SOCS1的表观遗传学修饰与急性髓系白血病的关系

背景与目的:细胞因子信号转导抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)是公认的抑癌基因,研究SOCS1基因的表观遗传学修饰与急性髓系白血病发生、发展的关系。方法:采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)、体外细胞培养、药物干预、细胞增殖检测、基因敲除等技术,分析2016年2月—2018年12月邯郸市中心医院血液内科和河北省医科大学第二医院血液内科收治的110例急性髓系白血病患者及白血病细胞系U937和THP-1中SOCS1基因的表达、甲基化状态和疾病发生、发展的关系。同时分析SOCS1表观遗传学改变相关基因DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和DNMT3a及组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase 1,HDAC1)基因的变化。结果:在急性髓系白血病初治组和复发难治组中SOCS1基因甲基化率显著高于缓解组和正常对照组(48%和80%vs 0%和0%),其mRNA表达、蛋白水平显著低于其他两组,而DNMT1、DNMT3a和HDAC1表达却与SOCS1基因表达呈负相关。SOCS1的甲基化与治疗后完全缓解(complete remission,CR)率呈负相关。药物干预白血病细胞系后,随DNMT1、DNMT3a和HDAC1表达下降和SOCS1基因表达恢复,肿瘤细胞的生长受到抑制。结论:SOCS1基因的甲基化、组蛋白去乙酰化导致基因表达沉默,最终促进急性髓系白血病细胞的生长增殖。

髓系白血病细胞中细胞因子信号转导抑制因子1基因启动子去甲基化对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨髓系白血病(ML)细胞中细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)基因启动子去甲基化对细胞增殖、凋亡的影响。方法收集78例ML患者的骨髓标本(实验组)以及人ML细胞系U937、HL-60、K562为研究对象,另外收集50例健康捐献者的骨髓标本作为对照组。甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测ML患者骨髓标本中SOCS-1基因启动子甲基化状态,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ML患者骨髓标本以及人ML细胞系中SOCS-1 mRNA表达;Western blot检测ML患者骨髓标本以及人ML细胞系中SOCS-1蛋白表达。用0、0.8、1.6、3.2μmol/L地西他滨(DCA)分别处理U937细胞,并分别命名为空白组、DCA-L组(DCA低剂量)、DCA-M组(DCA中剂量)、DCA-H组(DCA高剂量)。MS-PCR检测各组细胞中SOCS-1基因启动子甲基化状态;qRT-PCR检测各组细胞中SOCS-1 mRNA表达;Western blot检测各组细胞中SOCS-1蛋白表达;CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果SOCS-1在ML患者中呈高甲基化状态,SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白在ML患者中的表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);人ML细胞系U937、HL-60、K562中SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白表达低于人骨髓基质细胞HS-5,差异有统计学意义(P<0.05),且U937细胞中SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白表达水平最低,因此,以U937细胞为研究对象进行后续实验。与空白组比较,DCA-L组、DCA-M组、DCA-H组中SOCS-1甲基化水平、450 nm处光密度值(OD_(450 nm))(24、48、72 h)降低,SOCS-1 mRNA及SOCS-1蛋白表达水平、细胞凋亡率升高(P<0.05),且随着DCA浓度的升高,上述指标的相应趋势越明显。结论SOCS-1去甲基化可抑制ML细胞增殖、促进细胞凋亡。

lncRNA TUG1和PCAT-1表达水平与多发性骨髓瘤预后的关系及其诊断价值分析

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)和前列腺癌相关转录产物1(PCAT-1)在多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的表达水平及与预后的关系,并探讨其诊断价值。方法选取2013年1月至2016年11月于该院住院治疗的MM患者90例作为MM组,另选取90例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测血清lncRNA TUG1和PCAT-1的表达水平;分析lncRNA TUG1和PCAT-1的表达水平与临床病理特征的关系;分析lncRNA TUG1和PCAT-1的表达水平与MM患者预后的关系;采用COX风险回归模型分析影响患者预后的危险因素;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析TUG1和PCAT-1对MM的诊断价值。结果MM组患者的血清lncRNA TUG1和PCAT-1表达水平高于对照组(P<0.05);lncRNA TUG1高表达组与低表达组、lncRNA PCAT-1高表达组与低表达组在年龄、β2微球蛋白和Ca2+水平方面比较,差异均有统计学意义(P<0.05);lncRNA TUG1高表达组3年生存率低于lncRNA TUG1低表达组(P<0.05),lncRNA PCAT-1高表达组3年生存率低于lncRNA PCAT-1低表达组(P<0.05)。多因素COX风险回归模型分析显示,年龄较大、β2微球蛋白水平较高、lncRNA TUG1高表达和PCAT-1高表达是影响MM患者预后的危险因素(P<0.05)。血清lncRNA TUG1的曲线下面积为0.777(95%CI:0.704~0.850);血清lncRNA PCAT-1的曲线下面积为0.648(95%CI:0.566~0.729)。结论血清lncRNA TUG1和PCAT-1在MM患者中高表达,lncRNA TUG1辅助诊断MM的价值优于lncRNA PCAT-1,血清lncRNA TUG1和PCAT-1表达水平与MM患者的预后相关。

烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

乙型肝炎表面抗原阴性的非霍奇金淋巴瘤患者化疗后乙型肝炎病毒再激活的影响因素分析

目的分析乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)阴性的非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者化疗后乙型肝炎病毒(HBV)再激活的影响因素。方法选取112例NHL患者,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组56例。所有患者均给予环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+醋酸泼尼松(CHOP)或利妥昔单抗+CHOP(R-CHOP)化疗方案,观察组患者于化疗前1周开始口服恩替卡韦。比较两组患者的HBV再激活率和肝功能不全发生率,分析HBV再激活的影响因素。结果观察组患者HBV再激活率、肝功能不全总发生率分别为10.71%、19.64%,均低于对照组的28.57%、35.71%,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。病理分期为Ⅲ~Ⅳ期及R-CHOP化疗方案是HBV再激活的危险因素(P﹤0.05),恩替卡韦是HBV再激活的保护因素(P﹤0.05)。结论 HBs Ag阴性NHL患者HBV再激活与多种因素相关,恩替卡韦可以减少NHL患者的HBV再激活率和肝功能不全总发生率。

初诊慢性髓性白血病患者接受酪氨酸激酶抑制剂治疗现状分析:国内多中心、回顾性真实世界研究

目的回顾性分析国内初诊慢性髓性白血病(CML)患者接受酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗现状。方法回顾性收集来自中国27个省市自治区共77个中心自2006年1月至2022年12月期间确诊、年龄≥18岁、确诊后6个月内接受伊马替尼、尼洛替尼、达沙替尼或氟马替尼作为一线治疗且资料相对完整的CML慢性期(CP)和加速期(AP)病例。分析一线TKI选择、目前用药现状、药物转换及原因,接受TKI治疗反应、结局及其影响因素。结果研究最终纳入6893例接受伊马替尼(4906例,71.2%)、尼洛替尼(1157例,16.8%)、达沙替尼(298例,4.3%)或氟马替尼(532例,7.2%)作为一线治疗的成人CML-CP(6453例,93.6%)和AP(440例,6.4%)患者。所有患者中位随访43(IQR 22~75)个月,共1581例(22.9%)患者由于耐药(1055例,15.3%)、不耐受(248例,3.6%)、为追求更好疗效(168例,2.4%)、经济或其他原因(110例,1.6%)换药。AP患者换药比例显著高于CP患者(44.1%对21.5%,P<0.001),且因耐药而转换治疗的比例也显著更高(75.3%对66.1%,P=0.011)。多因素分析显示,男性、低HGB浓度及ELTS评分中/高危组与CP患者较低的细胞遗传学、分子学反应获得率及较差的结局均相关,高WBC、一线接受第二代TKI治疗与较高的治疗反应获得率相关,初诊时携带Ph+附加染色体异常(ACA)与较差的无进展生存(PFS)相关,而Sokal评分中/高危组仅与较低的完全细胞遗传学反应、主要分子学反应获得率和较差的PFS相关;较低的HGB浓度和较大的脾脏与AP患者较低的细胞遗传学和分子学反应获得率相关,一线接受第二代TKI治疗与较高的治疗反应获得率相关,较低的PLT、较高的原始细胞比例和初诊时携带Ph+ACA与较差的无转化生存相关,初诊时携带Ph+ACA与较差的总生存相关。结论目前,绝大多数的初诊CP或AP CML患者可长期获益于TKI治疗,获得较好的治疗反应及生存结局。

