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海藻糖快速检测方法的建立与初步应用 被引量:5
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作者 苗佳 王彩喆 +5 位作者 牛丹丹 Nokuthula Peace Mchunu 田康明 suren singh Kugenthiren Permaul 王正祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第23期227-231,共5页
海藻糖是生物体合成的、具有抗逆保护作用的天然二糖,在食品加工与贮藏、微生物发酵过程具有重要作用。该文采用前期获得的专一性海藻糖酶,建立了一种定量测定海藻糖的快速方法。该方法对海藻糖的检测限为0.019 mg/m L,定量限为0.1 mg/m... 海藻糖是生物体合成的、具有抗逆保护作用的天然二糖,在食品加工与贮藏、微生物发酵过程具有重要作用。该文采用前期获得的专一性海藻糖酶,建立了一种定量测定海藻糖的快速方法。该方法对海藻糖的检测限为0.019 mg/m L,定量限为0.1 mg/m L;海藻糖的线性检测范围为0.1 mg/m L^150.0 mg/m L,回收率为98.80%~101.33%。该方法操作简便快捷、特异性高、重复性好,在菌种改良与食品原料营养筛查等海藻糖快速定量检测中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 海藻糖 快速检测 海藻糖酶
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黑曲霉内切葡聚糖酶系的基本酶学特征解析
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作者 佟新新 金鹏 +4 位作者 李伟国 刘晓光 路福平 suren singh 王正祥 《天津科技大学学报》 CAS 2018年第5期25-32,共8页
基于黑曲霉(Aspergillus niger)CBS 513.88的基因组信息,以黑曲霉CICIM F0510作为基因来源,本研究成功将其17个内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母(Pichiapastoris)中进行了克隆表达.重组酶En4gA和En4gG对羧甲基纤维素钠具有较高酶活力,分别为1... 基于黑曲霉(Aspergillus niger)CBS 513.88的基因组信息,以黑曲霉CICIM F0510作为基因来源,本研究成功将其17个内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母(Pichiapastoris)中进行了克隆表达.重组酶En4gA和En4gG对羧甲基纤维素钠具有较高酶活力,分别为11.67 U/m L和7.45 U/mL;而其他重组酶的酶活力为0.83~1.62 U/m L.此外,En3gA、En3gB、En3gC、En4gA和En4gB还可以水解茯苓多糖.酶学性质的研究表明,这些重组酶的最适作用温度和最适作用pH分别为45~65℃、pH 3.5~6.0,且分别在40~80℃和pH 2.0~7.0具有较好的热稳定性和pH稳定性.进一步通过底物水解特征、进化树以及碳水化合物活性酶(CAZy)分类系统将这些内切葡聚糖酶分为4类.良好的耐热性和耐酸性为这些重组酶在麦芽糖化、饲料颗粒化、纤维素乙醇、食品、纺织以及医药等行业的应用奠定了良好的基础. 展开更多
关键词 内切葡聚糖酶 黑曲霉 系统解析 酶学性质
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普鲁兰酶N467G突变体的酶学性质分析 被引量:1
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作者 张亚楠 申培立 +4 位作者 牛丹丹 田康明 KUGEN PERMAUL suren singh 王正祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期7-11,共5页
在淀粉制糖工业中,普鲁兰酶通常与糖化酶配合使用,其在酸性pH和较高温度下的催化活力是影响淀粉脱支效率的主要因素。该研究通过对长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)普鲁兰酶蛋白质解折叠自由能的差值(ΔΔG)的计算预测和突变位点稳... 在淀粉制糖工业中,普鲁兰酶通常与糖化酶配合使用,其在酸性pH和较高温度下的催化活力是影响淀粉脱支效率的主要因素。该研究通过对长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)普鲁兰酶蛋白质解折叠自由能的差值(ΔΔG)的计算预测和突变位点稳定性分析,选择突变位点并进行定点突变,获得突变体N467G。与野生型普鲁兰酶分子相比,突变体N467G的最适作用温度提高至60℃,最适作用pH降低至4.5;其在60℃条件下孵育2.5 h或在pH 3.5~5.5孵育1 h残留酶活力均保持在80%以上,稳定性明显提高。此突变体的获得为其后续高效表达与工业化应用奠定了重要基础。 展开更多
