沙立度胺对大鼠肝纤维化核因子-κB和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:观察沙立度胺抗大鼠肝纤维化的疗效和对NF-κB和TNF-α表达的影响。方法:四氯化碳腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,治疗组于造模同时用沙立度胺10mg.kg-1.d-1和100mg.kg-1.d-1灌胃8周。观察肝组织病理学改变,检测肝功能、血清肝纤维化指标及肝组织羟脯氨酸含量,免疫组化检测NF-κB p65、α-SMA在肝内的表达和分布,Western blotting检测肝组织NF-κB p65、IκBα、TNF-α蛋白的表达,RT-PCR检测肝组织TNF-αmRNA表达。结果:高剂量沙立度胺治疗组肝脏炎症及纤维化程度低于模型组;其ALT、AST水平,HA、LN及羟脯氨酸含量,肝组织细胞核NF-κB p65和肝组织α-SMA蛋白表达,以及肝组织TNF-αmRNA和蛋白表达均低于模型组(P<0.01);而PA水平和细胞质中IκBα蛋白表达高于模型组(P<0.01)。结论:沙立度胺可有效地抑制实验性大鼠肝纤维化的发展,通过抑制IκB解离和降解从而减弱NF-κB通路对TNF-α表达的诱导可能是它发挥疗效的机制之一。

沙利度胺对肝纤维化大鼠黏附分子表达的影响

我们观察了沙利度胺（thalidomide）治疗大鼠实验性肝纤维化的疗效，研究细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、E-选择素（E-selectin）mRNA和蛋白质的变化，探讨拮抗黏附分子抗肝纤维化的作用机制。

蛋白激酶C调节的1,4,5-三磷酸肌醇受体磷酸化在胆囊收缩素介导的胃窦平滑肌细胞钙动员中的作用

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对大鼠胃窦平滑肌细胞(SMC)胞内钙释放和胞外钙内流的作用及对其具体相关机制的探讨。方法 (1)多导生理记录仪记录大鼠离体胃窦肌条在不同条件下的收缩活动;(2)免疫印迹法和免疫沉淀法检测胃窦 SMC 的三型1,4,5-三磷酸肌醇受体(Ins P_3R3)及其磷酸化水平;(3)Fura-2/AM 标记胃窦 SMC,观察 CCK-8S 对胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]i)的影响;(4) 全细胞膜片钳检测胃窦 SMC 的 L-型电压门控钙通道电流(I_(Ca-L))的变化情况。结果(1)CCK-8S作用下胃窦肌条收缩幅值和频率改变明显[增长率分别为(62±13)%和(58±17)%,均P<0.01],可被 CCK-A 受体拮抗剂和钙泵抑制剂所阻断;(2)蛋白激酶 C(PKC)上调 InsP_3 R3磷酸化水平,抑制 CCK-8S 介导的内钙释放;(3)CCK-8S 引起的[Ca^(2+)]i 显著升高[从(69±7)mol/L 升至(472±36)nmol/L,P<0.01]分别可被 CCK-A 受体或胞内钙泵抑制剂和 PKC 激动剂所阻断;去除外钙或给予 L-型钙通道阻滞剂时 CCK-8S 仍可引起[Ca^(2+)]i 升高;(4)CCK-8S 显著增强胃窦 SMC 的I_(Ca-L)[从(-56±7)pA 升至(-89±6)pA,P<0.01],可分别被 I_(Ca-L)阻滞剂、胞内钙泵抑制剂和钙依赖性氯通道阻滞剂所阻断。结论 CCK-8S 引起的大鼠胃窦 SMC 的[Ca^(2+)]i 升高依赖于 PKC 介导的InsP_3R3磷酸化作用调节下的细胞内钙离子释放。胞内钙释放可激活 I_(Cl-Ca),引起细胞膜去极化而活化 I_(Ca-L)引起胞外钙内流,最终引起 SMC 收缩效应。