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QuEChERS-UPLC-MS/MS同时测定畜禽肉中23种驱虫类药物残留量
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作者 张彤 徐宜宏 +5 位作者 付海滨 刘俊 史喜菊 徐蕾蕊 康明芹 张敏 《饲料工业》 CAS 北大核心 2024年第3期120-126,共7页
研究旨在建立同时检测畜禽肉中多种驱虫类药物的分析方法,通过优化前处理方法和仪器分析条件,建立了分散固相萃取法-超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定畜禽肉中23种驱虫类药物残留的分析方法,目标物以乙腈提取,分散固相萃... 研究旨在建立同时检测畜禽肉中多种驱虫类药物的分析方法,通过优化前处理方法和仪器分析条件,建立了分散固相萃取法-超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定畜禽肉中23种驱虫类药物残留的分析方法,目标物以乙腈提取,分散固相萃取法(QuEChERS)净化,用乙腈+0.1%甲酸水作为流动相、UPLC-MS/MS确证检测、外标法定量。结果显示:所建立的方法定量限为0.2~1.0μg/kg,回收率为71.4%~107.5%,相对标准偏差为0.9%~8.8%。表明该方法定量限低,稳定性好,适用于畜禽肉中23种驱虫类药物残留的同时检测。 展开更多
关键词 驱虫药 超高效液相色谱-串联质谱 畜禽肉 药物残留 分散固相萃取法
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诺如病毒的流行、诊断与防控建议 被引量:1
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作者 王彩霞 史喜菊 +3 位作者 冯春燕 于浩洋 吴绍强 林祥梅 《质量安全与检验检测》 2023年第3期32-38,共7页
诺如病毒是一种重要的人畜共患病毒,也是一种重要的食源性疾病病毒,该病毒可以通过肉、乳、鱼、贝类等多种生鲜动物及其制品的携带而传播,短时间内即可引起聚集群体的集体发病,发生呕吐、腹泻等急性肠胃炎症状,严重时还会给人类生命带... 诺如病毒是一种重要的人畜共患病毒,也是一种重要的食源性疾病病毒,该病毒可以通过肉、乳、鱼、贝类等多种生鲜动物及其制品的携带而传播,短时间内即可引起聚集群体的集体发病,发生呕吐、腹泻等急性肠胃炎症状,严重时还会给人类生命带来重大威胁。由于其危害多种动物及其制品的质量安全,且每年在世界范围内频繁发生,因此,加强市场上活动物及动物制品的检验检疫,在市场流通环节对疫病进行把控,做好市场生物安全监管工作,提高对该病的正确认识与精准检验检测,能够有效改善我国动物及其产品的质量安全,维护我国人民身体健康。 展开更多
关键词 诺如病毒 腹泻 流行 诊断
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非洲猪瘟病毒CD2v蛋白阻断ELISA候选单克隆抗体的筛选及免疫学特性鉴定
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作者 王彩霞 史喜菊 +7 位作者 冯春燕 于浩洋 仇松寅 刘晓飞 陈冬杰 贾红 吴绍强 林祥梅 《中国动物检疫》 CAS 2023年第7期95-102,共8页
为制备非洲猪瘟病毒CD2v蛋白阻断ELISA候选单克隆抗体,并探究其免疫学特性,以真核表达的CD2v蛋白免疫BALB/c小鼠,经两次免疫后采集小鼠血清,以间接ELISA检测小鼠多抗血清效价。对血清效价最高的小鼠进行加强免疫后,取脾脏进行细胞融合... 为制备非洲猪瘟病毒CD2v蛋白阻断ELISA候选单克隆抗体,并探究其免疫学特性,以真核表达的CD2v蛋白免疫BALB/c小鼠,经两次免疫后采集小鼠血清,以间接ELISA检测小鼠多抗血清效价。对血清效价最高的小鼠进行加强免疫后,取脾脏进行细胞融合。通过有限稀释法筛选能够稳定分泌CD2v单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用小鼠体内诱生腹水法和辛酸-硫酸铵法获得纯化的CD2v单克隆抗体,对其进行免疫学特性检测。间接ELISA试验显示,4号小鼠血清效价最高(1:72900),选取该小鼠脾脏进行细胞融合,经过筛选得到4株杂交瘤细胞,分别命名为21D10、21G8、36A3和38G8,亚型鉴定均为IgG_(1)/κ,经检测36A3 ELISA效价最高,可达1:2.187×10^(5)。