关键词 普鲁兰酶 定向进化 最适作用pH 最适作用温度
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16S rDNA序列在大批量细菌分离物分子鉴定中的应用研究 被引量:3
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作者 陈源源 沈微 +4 位作者 樊游 陈献忠 suren singh 石贵阳 王正祥 《工业微生物》 CAS CSCD 2013年第2期1-5,共5页
利用16S rDNA序列同源性分析法对保藏于中国高校工业微生物资源与信息中心(CICIMCU)的3 726株细菌分离物进行了分子鉴定。实验结果显示:其中3 073株细菌分离物可被成功鉴定至种一级水平,分属于210个种,45个属,占整个细菌分离物的82.5%;... 利用16S rDNA序列同源性分析法对保藏于中国高校工业微生物资源与信息中心(CICIMCU)的3 726株细菌分离物进行了分子鉴定。实验结果显示:其中3 073株细菌分离物可被成功鉴定至种一级水平,分属于210个种,45个属,占整个细菌分离物的82.5%;其余653株细菌分离物可鉴定到属一级,占整个细菌分离物的17.5%。研究中也发现,16S rDNA序列在芽孢杆菌属(Bacillus)和土芽孢杆菌属(Geobacillus)等少数菌属中的部分种间鉴定的敏感性不高。上述结果表明16S rDNA序列在大多数细菌种属鉴定中具有较高的特异性和敏感性,可以作为第一轮分子标识用于大批量细菌分离物的鉴定。 展开更多
关键词 细菌分离物 鉴定 16S RDNA序列 分子标识
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产脂肪酶极端丝状真菌的筛选及其酶学特性 被引量:1
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作者 金鹏 党爱丽 +4 位作者 雷湘南 suren singh 刘晓光 王正祥 路福平 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第18期213-217,共5页
从南非德班市及其周边地区采集的76个土样中筛选得到99株嗜碱丝状真菌和51株嗜热丝状真菌,利用橄榄油乳化法以及对硝基苯酚法筛选得到三株具有底物专一性的菌株F4-173、F4-262、F8-67,经ITS分子生物学鉴定方法分别鉴定为Aspergillus fum... 从南非德班市及其周边地区采集的76个土样中筛选得到99株嗜碱丝状真菌和51株嗜热丝状真菌,利用橄榄油乳化法以及对硝基苯酚法筛选得到三株具有底物专一性的菌株F4-173、F4-262、F8-67,经ITS分子生物学鉴定方法分别鉴定为Aspergillus fumigatus、Penicillium verrucosum、Penicillium chrysogenum。其中,Aspergillus fumigates F4-173可专一性分解菜籽油,其最适作用条件40℃、p H8.0,Penicillium verrucosum F4-262可专一性分解对硝基苯酚月桂酸酯,其最适作用条件为40℃、p H8.0,Penicillium chrysogenum F8-67可专一性分解大豆油,其酶液最适作用条件为50℃、p H6.5。 展开更多
关键词 脂肪酶 耐热 耐碱 底物专一性 酶学特征
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Carbon utilization profile of a thermophilic fungus, <i>Thermomyces lanuginosus</i>using phenotypic microarray
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作者 Nokuthula Peace Mchunu Kugen Permaul +1 位作者 Maqsudul Alam suren singh 《Advances in Bioscience and Biotechnology》 2013年第9期24-32,共9页