BCD方案治疗后首次复发多发性骨髓瘤的方案选择及预后因素分析

目的分析多发性骨髓瘤(MM)患者一线采用硼替佐米、环磷酰胺、地塞米松(BCD)方案诱导治疗后首次复发采用不同二线治疗方案的疗效及预后因素。方法回顾性队列研究。收集2009年7月至2022年10月以北京协和医院为主的北方地区3家医院的经BCD方案诱导治疗后首次复发的MM患者,根据二线化疗方案将患者分为4组:免疫治疗组(包含达雷妥尤单抗、嵌合抗原受体T细胞免疫疗法的方案)、1种新药治疗组[包含蛋白酶体抑制剂(PI)或免疫调节剂(IMiD)之一,PI或IMiD组]、2种新药联合治疗组(同时应用PI和IMiD,PI+IMiD组)、传统化疗或姑息组。比较4组患者疗效、二线治疗无进展生存(2ndPFS)期和总生存(OS)期,并分析2ndPFS的影响因素。用Kaplan-Meier法进行生存分析,用Cox比例风险模型进行单因素和多因素分析。结果共纳入217例MM患者,中位年龄62岁(范围31~83岁),男性占56.2%(122/217),二线化疗方案比率分别为免疫治疗8.8%(19例)、PI或IMiD治疗48.4%(105例)、PI+IMiD治疗29.9%(65例)、传统化疗或姑息支持12.9%(28例)。免疫治疗组、PI或IMiD组、PI+IMiD组及传统化疗或姑息组的二线化疗后总反应率(ORR)分别为94.7%(18/19)、56.2%(59/105)、73.8%(48/65)、32.1%(9/28)(χ^(2)=24.55,P<0.001),中位2ndPFS期分别为17.7、9.0、9.2、4.6个月(χ^(2)=22.74,P<0.001),4组间差异有统计学意义,其中PI或IMiD组与PI+IMiD组2ndPFS相似(χ^(2)=1.76,P=0.923)。亚组分析显示,诊断时具有高危细胞遗传学异常的患者,首次复发时采用免疫治疗的2ndPFS最长(22.0个月)(χ^(2)=15.03,P=0.002)。多因素分析显示,二线方案选择免疫治疗(HR=0.11,95%CI 0.05~0.27)、最佳疗效达部分缓解及以上(HR=0.47,95%CI 0.34~0.66)、非侵袭性复发(HR=0.25,95%CI 0.17~0.37)为影响2ndPFS的独立因素。结论真实世界数据显示,一线BCD方案治疗后首次复发的MM患者,二线方案选择免疫治疗可获得更深的缓解和更长的无进展生存期,对基线具有高危细胞遗传学异常的患者亦是如此。

氟马替尼与伊马替尼治疗初发慢性髓性白血病慢性期患者的有效性及严重血液学不良反应发生率比较

目的比较氟马替尼与伊马替尼治疗初发慢性髓性白血病(CML)慢性期患者的治疗反应、结局以及严重血液学不良反应发生率。方法回顾性收集来自国内76个中心自2006年1月至2022年11月期间确诊、年龄≥18岁、确诊后6个月内接受氟马替尼或伊马替尼作为一线治疗且临床资料相对完整的CML慢性期病例。通过倾向性评分匹配(PSM)减少一线酪氨酸激酶抑制剂(TKI)药物选择偏倚,比较两种TKI的治疗反应及结局。结果研究最终纳入4833例接受伊马替尼(4380例)和氟马替尼(453例)作为一线治疗的成人CML慢性期患者。伊马替尼治疗组中位随访54(IQR:31~85)个月,7年完全细胞遗传学反应(CCyR)、主要分子学反应(MMR)、分子学反应4(MR4)和分子学反应4.5(MR4.5)累积获得率分别为95.2%、88.4%、78.3%和63.0%。7年无治疗失败生存(FFS)率、无进展生存(PFS)率和总生存(OS)率分别为71.8%、93.0%和96.9%。氟马替尼治疗组中位随访18(IQR:13~25)个月,2年CCyR、MMR、MR4和MR4.5累积获得率分别为95.4%、86.5%、58.4%和46.6%。2年FFS率、PFS率和OS率分别为80.1%、95.0%和99.5%。PSM分析显示,氟马替尼治疗组患者CCyR、MMR、MR4和MR4.5累积获得率及FFS率均显著高于伊马替尼治疗组患者(P值均<0.001),但两组患者PFS率(P=0.230)和OS率(P=0.268)差异无统计学意义。两组患者Ⅲ级及以上血液学不良反应的发生率相似(氟马替尼对伊马替尼:10.6%对8.0%)。结论氟马替尼治疗初发CML慢性期患者的治疗反应获得率及FFS率均高于伊马替尼,且严重血液学不良反应发生率相似。