免疫荧光试验显示,36A3抗体能与细胞内表达的CD2v蛋白发生特异性反应,而与携带His标签的p30蛋白无交叉反应;特异性鉴定结果显示,36A3抗体特异性良好,与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒以及非洲猪瘟病毒p72蛋白均无反应;亲和力检测显示,36A3抗体亲和力较高,亲和常数(Ka)为9.68×10^(8)L/mol。初步建立的阻断ELISA试验显示,36A3能够有效区分阴阳性血清,N/P高达12.53,提示其为非常有效的阻断ELISA候选抗体。本试验结果为深入研究非洲猪瘟病毒CD2v蛋白功能及研发非洲猪瘟病毒阻断ELISA血清学检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白 动物免疫 单克隆抗体 阻断ELISA
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猪巨噬细胞培养模型的建立与应用
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作者 冯春燕 于浩洋 +5 位作者 史喜菊 杨振 王彩霞 王晶晶 吴绍强 林祥梅 《质量安全与检验检测》 2023年第3期6-11,共6页
本研究建立了猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的体外细胞培养模型,并利用该模型进行了病毒及遗传学操作等方面的初步应用。分离猪肺泡巨噬细胞后,利用多种培养条件进行培养和观察,通过光学显微镜对培养后的PAM进行形... 本研究建立了猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的体外细胞培养模型,并利用该模型进行了病毒及遗传学操作等方面的初步应用。分离猪肺泡巨噬细胞后,利用多种培养条件进行培养和观察,通过光学显微镜对培养后的PAM进行形态学观察,并利用脂多糖诱导其分化,检测分泌细胞因子的能力,建立PAM细胞体外培养模型。为进一步验证PAM细胞模型的功能,利用对表达红色荧光蛋白的大肠埃希菌(E.coli)检测PAM的吞噬功能;利用Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV)疫苗毒鉴定其扩繁病毒的能力;利用体外包装的慢病毒对PAM细胞进行基因操作,并对慢病毒感染前后病毒的吞噬功能进行研究。结果显示,本研究建立PAM细胞培养模型,细胞生长状态良好且对E.coli有强的吞噬能力;病毒感染实验显示,诱导产生的猪PAM细胞能有效的扩繁PRRSV疫苗毒;体外包装的慢病毒也能感染本研究的细胞模型,且感染后PAM细胞仍然对细菌具备吞噬功能。本研究成功建立了PAM细胞体外培养模型,为研究PAM细胞的免疫分化功能、病毒的感染免疫细胞的免疫机制等提供了坚实的研究基础。 展开更多
关键词 巨噬细胞 细胞培养模型 吞噬功能 慢病毒
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重组酶聚合酶扩增核酸试纸条快速检测诺如病毒方法的建立与应用
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作者 于浩洋 冯春燕 +5 位作者 史喜菊 王彩霞 刘晓飞 仇松寅 吴绍强 林祥梅 《质量安全与检验检测》 2023年第3期25-31,共7页
旨在建立快速检测GⅠ型诺如病毒的方法与快速检测GⅡ型诺如病毒的方法。分别以GⅠ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-GⅠ-F、Nov-GⅠ-R与探针Nov-GⅠ-probe、以GⅡ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-... 旨在建立快速检测GⅠ型诺如病毒的方法与快速检测GⅡ型诺如病毒的方法。分别以GⅠ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-GⅠ-F、Nov-GⅠ-R与探针Nov-GⅠ-probe、以GⅡ型NoV特异性保守序列作为靶序列设计并合成RPA引物Nov-GⅡ-F、Nov-GⅡ-R与探针Nov-GⅡ-probe,利用RPA检测试剂盒建立RPA扩增体系,并通过核酸检测试纸条对扩增产物进行分析鉴定。通过检测不同拷贝数的重组GⅠ型NoV阳性质粒对GⅠ型NoV快速检测方法的灵敏度进行评价,通过检测不同拷贝数的重组GⅡ型NoV阳性质粒对GⅡ型NoV快速检测方法的灵敏度进行评价,并与普通PCR方法和实时荧光PCR方法进行比较;以星状病毒、MS2噬菌体基因组、人轮状病毒和人腺病毒重组质粒作为模板对GⅠ型NoV快速检测方法与GⅡ型NoV快速检测方法的特异性进行评价;应用建立的两种方法对市场上采集的20份食品样品进行GⅠ型NoV检测与GⅡ型NoV检测。GⅠ型NoV快速检测方法与GⅡ型NoV快速检测方法检测到最低质粒拷贝数均为101 copies/μL,且两种检测方法对其余病毒均具有良好特异性;对于从市场采集的潜在携带NoV的食品样品进行检测,结果均为阴性。本研究建立的针对GⅠ型NoV快速检测方法与GⅡ型NoV快速检测方法相较于普通PCR与实时荧光PCR具有检测时间短、特异性强、灵敏度高以及检测操作简单快捷的优点,更适用于市场流通领域食品及医学检测等现场快速检测的应用。 展开更多