The thermophilic filamentous fungus, Thermomyces lanuginosus produces the largest amount of xylanase reported. In addition to this, it expresses large amount of other enzymes that have been used industrially or have a... The thermophilic filamentous fungus, Thermomyces lanuginosus produces the largest amount of xylanase reported. In addition to this, it expresses large amount of other enzymes that have been used industrially or have academic interest. Thus, this fungus has a potential to be applied for biomass conversion to produce biofuel or other applications. In this study, the Biolog system was used to characterize the utilisation and growth of T. lanuginosus on 95 carbon sources. The carbohydrates based compounds, both single sugars and oligosaccharide, showed the best utilisation profile, with the pentose sugar xylose inducing the highest growth, followed by trehelose, raffinose, D-mannose turanose fructose and glucose. Among oligosaccharides, sucrose had the highest mycelium formation followed by stachyose, maltose, maltotriose, glycogen and dextrin. Interestingly the fungus also grew well on cellobiose suggesting that this fungus can produce cellulose hydrolysing proteins. D-alanine was the best amino acid to promote fungal growth while the effect of other amino acids tested was similar to the control. These results demonstrate the ability of this fungus to grow relatively well on most plant based compounds thus making this fungus a possible candidate for plant biomass conversion which can be applied to a number of biotechnological applications including biofuel production. 展开更多
关键词 FILAMENTOUS Fungi THERMOPHILIC Carbon Source HEXOSE PENTOSE
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大肠杆菌琥珀酸和乙酸合成途径的删除及其重组菌株的D-乳酸发酵 被引量:7
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作者 周丽 田康明 +4 位作者 左志锐 陈献忠 石贵阳 suren singh 王正祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期31-40,共10页
菌株CICIM B0013-030(B0013,ack-pta,pps,pflB)可积累D-乳酸作为主要发酵产物,然而副产物琥珀酸和乙酸的含量分别高达乳酸的11.9%和7.1%。为构建副产物含量低的产D-乳酸重组大肠杆菌菌株,本研究删除了菌株B0013-030的琥珀酸(frdA)和乙酸... 菌株CICIM B0013-030(B0013,ack-pta,pps,pflB)可积累D-乳酸作为主要发酵产物,然而副产物琥珀酸和乙酸的含量分别高达乳酸的11.9%和7.1%。为构建副产物含量低的产D-乳酸重组大肠杆菌菌株,本研究删除了菌株B0013-030的琥珀酸(frdA)和乙酸(tdcDE)合成途径,并考察了重组菌株在摇瓶和发酵罐中经两阶段发酵(好氧生长菌体和厌氧发酵产酸)利用葡萄糖发酵D-乳酸的性能。结果表明,分别构建含有frdA::difGm和tdcDE::difGm突变盒的重组质粒,并利用Red重组系统将突变盒整合于染色体上的目的基因,再利用Xer重组系统去除抗生素抗性基因,依次获得了重组菌株B0013-040B(B0013-030,frdA)和B0013-050B(B0013-040B,tdcDE)。摇瓶发酵结果表明,frdA基因的删除使得菌株B0013-040B副产物琥珀酸的含量降低了80.8%;在7 L发酵罐中进行乳酸发酵,菌株B0013-040B的D-乳酸产量达114.5 g/L,光学纯度大于99.9%,但仍积累1.0 g/L琥珀酸和5.4 g/L乙酸。进一步删除了tdcD和tdcE基因的菌株B0013-050B,在7 L发酵罐中生产111.9 g/L D-乳酸,乙酸和琥珀酸的合成量分别降低为0.4 g/L,其他副产物含量也维持较低水平,表明该菌株具有较优良的D-乳酸发酵性能。 展开更多
