Arrb2基因敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的 探讨Arrb2基因敲除鼠的繁育和基因型分析,验证聚合酶链式反应(PCR)法对Arrb2基因敲除鼠基因型检测的适用性。方法 将引进的Arrb2纯合♂小鼠和野生型♀鼠进行交配繁殖出子一代,获得的F1代杂合子小鼠继续进行交配,待小鼠2周龄时剪尾部组织提取DNA,PCR法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。将获得的纯合子小鼠与异性杂合子交配,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠。Western blot检测验证获得的Arrb2基因敲除纯合子小鼠的主要脏器中β-arrestin2蛋白的表达情况。结果 Arrb2基因敲除鼠的繁育和鉴定取得了成功,获得了一批基因敲除鼠。F1代杂合子小鼠交配获得的F2代小鼠出现3种基因型:Arrb2+/+、Arrb2+/-、Arrb2-/-,使用PCR法成功鉴别了子代鼠的基因型。Western blot结果表明,Arrb2基因敲除纯合子小鼠肝、肾组织中几乎不表达β-arrestin2蛋白。结论 正确的繁殖和鉴定是得到纯合Arrb2基因敲除鼠的重要途径,PCR法鉴别小鼠基因型具有简便、快捷、可靠的特点。

不同浓度四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型的比较

目的对比观察不同剂量四氯化碳(CCl_4)诱导小鼠肝纤维化模型的效果,探索一种稳定可行且较为高效的肝纤维化小鼠造模方法。方法将60只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和模型组,模型组小鼠分别腹腔注射体积分数10%的CCl4(5 mL/kg)以及体积分数20%的CCl_4(1 mL/kg),每周2次,连续8周。分别在造模2周、4周、6周、8周注射后处死小鼠,进行HE染色和Masson染色,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,以及肝匀浆氧化/抗氧化指标,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)和超氧化物岐化酶(SOD)变化,Western blotting法检测肝组织中胶原表达情况。结果随着造模时间的延长,病理染色显示肝纤维化程度不断加重,胶原表达逐步增加,血清ALT、AST水平逐渐升高,肝匀浆SOD、GSH活性降低,氧化产物MDA含量升高。在造模的相同时间点,体积分数10%CCl_4、5 m L/kg剂量组相比于体积分数20%CCl4、1 m L/kg剂量组,病理染色显示肝纤维化程度更加严重,血清ALT、AST水平明显升高,肝脏中SOD、GSH活性明显降低,氧化产物MDA含量明显升高,肝纤维化形成的时间更短,效果更好。结论两种造模方法都能形成肝纤维化小鼠模型,但体积分数10%CCl_4(5 m L/kg)剂量组的纤维化形成时间更短且效果更好。因此,每周2次,连续8周腹腔注射10%CCl_4(5 m L/kg)可作为一种较为理想的纤维化小鼠造模方法。

炎症小体在纤维化疾病中作用的研究进展

炎症小体为多种蛋白质组成的复合体,其激活和随后的炎性细胞因子分泌对于先天免疫防御是必需的,并且在适应性免疫应答中也发挥重要作用。纤维化是慢性炎症发展的最后阶段,是细胞外基质过度沉积的结果,导致组织结构损伤和器官功能出现障碍。近年来,报道了许多炎症小体在纤维化疾病中的研究。该文对炎症小体在纤维化疾病中的作用进行综述,以促进炎症小体相关机制及药物的研究与开发。