关键词 GⅠ型诺如病毒 GⅡ型诺如病毒 重组酶聚合酶扩增(RPA) 核酸检测试纸条
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我国陆生动物疫病诊断技术标准化建设现状 被引量:1
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作者 王伊琴 马贵平 +5 位作者 耿庆华 史喜菊 张利峰 常鸿 陈少博 杨帆 《中国动物检疫》 CAS 2018年第6期73-75,共3页
动物疫病诊断技术标准体系的建立,对于防控重大动物疫病具有重要意义。目前,我国92%的陆生动物疫病有相应诊断标准,但仍存在覆盖率有待提高、部分标准内容有交叉或重复、标准老龄化等问题。本文提出了对标准进行清理整合,完善动物检疫... 动物疫病诊断技术标准体系的建立,对于防控重大动物疫病具有重要意义。目前,我国92%的陆生动物疫病有相应诊断标准,但仍存在覆盖率有待提高、部分标准内容有交叉或重复、标准老龄化等问题。本文提出了对标准进行清理整合,完善动物检疫标准体系建设,由多家实验室实施标准多方验证,加强具有前沿性和自主知识产权的高技术标准研制等建议,以期为标准制定工作提供参考。 展开更多
关键词 陆生动物 动物疫病诊断 标准 现状 问题与对策
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非洲猪瘟病原学和流行病学研究新进展 被引量:21
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作者 史喜菊 刘环 +1 位作者 窦树龙 林茜茜 《中国动物检疫》 CAS 2020年第5期63-67,共5页
全球非洲猪瘟疫情形势十分严峻,2019年以来共29个国家/地区报告了新发或正在流行的疫情,非洲猪瘟的防控备受全世界关注。为全面了解非洲猪瘟病毒(ASFV)特性,概述了近年来对ASFV病原学特性和流行病学特点的一些新认识:ASFV对外界抵抗力较... 全球非洲猪瘟疫情形势十分严峻,2019年以来共29个国家/地区报告了新发或正在流行的疫情,非洲猪瘟的防控备受全世界关注。为全面了解非洲猪瘟病毒(ASFV)特性,概述了近年来对ASFV病原学特性和流行病学特点的一些新认识:ASFV对外界抵抗力较强,但怕干燥、高温、强酸和强碱;除家猪、野猪、软蜱外,苍蝇也可能扮演着储存宿主的角色;污染的饲料、饮用水也是ASFV的重要传染源,其中饮水造成ASFV感染的剂量更低,二者的风险点相差1万倍,防控时要高度重视饮用水;非洲猪瘟传播途径较多,但肉制品、环境、设备或车辆、人员是传播的重要风险因素,管理好其流动是防控的关键。本文对于识别非洲猪瘟的所有潜在传染源和传播途径,以便采取更有效的防控措施具有参考意义。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 病毒特性 流行病学 传播途径
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常见肉类成分荧光PCR检测试剂盒的比较
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作者 史喜菊 杜思乐 +12 位作者 蒲静 张伟 任彤 徐立伟 邓丛良 赵相鹏 高志强 汪琳 张佳玮 白子龙 张小寒 赖平安 宋悦谦 《中国动物检疫》 CAS 2022年第12期123-127,共5页
目前市场上肉类成分检测试剂盒种类繁多。为了评价不同厂家试剂盒的应用效果,选取当前市场上4个品牌的5种肉类成分荧光PCR检测试剂盒,对其特异性、灵敏性及效率成本进行了分析比较。结果显示:4个品牌的5种肉类成分荧光PCR检测试剂盒特... 目前市场上肉类成分检测试剂盒种类繁多。为了评价不同厂家试剂盒的应用效果,选取当前市场上4个品牌的5种肉类成分荧光PCR检测试剂盒,对其特异性、灵敏性及效率成本进行了分析比较。结果显示:4个品牌的5种肉类成分荧光PCR检测试剂盒特异性均较好,不同肉类之间没有交叉反应;但检测同一种肉类的不同品牌试剂盒及同一品牌检测不同肉类的试剂盒灵敏性存在差异;不同品牌的试剂盒检测时间和成本也有区别,A品牌耗时最短,D品牌价格最高。结果表明,不同品牌试剂盒的灵敏性、检测耗时和检测成本各有特点,使用者可根据使用目的及经费预算选择合适的试剂盒。 展开更多