关键词 D-乳酸 大肠杆菌 琥珀酸 乙酸
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代谢工程大肠杆菌利用甘油高效合成L-乳酸 被引量:7
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作者 田康明 石贵阳 +2 位作者 路福平 suren singh 王正祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1268-1277,共10页
以甘油为碳源高效合成L-乳酸有助于推进油脂水解产业和生物可降解材料制造业的共同发展。为此,首先分别从凝结芽胞杆菌Bacillus coagulans CICIM B1821和大肠杆菌Escherichia coli CICIM B0013中克隆了L-乳酸脱氢酶基因BcoaLDH和D-乳酸... 以甘油为碳源高效合成L-乳酸有助于推进油脂水解产业和生物可降解材料制造业的共同发展。为此,首先分别从凝结芽胞杆菌Bacillus coagulans CICIM B1821和大肠杆菌Escherichia coli CICIM B0013中克隆了L-乳酸脱氢酶基因BcoaLDH和D-乳酸脱氢酶(LdhA)的启动子片段PldhA。将两条DNA片段连接组成了表达盒PldhA-BcoaLDH。然后将上述表达盒通过同源重组删除FMN为辅酶的L-乳酸脱氢酶编码基因lldD的同时克隆入ldhA基因缺失菌株E.coli CICIM B0013-080C(ack-pta pps pflB dld poxB adhE frdA ldhA)的染色体上,获得了L-乳酸高产菌株E.coli CICIM B0013-090B(B0013-080C,lldD::PldhA-BcoaLDH)。考察了菌株CICIM B0013-090B不同培养温度下代谢利用甘油和合成L-乳酸的特征后,建立并优化了一种新型L-乳酸变温发酵工艺。在7 L发酵罐上,发酵27 h,积累L-乳酸132.4 g/L,产酸强度4.90 g/(L·h),甘油到L-乳酸的得率为93.7%,L-乳酸的光学纯度达到99.95%。 展开更多
关键词 L-乳酸 甘油 L-乳酸脱氢酶 途径工程 大肠杆菌
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利用温度调节实现新型重组菌高效转化甘油为D-乳酸 被引量:6
9
作者 田康明 周丽 +5 位作者 陈献忠 沈微 石贵阳 suren singh 路福平 王正祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期111-114,共4页
油脂水解来源的甘油将是未来发酵工业主要原料之一。文中探索D-乳酸高产大肠杆菌Escherichia coli CICIM B0013-070菌株不同培养温度下好氧与厌氧代谢甘油的特征后,建立并优化了一种新型D-乳酸变温发酵工艺,甘油到乳酸的得率由64%提高到... 油脂水解来源的甘油将是未来发酵工业主要原料之一。文中探索D-乳酸高产大肠杆菌Escherichia coli CICIM B0013-070菌株不同培养温度下好氧与厌氧代谢甘油的特征后,建立并优化了一种新型D-乳酸变温发酵工艺,甘油到乳酸的得率由64%提高到82.6%。另外,在B0013-070中引入了温度诱导型乳酸脱氢酶的转录系统,甘油到乳酸的得率进一步提高到88.9%。 展开更多
关键词 D-乳酸 甘油 变温发酵
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疏绵状嗜热丝孢菌外切β-葡聚糖酶的基因克隆与酶学特征 被引量:3
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作者 王瑞杰 Nokuthula Peace Mchunu +4 位作者 牛丹丹 Kugenthiren Permaul suren singh 刘晓光 路福平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期285-291,共7页