抑癌基因SOCS1、SOCS3的甲基化与急性髓系白血病患者治疗转归及预后的关联分析

目的探讨抑癌基因细胞因子信号转导抑制因子1和3(SOCS1、SOCS3)的甲基化与急性髓系白血病(AML)患者临床治疗效果及预后的关系。方法采用RT-qPCR、甲基化特异性PCR和蛋白质印迹法检测80例初治AML患者及20例正常对照者SOCS1、SOCS3基因的甲基化状态及表达水平,利用R+G显带法检测染色体核型。将AML组分别根据SOCS1、SOCS3基因是否存在甲基化分为SOCS1甲基化组(n=39)和SOCS1非甲基化组(n=41);SOCS3甲基化组(n=44)和SOCS3非甲基化组(n=36)。比较两组年龄、性别、AML分型的差异。同时比较双基因甲基化组(n=29)、单一基因甲基化组(n=25)和双非甲基化组(n=26)中融合基因、染色体核型、治疗缓解率和AML预后分层的差别。结果AML组SOCS1、SOCS3基因甲基化率高于正常对照组(48.75%vs 0,55%vs 0),而基因的mRNA表达AML组[SOCS1:0.080(0.003,1.090);SOCS3:0.140(0.002,1.044)]较正常对照组[SOCS1:1.677(0.422,1.972);SOCS3:2.395±1.540]明显下降(P<0.001)。初治AML患者中,SOCS1、SOCS3甲基化组基因的mRNA及蛋白表达水平均低于非甲基化组和正常对照组(P<0.001),AML预后不良因素WT1/ABL基因突变高于非甲基化组(χ^(2)=9.674,P=0.008),治疗缓解率低于非甲基化组(χ^(2)=10.583,P=0.005)。基因甲基化与预后分层的分析结果显示,SOCS1、SOCS3的甲基化状态与分子遗传学(χ^(2)=6.137,P=0.046)预后不良相关,双非甲基化状态与细胞遗传学(χ^(2)=6.675,P=0.036)、分子遗传学(χ^(2)=9.693,P=0.008)预后良好相关。结论SOCS1、SOCS3的甲基化可导致基因表达沉默,与AML的不良治疗转归及预后均有相关性。

恶性淋巴瘤EPOCH化疗后乙肝病毒再激活状态及临床意义

目的:探究恶性淋巴瘤EPOCH方案化疗后乙肝病毒(HBV)再激活状态及临床意义。方法:选取2013-01-2018-01收治的恶性淋巴瘤合并HBV感染的患者45例为研究对象,进行EPOCH方案化疗,化疗结束后1个月进行疗效评估,其中完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)的患者纳入预后良好组,疾病进展(PD)纳入预后不良组。对比2组患者化疗前后肝功能指标、HBV血清标记物含量的变化情况。结果:45例患者化疗后,1个月内效果评估,结果分别为4例CR,9例PR,13例SD,19例PD;其中预后良好组26例(57.78%),预后不良组19例(42.22%)。2组患者化疗前的天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)肝功能指标及乙肝表面抗原(HBsAg)、HBV-DNA、抗-HBc水平等HBV血清学指标比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);2组患者化疗后的AST、ALT、TBIL、HBsAg、HBV DNA、抗-HBc水平较化疗前均有所升高,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组化疗后的AST、ALT、TBIL、HBsAg、HBV-DNA、抗-HBc水平指标均高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EPOCH化疗方案会诱导合并HBV感染的恶性淋巴瘤患者的HBV再激活,导致肝功能、HBV血清标记物含量水平升高,升高程度越明显,预后越差。

PERIODIC SOLUTIONS FOR HIGHER ORDER DELAY FUNCTIONAL DIFFERENTIAL EQUATION OF NEUTRAL TYPE WITH LINEAR RESTORING TERMS

Using the theory of coincidence degree, the authors studied the existence of periodic solutions for higher order delay functional differential equations of neutral type with restoring terms and some new results for the existence of periodic solutions have been obtained.