caspase-3激活在庆大霉素所致耳蜗螺旋神经元延迟性死亡过程中的作用

目的观察毛细胞丢失后耳蜗神经元延迟性死亡模式以及caspase-3的活动。方法采用3mol的庆大霉素作用离体培养的耳蜗24h,损毁全部毛细胞,分别在毛细胞丢失后1、3、5、7和14d收获样本。采用Neurofilament 200KDa标记耳蜗神经元,TRITC-labeled phalloidin标记毛细胞,免疫荧光染色观察神经元和毛细胞的存活数量,采用WesternBlot的方法检测caspase-3特异降解产物α-spectrin,间接确定caspase-3活动。结果3mol庆大霉素作用于培养的耳蜗24h,耳蜗毛细胞几乎全部消失。螺旋神经元和神经纤维的数目随培养时间的延长而减少,神经元存活从第1天的87%降至第14天的5%。神经元变小且形状不规则,在神经纤维上出现实质小体。检测caspse-3激活的特异降解带-120KDa的灰度值,发现在毛细胞丢失后24h,caspase-3活性明显高于毛细胞丢失的初时(P<0.01)。结论毛细胞丢失引起螺旋神经元死亡具有时间依赖效应,神经元出现凋亡的形态学特征,并且有caspase-3的活动。