风区近地层垂直风切变指数特征

采用新疆百里风区十三间房100m高度铁塔2009年5月—2011年1月逐时5层测风十分钟平均风速资料,计算各层平均风速,利用最小二乘曲线拟合幂函数计算塔层高度整层的风切变指数(α),用幂函数公式直接计算各层间α值。取启动风速段(风速>3m·s^-1)和大风风速段(风速>13m·s^-1)2个风速段分别进行计算;分析了一日内各时次和整年各月α值变化规律。研究发现:启动风速段和大风风速段α平均分别为0.0845和0.0364,α与风速成反比关系;一日内9:00(北京时间,以下均同)日出后α值缓慢减小,16:00—21:00维持较小值,22:00后α快速增大,直到次日08:00维持较大值;11月—翌年2月α较大,其他月份显著变小,α值与太阳高度角成反比关系。

单分子免疫阵列技术在传染病诊断中的应用

单分子免疫阵列(single molecule array,Simoa)技术,又称"数字ELISA",是近年来新开发的一种数字免疫分析方法,将单分子计数用于蛋白质生物标记物的检测。该方法可测量各种不同基质(血清、血浆、脑脊液、尿液、细胞提取物等)中的蛋白质,检测限可达飞摩尔(fg/mL)数量级,灵敏度较传统ELISA提高约1000倍。目前,该技术在一些重大传染病,如新冠肺炎、结核病、艾滋病、朊病毒病诊断中的优势逐渐凸显。Simoa技术可帮助监测新冠病毒感染进程,有望实现早期高灵敏度诊断,以区分新冠肺炎轻症和重症患者;有望帮助诊断活动性结核病,并可以监测结核病治疗效果;可更准确检测人免疫缺陷病毒(HIV)免疫相关蛋白含量变化,提高早期诊断的灵敏性;可在羊瘙痒病临床症状出现前检测活体动物血清,提高痒病早期检测能力,从而有望用于人类克雅氏症诊断。未来,通过开发相关病种的检测试剂盒,有望利用Simoa技术提高疫病的综合诊断能力,还可进行疫苗免疫效果评价,为疫病防控提供依据。

应对细菌耐药性策略研究

细菌耐药性已成为威胁全球人类及动物安全的重大问题,多个世界组织及发达国家已发出实施干预控制的倡议或已制定行动计划。本文分析了细菌耐药性的遗传学发生机制、耐药菌和耐药基因的流行病学传播途径及控制传播的措施,以期对制定和完善细菌耐药性干预控制策略和措施提供借鉴。

川西高庙111水平井水基钻井液技术

高庙111水平井是高庙111井的套管开窗侧钻水平井,开窗侧钻点1700 m,设计垂深2599 m、斜深3782 m,最大井斜89.53°,水平段长976 m。该地层构造应力发达,微裂缝发育,地层的砂-泥互层频繁,砂岩结构疏松,且裸眼段长,前期在钻井过程中存在严重的井壁失稳垮塌、起下钻遇阻等问题,影响勘探开发进度。针对这些问题,在氯化钾聚合物钻井液体系基础上引入一种新型支化聚醚胺,加强钻井液的抑制性能;同时提高沥青类封堵剂的加量,形成一种强抑制防塌钻井液体系;并在高庙111水平井进行了应用,有效解决了前期高庙子区块钻探过程中存在的泥岩造浆严重及泥沙互层的井壁失稳难题。