肌萎缩侧索硬化症病程中骨骼肌内铁沉积及其调节

目的研究肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)小鼠模型骨骼肌中铁沉积及相关转运蛋白的表达变化,探讨铁调节蛋白1(IRP1)的可能调节作用。方法选取携带人源SOD1G93A突变基因小鼠(ALS鼠)和同窝野生型小鼠(WT鼠)为动物模型,分别收集发病前期(70d)、发病早期(95d)、发病期(108d)、发病后期(122d)模型鼠腓肠肌,以普鲁士蓝染色法检测骨骼肌内铁沉积;Western blot技术检测铁转入蛋白二价金属离子转运蛋白1(DMT1)、铁转出蛋白ferropotin1(FPN1)和IRP1的表达变化。结果在ALS鼠发病期及发病后期腓肠肌内检测到铁沉积。与同窝WT小鼠相比,随病程进展ALS鼠腓肠肌中DMT1表达增高;FPN1水平除70d有增高趋势外,其他时间点ALS组均较WT组呈现降低趋势,但差异无统计学意义。IRP1在70d和95d表达显著降低,随病程进展较WT组呈现上升趋势。结论ALS病程中腓肠肌内铁转运调节失衡可导致腓肠肌内铁沉积。IRP1部分参与铁转运蛋白的表达调节。

Expressions of iron metabolism related proteins in the spinal cord of amyotrophic lateral sclerosis transgenic mice

To verify the dynamic expressions of iron transporters during ALS progression,we investigated the expression and co-localization of divalent metal transporter 1(DMT1),ferroportin 1(FPN1)and iron regulatory protein 1(IRP1)in the spinal cord of transgenic mice harboring hSOD1G93A gene mutation(ALS mice)and non-transgenic littermates(WT mice)at 70 d,95 d and 122 d.Western blotting showed that in spinal cord of ALS mice,DMT1 was down-regulated from 70 d.FPN1 was transiently up-regulated at 70 d,and declined at 95 d and 122 d.

抗新型冠状病毒分泌型IgA的构建及其经鼻给药的生物分布研究

目的以实验室前期开发的1株IgG型抗新型冠状病毒中和抗体ZW2G10为模板,构建得到分泌型IgA(sIgA)并进行活性评价,明确sIgA经鼻给药后在ICR小鼠体内的生物分布。方法sIgA经表达、纯化和鉴定后,通过ELISA和假病毒中和实验评价其结合活性和中和活性。sIgA偶联Alexa Fluor 750荧光染料,对小鼠进行滴鼻,活体成像观察sIgA的体内生物分布;将小鼠解剖后,观察sIgA在各器官组织的分布状况。结果与IgG型抗体相比,sIgA保留了与SARS⁃CoV⁃2 S蛋白的结合能力,其中和能力得到增强。sIgA以1 mg/kg的单次剂量滴鼻后,可在小鼠肺部留存72 h以上;在其他器官组织中,仅鼻腔和胃肠道在滴鼻后8 h内检测到抗体存在,在心脏、肝脏、肾脏、脾脏、脑、膀胱和血液中均未检测到抗体存在。结论成功构建通用、高效的sIgA表达体系,明确了sIgA经鼻给药后可有效针对呼吸道和肺部,sIgA有望成为提供即时被动免疫保护的潜在药物。

肌萎缩侧索硬化症小鼠骨骼肌和脊髓内 TNF-α、IL-1β表达变化

目的检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)基因在肌萎缩侧索硬化(ALS)小鼠模型骨骼肌和脊髓内表达的动态变化。方法选取hSOD1G93A转基因小鼠(ALS鼠)及同窝野生型小鼠(WT鼠)为动物模型,分别于生后70d、95d、108d、122d取ALS鼠及WT鼠腓肠肌和脊髓组织提取RNA,应用Real-time PCR技术检测各时间点组织内TNF-α、IL-1β的表达变化。结果与WT鼠相比,ALS鼠骨骼肌中TNF-α在108d、122d表达显著升高;IL-1β的表达在70d、95d、122d显著升高。脊髓中TNF-α在70d、108d、122d表达显著升高;IL-1β在108d、122d显著升高。结论随ALS小鼠病程进展,骨骼肌和脊髓中TNF-α和IL-1β基因动态表达改变存在时间差异,脊髓的神经炎症与骨骼肌炎症可能相互影响。