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稳定表达猪BRD4-BD1/2蛋白的猪肺泡巨噬细胞传代细胞系的构建及其用于ASFV增殖的效果观察
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作者 吴梦丽 孙华林 +4 位作者 杨吉飞 赵亚茹 关贵全 殷宏 牛庆丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4646-4659,共14页
前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)有助于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的复制,为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响,通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD... 前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)有助于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的复制,为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响,通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD1/2结构域,利用慢病毒表达系统成功构建稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系,分析ASFV在3D4/21-BRD4-BD1/2细胞系与WT细胞系之间的复制差异。首先,以家猪基因BRD4-BD1/2为靶标,构建了含有3x Flag标签的重组质粒pLVX-IRES-puro-3x Flag-BRD4-BD1/2,并将其与质粒pMD2.G和pSPAX2共同转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得具有感染能力的慢病毒。使用慢病毒感染3D4/21细胞后通过嘌呤霉素药物筛选,成功获得了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染3D4/21-BRD4-BD1/2细胞后CP204L和B602L基因的转录水平以及相应蛋白表达水平,并通过HAD50测定评价ASFV的复制能力。研究结果表明:成功构建了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。与3D4/21-WT细胞系相比,BRD4-BD1/2稳定表达细胞系能够显著促进ASFV复制。本研究提供了深入研究BRD4蛋白在ASFV复制中功能的生物材料,并为ASFV疫苗候选株的开发提供了理论基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 BRD4 BD1/2 3D4/21细胞 稳定表达细胞系
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磷石膏浮选脱色提纯工艺试验研究
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作者 赖婧怡 李炜民 +3 位作者 孙桦林 李防 汪凤玲 魏以和 《有色金属(选矿部分)》 CAS 2024年第7期85-92,共8页
磷石膏是湿法制取磷酸工艺中产生的副产物,是磷化工行业产生的大宗工业固废,对自然环境和经济发展造成了严重危害。由于磷石膏中含有可溶磷、可溶氟、有机质及石英等杂质,使其难以直接被大规模利用,因此需要选择合适的方法对磷石膏进行... 磷石膏是湿法制取磷酸工艺中产生的副产物,是磷化工行业产生的大宗工业固废,对自然环境和经济发展造成了严重危害。由于磷石膏中含有可溶磷、可溶氟、有机质及石英等杂质,使其难以直接被大规模利用,因此需要选择合适的方法对磷石膏进行脱色提纯。为降低长江流域尤其是湖北省的磷石膏尾矿库的堆存风险,针对湖北宜昌某大型磷化工企业产生的磷石膏,研究了浮选法对磷石膏脱色提纯的影响,采用表面活性剂的复配对磷石膏进行增白和提纯,把不同类型的表面活性剂进行一定的组合复配后,得到复配后的混合物往往比原先单一组分的药剂在性能上更加优越,在试验时复配药剂产生增效加和的作用,更有利于磷石膏的脱色;再以十二胺作为捕收剂研究了磷石膏进一步浮选除杂提质的工艺,把重心放在增加精选次数上会更有效地获得符合预期指标的磷石膏精矿;最后确定了将磷石膏完成脱色提纯的药剂制度和浮选工艺。采用一次反浮选脱色流程,可以获得产率为90.88%、精矿白度为53.80%的浮选指标;通过“一反一正三精”的浮选工艺进行脱色提质,最终可获得产率为80.59%、精矿白度为60.80%、石膏纯度为99.32%的浮选指标。提纯后的磷石膏精矿达到企业要求的选别指标,为磷石膏的资源化利用提供了性价比更高的渠道。 展开更多
关键词 磷石膏 浮选法 浮选药剂 工艺流程
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关于辽宁高等教育和职业教育助力振兴发展情况的调研报告 被引量:6