新形势·新策略--网络药理学与中药新药研发

"网络药理学与生物医药发展国际论坛"于2018年8月23-25日在江苏省连云港市召开。本次论坛由中国科协海智办、国际药理学联合会天然药物药理学分会、中国药理学会、中国药学会、江苏省科学技术协会、江苏省食品药品监督管理局和连云港市人民政府共同主办,中国药理学会网络药理学专业委员会承办,江苏康缘药业股份有限公司协办,中国药理学会网络药理学专业委员会主任委员周文霞教授和常务委员、江苏康缘药业股份有限公司董事长肖伟教授共同担任论坛主席。有来自美国、澳大利亚、奥地利、中国大陆和中国澳门等多个国家和地区的97名代表出席本次论坛。国家卫生健康委员会科技教育司监察刘登峰专员应邀参会。论坛针对国际、国内网络药理学研究的现状、最新进展和发展前沿等有关问题进行了综合讨论,展示了该研究领域的新技术、新进展和新应用。为促进国内外学术交流,本文对部分专家的观点和意见进行了整理,以期为促进我国网络药理学和生物医药研究与发展起到积极的推动作用。

Epac信号分子在纤维化疾病中作用的研究进展

由cAMP激活的交换蛋白分子(exchange protein activated by c AMP,Epac)是近年来新发现的鸟嘌呤核苷酸交换因子,参与一系列cAMP介导的信号通路。纤维化疾病是临床上常见的一类疾病,是在正常生理学(如衰老)或不同致病因素持续刺激下,使得细胞外基质过度沉积的结果。有研究表明,Epac在纤维化疾病中发挥重要作用,因此,该文对Epac在纤维化疾病中的作用进行综述,以促进对于Epac相关机制及药物的研究与开发。

GRK2 overexpression inhibits IGF1-induced proliferation and migration of human hepatocellular carcinoma cells by down-regulating EGR1

OBJECTIVE To investigate the role and mechanism of G protein-coupled receptor kinase 2(GRK2)involving in hepatocel ular carcinoma(HCC)progression.METHODS Cel Counting Kit 8 and tumor colony formation assay were designed to detect HCC cell proliferation,wound healing assay was to detect HCC migration.The correlation between GRK2 and early growth response-1(EGR1)were detected by RT-PCR and real-time PCR assays.Co-immunoprecipitation and Western blot assay were adopted to detect the relationship between GRK2and insulin-like growth factor 1 receptor(IGF-1R)signaling pathway.RESULTS In this study we find that GRK2plays an inhibition role in IGF1-induced HCC cell proliferation and migration.Overexpression of GRK2 causes a decrease in EGR1 expression,while knockdown of GRK2 leads to the dramatically increase in EGR1 expression in the treatment of IGF1.Through co-immunoprecipitation and Western blot assay,we confirm that GRK2can interact with IGF-1R and inhibiting IGF1-induced activation of IGF1R signaling pathway.Silencing EGR1attenuates GRK2 overexpression-caused inhibition of cell proliferation,tumor colony number and migrationactivity,while overexpressing of EGR1 restores the antiproliferative and migratory effect by GRK2 overexpression in HCCLM3 cells.CONCLUSION Taken together,these results suggest that GRK2 may inhibit IGF1-induced HCC cell growth and migration through down-regulation of EGR1 and indicate that enforced GRK2 may offer a potential therapeutic approach against HCC.

G蛋白偶联受体与肝损伤的研究现状

G蛋白偶联受体(GPCRs)是涉及信号转导的细胞膜最大的受体超家族,介导产生多种生理效应,激活相应的信号级联系统,在肝损伤过程中发挥关键作用,是一类非常重要的药物作用靶标。该文就肾上腺素受体、血管紧张素受体、趋化因子受体、蛋白酶激活受体等参与急慢性肝损伤调节的GPCRs相关研究进展做一综述。

G蛋白偶联受体激酶2对纤维化疾病调控作用的研究现状

G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)为G蛋白偶联受体激酶家族重要成员,GRK2结构的N端和C端共同发挥受体识别和亚细胞定位的功能。GRK2可磷酸化G蛋白偶联受体(GPCRs)和非GPCRs途径参与的相关信号通路,调节机体病理生理过程。GRK2在心脏、肝、肾、肺等多种器官纤维化中表达异常,本文就GRK2在纤维化疾病中的调控作用进行综述。