关键词 肉类成分 荧光PCR试剂盒 比较
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我国陆生动物疫病诊断标准CNAS认可情况分析
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作者 王伊琴 马贵平 +5 位作者 耿庆华 史喜菊 张利峰 常鸿 杨帆 陈少博 《中国动物检疫》 CAS 2018年第8期66-68,共3页
中国合格评定国家认可委员会(CNAS)的标准认可对于增强疫病诊断的科学性、准确性和公众认可度具有重要意义。目前,我国73%的进境检疫陆生动物名录疫病已有CNAS认可的诊断标准或方法。但仍存在认可标准数量少、覆盖率低、方法更新和废止... 中国合格评定国家认可委员会(CNAS)的标准认可对于增强疫病诊断的科学性、准确性和公众认可度具有重要意义。目前,我国73%的进境检疫陆生动物名录疫病已有CNAS认可的诊断标准或方法。但仍存在认可标准数量少、覆盖率低、方法更新和废止不及时等问题。本文提出了加大对标准的CNAS认可力度,加强对CNAS认可标准的监管,促进国家级重点实验室、国家级科研机构参与国际认证和认可工作等建议。 展开更多
关键词 陆生动物 动物疫病 诊断标准 CNAS认可
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血清型特异性水泡性口炎病毒同步检测和鉴别方法的建立
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作者 史喜菊 李炎鑫 +2 位作者 刘全国 徐立伟 刘艳华 《中国动物检疫》 CAS 2020年第10期104-108,共5页
为准确地鉴别诊断新泽西型水泡性口炎病毒(VSV-NJ)和印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IND),本研究建立了可以同时检测和鉴别诊断VSV-NJ和VSV-IND的双重荧光RT-PCR方法,并对方法性能进行了测试和初步应用。结果显示,建立的双重荧光RT-PCR... 为准确地鉴别诊断新泽西型水泡性口炎病毒(VSV-NJ)和印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IND),本研究建立了可以同时检测和鉴别诊断VSV-NJ和VSV-IND的双重荧光RT-PCR方法,并对方法性能进行了测试和初步应用。结果显示,建立的双重荧光RT-PCR特异性为100%,最低检测限1~10个拷贝/μL,扩增效率E值均在99%左右,R2值分别为0.999和0.998。VSV-NJ和VSV-IND单荧光RT-PCR与双重荧光RT-PCR的相关性系数分别为0.9997和0.9994,与单荧光RT-PCR相比,该引物和探针的双重体系混合对特异性和敏感性均未产生明显干扰。用已知VSV-NJ及VSV-IND阳性核酸验证,发现符合率为100%,对50份临床样品的检测均为阴性,与单荧光RT-PCR结果一致。本研究建立的双重荧光RT-PCR方法实现了VSV-NJ和VSV-IND的同步检测和鉴别,为水泡性口炎的防控提供了技术储备。 展开更多
关键词 新泽西型和印第安纳型水泡性口炎 双重荧光RT-PCR 检测和鉴别
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戊型肝炎病毒食源性传播研究进展
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作者 余姓鸿 安微 +9 位作者 朱忠武 杨苗 张婧 陈世界 严玉宝 王新 周李华 汪琳 史喜菊 林华 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期217-223,共7页
戊型肝炎病毒(HEV)是一种全球性食源性病原体,猪、牛、兔、骆驼等多种动物均可成为其宿主。人类直接接触受HEV感染的猪和其他动物,或食用受污染的食物(未加工或未煮熟)均有感染该病毒的风险。本文综述了HEV的病原学、流行病学特征和在... 戊型肝炎病毒(HEV)是一种全球性食源性病原体,猪、牛、兔、骆驼等多种动物均可成为其宿主。人类直接接触受HEV感染的猪和其他动物,或食用受污染的食物(未加工或未煮熟)均有感染该病毒的风险。本文综述了HEV的病原学、流行病学特征和在动物中的流行情况,以及对肉类及其制品、水生环境、水产品和蔬菜等作物的污染情况,可进一步了解HEV食源性传播风险,为预防和控制戊型肝炎的流行提供科学依据。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 肉类制品 水产品 作物 食源性传播