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作者 唐国华 孙华林 +2 位作者 张国林 高向辉 刘铸 《现代教育管理》 CSSCI 北大核心 2018年第7期1-7,共7页
2017年以来,辽宁省高等教育和职业教育战线认真学习宣传贯彻党的十八大、十九大精神,在省委、省政府的坚强领导下,将全面落实新发展理念和"四个着力""三个推进"有机结合,全面深化高中等教育供给侧结构性改革,充分... 2017年以来,辽宁省高等教育和职业教育战线认真学习宣传贯彻党的十八大、十九大精神,在省委、省政府的坚强领导下,将全面落实新发展理念和"四个着力""三个推进"有机结合,全面深化高中等教育供给侧结构性改革,充分发挥全省高中等教育引领振兴、服务振兴、保障振兴的能力水平。其主要做法是:聚焦顶层设计,突出深化改革治本之策;优化结构布局,狠抓教育供给关键之举;紧盯关键环节,夯实内涵发展质量之基;创新发展思路,铸就振兴发展腾飞之翼;围绕民生热点,深挖就业创业力量之源。但是,也存在一些问题,如高等教育发展水平与辽宁老工业基地的振兴发展要求不匹配,高校服务"五大区域发展战略"的工作形式还比较单一,中职学校布局不合理,高职院校办学规模普遍偏小,部分职业院校办学定位不清晰,办学理念不先进,办学特色不鲜明,大学生地区间就业不平衡等。进一步提高辽宁高等教育和职业教育助力振兴发展的能力和水平还需要做好以下工作:一是加大高中等教育布局结构调整力度,二是进一步深化人才培养模式改革,三是不断打造教育与经济社会融合发展新格局,四是深化考试招生制度改革,五是做好毕业生创业就业工作,六是加强高端人才队伍建设,七是深入推进高校绩效管理改革。 展开更多
关键词 高等教育 职业教育 人才培养 振兴发展
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快肌与慢肌失神经支配后的形态学变化 被引量:3
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作者 沈筠恬 喻妙梅 +2 位作者 仇嘉颖 孙华林 丁斐 《解剖学杂志》 CAS 2019年第2期167-172,共6页
目的:探讨快肌(胫前肌)与慢肌(比目鱼肌)在失神经支配过程中的形态学差异。方法:本研究拟采用大鼠坐骨神经离断模型,通过组织病理学系统分析失神经支配过程中胫前肌与比目鱼肌在形态学方面的变化。结果:在坐骨神经损伤后不同时间点,将... 目的:探讨快肌(胫前肌)与慢肌(比目鱼肌)在失神经支配过程中的形态学差异。方法:本研究拟采用大鼠坐骨神经离断模型,通过组织病理学系统分析失神经支配过程中胫前肌与比目鱼肌在形态学方面的变化。结果:在坐骨神经损伤后不同时间点,将比目鱼肌的萎缩程度与胫前肌相比,显示比目鱼肌的萎缩程度较胫前肌严重,主要表现在比目鱼肌的肌肉湿重比较小、肌纤维截面积比率较低、超微结构较不完整、运动终板破损较严重。结论:失神经支配后慢肌萎缩程度较快肌严重。 展开更多
关键词 神经损伤 快肌 慢肌 失神经支配 肌萎缩
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多中心风湿免疫病生物样本库标准化建设与意义 被引量:2
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作者 曾惠琼 丁慧华 +5 位作者 熊力群 唐元家 孙华麟 康晓楠 张跃 叶志中 《转化医学杂志》 2019年第5期282-286,共5页
目的探讨风湿免疫病样本的采集和保存、以及生物样本库的建立和信息化管理方法。方法以深圳市福田区风湿病专科医院为依托,采用相关技术收集各类样本,包括患者的血液、尿液、DNA等;用-80℃冰箱冷冻、液氮罐等保存样本;同时建立信息系统... 目的探讨风湿免疫病样本的采集和保存、以及生物样本库的建立和信息化管理方法。方法以深圳市福田区风湿病专科医院为依托,采用相关技术收集各类样本,包括患者的血液、尿液、DNA等;用-80℃冰箱冷冻、液氮罐等保存样本;同时建立信息系统用于风湿免疫病生物样本库的规范管理,包括样本存放位置、样本使用、实验结果分析、综合查询、质量控制、样本废除管理等;并通过云共享实现多中心生物样本库管理。结果自2014年12月起筹建风湿免疫病生物样本库,截至2019年7月31日,已经实现了对736人次风湿免疫病和52人次健康对照者样本的收集和信息化管理;在生物样本库建立和维护的过程中,从样本入库、保存、出库等多个环节实现了对样本的标准化技术质量控制。结论通过建立院级风湿免疫病生物样本库与远程云共享生物样本库平台,将临床样本高质量地保存下来,为基础、临床研究提供丰富宝贵的资源,为研究的可持续发展提供保障。风湿免疫病生物样本库的建立同时也使疾病样本的储存系统化和规范化,对相关疾病早期诊断、新药研发、基因检测、遗传病发病机制等领域均有重要作用,同时也为转化医学提供基础平台。 展开更多
关键词 风湿免疫病 生物样本库 标准化
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HDAC4 knockdown alleviates denervation-induced muscle atrophy by inhibiting myogenin-dependent atrogene activation 被引量:1
