水稻和昆虫细胞自噬期间自噬体发生的细胞学机理

【目的】从细胞学角度研究细胞自噬过程中膜结构细胞器的变化及其与自噬体发生的关系。【方法】以基因互作引起细胞调亡现象发生的水稻爪粳杂种F1和天然化合物印楝素、喜树碱、苦参碱诱导凋亡的昆虫细胞Sf9为材料,通过透射电子显微镜和荧光显微镜技术观察细胞自噬凋亡期间自噬体的特征。【结果】水稻杂种F1花粉母细胞在不同发育时期存在不同程度的退化,部分细胞内线粒体形态发生显著变化,形成长哑铃型或线管状,最后两端弯曲形成双层膜结构的细胞器;绒毡层细胞均出现内质网膨大,且逐渐包裹周围其它细胞器,如线粒体,形成双层膜结构的自噬体,最终引发细胞的自噬性凋亡。喜树碱和苦参碱诱发凋亡的细胞胞内线粒体形态发生拉长、弯曲,最后闭合形成包裹其它细胞器的双层膜结构自噬体;印楝素和喜树碱诱发凋亡的细胞胞内核通过分页和出芽的方式形成双层膜结构自噬体。【结论】动植物细胞自噬凋亡过程中,内质网、线粒体和细胞核3种膜结构细胞器均是自噬体膜结构的直接来源,然而3种膜结构细胞器参与自噬体形成的程度和方式因物种、细胞种类以及自噬诱发因素的变化而不同。

蛇根草水培体系中喜树碱、金丝桃苷及其他组分的初步鉴定

采集广东肇庆市鼎湖山的野生型广州蛇根草,进行室内水培优化,并初步构建了广州蛇根草水培体系.采用HPLC和GC-MS技术分析鉴定根部分泌物中的喜树碱、金丝桃苷以及其他成分.结果表明：广州蛇根草水培体系需建立在无强阳光直射,温度适宜（18～25℃）的条件下.利用大孔树脂AB-8吸附结合固相萃取技术富集根系分泌液,以石油醚/乙酸乙酯（6∶4）为洗脱液进行柱色谱分离,获得浓缩液经HPLC检测含有喜树碱和金丝桃苷,表明广州蛇根草根系分泌物中存在喜树碱和金丝桃苷,同时GC-MS鉴定分析表明广州蛇根草根系分泌物中还含有各种热稳定的化感物质,如邻苯二甲酸二丁酯和苯二甲酸,单（2-乙基己基）酯等化合物.本研究初步表明通过构建蛇根草水培体系,以其根系生物合成喜树碱和金丝桃苷有一定的可行性.

喜树水培体系中喜树碱、羟基喜树碱及其他组分的初步鉴定

为初步建立喜树水培体系并确定从其根系分泌物中提取喜树碱和羟基喜树碱的可行性,以喜树为研究对象,采集喜树幼苗,进行无土水培。利用高效液相色谱(HPLC)和气质联用(GC-MS)技术鉴定分析根系泌物中的喜树碱、羟基喜树碱以及其他成分。结果表明,喜树在水培体系中能够正常生长,根系发达,根系分泌物中存在一定含量的喜树碱、羟基喜树碱以及邻苯二甲酸二丁酯等化感物质。

13位取代苦参碱衍生物抗癌活性的定量构效关系研究

采用密度泛函理论B3LYP方法计算了13个13位取代苦参碱衍生物的电子结构,研究了化合物结构与抑制人肝癌细胞HepG2抗癌活性的定量构效关系(QSAR).结果表明:(1)13位取代的苦参碱类衍生物的最低空轨道能ELUMO越低,最低空轨道与最高占据轨道的能隙ΔE越小,化合物抗癌活性越高;(2)分子的能量Etotal、面积S以及体积V越大,其极化度P越大,活性越大;(3)分子的油水分配系数logP越大,活性越大,即分子的疏水性增大活性增强.综合得到了显著性较好的QSAR方程:-lgIC50=97.008-11.759ΔE+818.602QC2-2.132×10-4Etotal,可用于预测该类衍生物抑制人肝癌细胞HepG2的活性并进行分子设计.