【目的】疏绵状嗜热丝孢菌是一种嗜热丝状真菌,具有合成与分泌多种耐热酶的能力,从中找寻酶活高、耐热性能优良的β-葡聚糖酶。【方法】对疏绵状嗜热丝孢菌其中一个外切β-葡聚糖酶的编码基因gln B进行克隆,并在毕赤酵母GS115中表达。... 【目的】疏绵状嗜热丝孢菌是一种嗜热丝状真菌,具有合成与分泌多种耐热酶的能力,从中找寻酶活高、耐热性能优良的β-葡聚糖酶。【方法】对疏绵状嗜热丝孢菌其中一个外切β-葡聚糖酶的编码基因gln B进行克隆,并在毕赤酵母GS115中表达。【结果】在摇瓶水平上重组菌的产酶活为11.5 U/m L,重组酶在SDS-PAGE中的大小约为48 k D。重组Gln B最适作用温度为65°C,最适作用p H为5.0;在低于50°C或p H 3.0-10.0之间具有良好稳定性。重组酶水解海带三糖,首先生成单糖和二糖,延长酶作用时间,可以进一步将其中的二糖部分水解为单糖。【结论】疏绵状嗜热丝孢菌来源的重组酶Gln B为外切β-葡聚糖酶,具有较好的耐热性能和p H稳定性。 展开更多
关键词 疏绵状嗜热丝孢菌 外切β-葡聚糖酶 酶学特征
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黑曲霉F0215中β-半乳糖苷酶系的生化特征 被引量:2
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作者 牛丹丹 贾超 +4 位作者 田晓靓 suren singh 路福平 林娟 叶秀云 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第11期198-207,共10页
通过分子克隆与遗传重组技术克隆及表达黑曲霉F0215来源的全部β-半乳糖苷酶,构建了重组菌GS115(p PIC-bgl A)、GS115(p PIC-bgl B)、GS115(pPIC-bglC)和GS115(pPIC-bglE);通过摇瓶发酵和甲醇诱导培养,制备相应的重组β-半乳糖苷酶BglA... 通过分子克隆与遗传重组技术克隆及表达黑曲霉F0215来源的全部β-半乳糖苷酶,构建了重组菌GS115(p PIC-bgl A)、GS115(p PIC-bgl B)、GS115(pPIC-bglC)和GS115(pPIC-bglE);通过摇瓶发酵和甲醇诱导培养,制备相应的重组β-半乳糖苷酶BglA、BglB、BglC和BglE。重组酶BglA、BglB、BglC和BglE的最适作用温度分别是60,50,60,50℃;最适反应pH分别为4.0,4.5,3.5,4.5;Mg^(2+)、Ca^(2+)、Na^+和Mn^(2+)对上述酶的活性均有促进作用,Cu^(2+)、Fe^(2+)、Ni^(2+)、Zn^2、Li^+和EDTA对上述酶的活性均有抑制作用;以ONPG为底物,采用双倒数作图法测得BglA、BglB、BglC和BglE的Km分别是0.43,0.22,0.37 mmol/L和0.46 mmol/L;BglA、BglB、BglC和BglE对乳糖具有单一的特异性,包含水解与转苷两种基本活性;黑曲霉β-半乳糖苷酶的分子结构呈现典型的真菌β-半乳糖苷酶结构特征。在参照基因组中预示存在的β-半乳糖苷酶BglD,在所试黑曲霉菌种中不存在。 展开更多
关键词 Β-半乳糖苷酶 黑曲霉基因组 酶学特征
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高温微好氧发酵策略强化重组大肠杆菌D-乳酸合成途径
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作者 沈艳 田康明 +5 位作者 陈星奕 陈献忠 张梁 王正祥 石贵阳 suren singh 《食品科技》 CAS 北大核心 2012年第10期15-19,共5页
D-乳酸作为一种重要的手性中间体和聚乳酸合成的原料,其生产已越来越受到人们的重视。Escherichia coli CICIM B0013-070是一株能同型发酵合成D-乳酸的基因重组菌。比较该菌株不同温度、不同供氧强度下的生长情况及发酵产酸性能。结果显... D-乳酸作为一种重要的手性中间体和聚乳酸合成的原料,其生产已越来越受到人们的重视。Escherichia coli CICIM B0013-070是一株能同型发酵合成D-乳酸的基因重组菌。比较该菌株不同温度、不同供氧强度下的生长情况及发酵产酸性能。结果显示,采用微好氧发酵,在37、40℃温度下菌体量仍在增长;当发酵温度高于42℃后,菌体生长受到一定抑制,菌体量保持稳定,而乳酸的比合成速率和乳酸得率均有所提高。另外,对比微好氧发酵和限氧发酵的乳酸比合成速率发现,前者为后者的1.5~2倍;且微好氧条件下,葡萄糖到乳酸的得率随温度的提高逐渐增加,较高温度下接近甚至超过了限氧条件相同发酵温度下的得率。上述结果表明,在非严格限氧的条件下,可以通过发酵温度的提高,实现发酵阶段菌体生长和D-乳酸合成的代谢流微调,维持D-乳酸高生产强度的同时提高D-乳酸得率。 展开更多
关键词 D-乳酸 重组大肠杆菌 高温发酵 微好氧发酵
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