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作者 Shen Yuntian Yang Xiaoming +1 位作者 Su Wenfeng sun hualin 《解剖学杂志》 CAS 2021年第S01期40-40,共1页
Denervation can lead to progressive skeletal muscle atrophy.At present,there is no effective treatment for muscle atrophy.Histone deacetylase 4(HDAC4)has recently been found to be closely related to muscle atrophy,but... Denervation can lead to progressive skeletal muscle atrophy.At present,there is no effective treatment for muscle atrophy.Histone deacetylase 4(HDAC4)has recently been found to be closely related to muscle atrophy,but the underlying mechanism of HDAC4 in denervation-induced muscle atrophy have not been described clearly.In this study,HDAC4 inhibition can effectively delay denervation-induced muscle atrophy,reduce the expression of muscle specific E3 ubiquitin ligase and autophagy related proteins,alleviate muscle fiber type transition and enhance the expression of SIRT1 and PGC1a.Transcriptome sequencing and bioinformatics analysis was performed and suggested that HDAC4 may be involved in denervation induced muscle atrophy by regulating response to denervation involved in regulation of muscle adaptation,cell division,cell cycle,apoptotic process,skeletal muscle atrophy,and cell differentiation. 展开更多
关键词 ATROPHY SIRT1 INHIBITING
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宿主蛋白RPSA在非洲猪瘟病毒复制过程中的作用研究
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作者 邵程祥 张忠辉 +6 位作者 孙华林 赵亚茹 杨吉飞 关贵全 殷宏 武军元 牛庆丽 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1149-1156,共8页
本研究旨在探究宿主RPSA蛋白对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)复制的影响,以及病毒蛋白B602L与RPSA之间的相互作用。利用RPSA重组质粒pcDNA3.1-Flag-RPSA转染293T细胞,通过免疫荧光检测B602L和RPSA蛋白的亚细胞定位,通... 本研究旨在探究宿主RPSA蛋白对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)复制的影响,以及病毒蛋白B602L与RPSA之间的相互作用。利用RPSA重组质粒pcDNA3.1-Flag-RPSA转染293T细胞,通过免疫荧光检测B602L和RPSA蛋白的亚细胞定位,通过免疫共沉淀(Co-IP)验证它们之间的相互关系。通过荧光定量PCR和Western-blot分析ASFV感染IPAM细胞在不同时间点RPSA的表达差异。此外,通过在IPAM细胞中过表达或干扰RPSA的表达,分析RPSA对ASFV复制的影响。研究结果表明,ASFV感染IPAM细胞后,RPSA蛋白的表达随时间延长而逐渐增加,表明RPSA蛋白可能在病毒感染中发挥作用。通过过表达RPSA可抑制病毒复制,而干扰RPSA则导致病毒复制增强,进一步表明RPSA在ASFV复制过程中发挥重要作用。最后,Co-IP和亚细胞定位结果证明病毒蛋白B602L与宿主蛋白RPSA之间存在相互作用。综上所述,本研究揭示了宿主蛋白RPSA在ASFV复制过程中的作用,为进一步研究病毒与宿主之间的相互作用机制奠定了基础,也有助于深入了解ASFV的感染机制为疾病控制提供新的线索。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 B602L RPSA 相互作用
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