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侵染牡丹的苹果茎沟病毒分离物基因组测序及分析
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作者 陈玲 郭铖 +4 位作者 贾安宁 邓丛良 种焱 史喜菊 李永强 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2735-2747,共13页
前期在北京地区种植的牡丹中检测到了苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV),并获得了1个ASGV牡丹分离物的基因组全序列。为分析侵染牡丹的ASGV的遗传多样性,根据已报道的118个ASGV基因组全序列的保守区设计特异性引物,用重叠(o... 前期在北京地区种植的牡丹中检测到了苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV),并获得了1个ASGV牡丹分离物的基因组全序列。为分析侵染牡丹的ASGV的遗传多样性,根据已报道的118个ASGV基因组全序列的保守区设计特异性引物,用重叠(overlapping)RT-PCR和cDNA末端序列快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得9个ASGV牡丹分离物的基因组全序列。共计10个ASGV牡丹分离物,基因组全序列成对比对的核苷酸一致性为81.9%~97.6%,与其他物种ASGV分离物基因组全序列的核苷酸一致性为80.8%~91.2%。序列分析表明ASGV牡丹分离物的分子多样性主要位于多聚蛋白的保守结构域Mtr和P-Pro之间以及RdRp与CP之间。用127个ASGV基因组全序列进行重组分析,5个牡丹分离物被鉴定为重组体,其中1个重组体的重组亲本来源于不同国家的不同寄主植物。用79个非重组的ASGV基因组全序列构建系统发育树,表明ASGV牡丹分离物与ASGV苹果、梨和柑橘等分离物共同聚类到第Ⅰ组,且ASGV牡丹分离物聚到不同的分支。研究结果表明侵染牡丹的ASGV具有遗传多样性,重组可能是导致其遗传多样性的一个因素。 展开更多
关键词 苹果茎沟病毒 牡丹 基因组全序列 序列分析 重组 系统发育
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猪瘟、非洲猪瘟和猪水泡病毒多重荧光RT-PCR同步检测和鉴别诊断方法的建立及应用 被引量:3
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作者 史喜菊 刘艳华 +5 位作者 马贵平 李炎鑫 刘全国 赖平安 高志强 徐立伟 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期426-431,共6页
以非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪水泡病毒(SVDV)为研究对象,建立可以同时检测和鉴别诊断这3种病毒混合感染的多重荧光RT-PCR方法,并与单荧光RT-PCR进行比较。经荧光RT-PCR标准曲线分析,建立的所有多重和单重荧光RT-PCR扩增效... 以非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪水泡病毒(SVDV)为研究对象,建立可以同时检测和鉴别诊断这3种病毒混合感染的多重荧光RT-PCR方法,并与单荧光RT-PCR进行比较。经荧光RT-PCR标准曲线分析,建立的所有多重和单重荧光RT-PCR扩增效率E值为90%~110%,R2>0.98,扩增效果良好。敏感性分析结果表明,与单重荧光RT-PCR检测限相比,多重荧光RT-PCR的Ct值略有升高,但结果仍可达到1~10拷贝/μL。特异性分析结果表明,所建立的单重和多重荧光RT-PCR方法特异性均为100%,引物和探针只能扩增出各自的目标病原,无交叉反应。ASFV、CSFV和SVDV单重荧光RT-PCR与多重荧光RT-PCR之间的相关系数分别为0.9988、0.9978和0.9976,与单重荧光RT-PCR相比,建立的多重荧光RT-PCR没有产生明显的干扰和敏感性降低现象。对20份CSFV阳性样品、25份ASFV阳性样品进行验证,100%符合;分别从200份血液和300份肉制品中筛查到ASFV阳性8份和10份,并与单重荧光RT-PCR检测结果相吻合。建立的多重荧光RT-PCR方法可以实现1次取样、1次分析,同时检测和鉴别3种病毒的目的,适用于临床样品混合感染的快速筛选。 展开更多
关键词 猪瘟 非洲猪瘟 猪水泡病 多重荧光RT-PCR 检测和鉴别
