槲皮素诱导肿瘤细胞P53非依赖的G2/M周期阻滞和凋亡

目的研究槲皮素对肿瘤细胞的增殖、周期和凋亡的影响。方法用槲皮素12.5,25,50和100μmol·L^(-1),分别作用于人肝癌HepG2和Hep3B细胞、人乳腺癌MDA-MA-231细胞、人结肠癌HCT116 p53野生型(HCT116 p53WT)和p53敲除型(HCT116 p53KO)细胞12,24和48 h。荧光显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定细胞存活率;采用Hoechst33258染色观察细胞核染色质的变化;采用流式细胞术检测细胞周期的变化;Western印迹法检测胱天蛋白酶3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白水平的变化。结果槲皮素对肿瘤细胞增殖的抑制作用显著且呈浓度(rHepG2=0.972,P<0.01;rHep3B=0.959,P<0.01;rMDA-MB-231=0.979,P<0.01;rHCT116p53WT=0.983,P<0.01;rHCT116p53KO=0.980,P<0.01)和时间(rHepG2=0.974,P<0.01;rHep3B=0.956,P<0.01;rMDA-MB-231=0.959,P<0.01;rHCT116p53WT=0.971,P<0.01;rHCT116p53KO=0.988,P<0.01)依赖性,与细胞对照组相比,槲皮素处理组细胞数量明显减少。槲皮素诱导G_2/M周期阻滞(P<0.01);镜下观察见核染色质浓缩和碎裂等典型的凋亡特性(P<0.01)。Western印迹法结果显示,胱天蛋白酶3蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),活化的胱天蛋白酶3表达水平无显著变化,PARP表达水平明显降低(P<0.01),活化的PARP明显升高(P<0.01);在加入泛胱天蛋白酶抑制剂后,与槲皮素单独作用相比,胱天蛋白酶3和PARP蛋白表达水平升高,活化的PARP表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。结论槲皮素能通过诱导P53非依赖性的G_2/M细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而实现对肿瘤细胞增殖的抑制作用。