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Integration of biosafety surveillance through Biosafety Surveillance Conceptual Data Model
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作者 Wang Songwang Li Yangfei +8 位作者 Chen Qiang Feng Xiaoyu shi xiju Huang Ying Mei Li Li Wei Liu Haizhou Qi Xiaopeng Liu Di 《Biosafety and Health》 2019年第2期98-104,共7页
The global movement of people and goods has increased the risk of biosecurity threats and their potential to induce large economic,social,and environmental harm.Integration of biosafety monitoring networks has become ... The global movement of people and goods has increased the risk of biosecurity threats and their potential to induce large economic,social,and environmental harm.Integration of biosafety monitoring networks has become a top priority for addressing biosafety issues.In order to resolve the data standards and integration problems in the field of biosafety in China,the Biosafety Surveillance Conceptual Data Model(BSCDM),which is an object-oriented,hierarchically designed,flexible and scalable biosafety surveillance concept data model,is proposed in this article.This model is based on the integration of business process management and data resources of disease surveillance,animal disease surveillance and potential invasive biological monitoring.In reference to the Public Health Conceptual Data Model(PHCDM)and Federal Enterprise Architecture(FEA),BSCDM conducts a thorough analysis of biosafety monitoring activities,records basic information requirements of biosafety monitoring and provides data set standards for biosafety-related activities.It is developed with the Unified Modeling Language(UML)and could be applied as an open standard for accelerating data analysis and promoting collaboration.This study attempts to integrate biosafety monitoring data and the presented model has been tested in the detection of dengue fever in China and will be applied to other biosafety fields. 展开更多
关键词 BIOSAFETY Conceptual data model Data integration Data standard
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