小鼠离体工作心脏模型及功能评价

目的 :为心力衰竭的基因研究提供理想的实验模型。方法 :建立小鼠离体工作心脏模型 ,并评价心功能状态。结果 :后负荷固定 (5 0mmHg) ,前负荷 5mmHg至 2 5mmHg范围内 ,左室收缩压 (LVPsys)、最大左室压力上升 /下降速率 (dLVPdtmax/dLVPdtmin)、冠状动脉流量 (CFlow)在前负荷 10mmHg时达最大值 ;平均主动脉压力 (AP mean)、平均主动脉流量 (AFmean)在前负荷 2 0mmHg达最大值 ;左室舒张末压 (LVEDP)与前负荷正相关 ,r=0 986 1。前负荷固定 (10mmHg) ,后负荷 4 0mmHg至 10 0mmHg范围内 ,LVEDP、CFlow与后负荷无关 ;LVPsys、dLVPdtmax、dLVPdtmin分别于后负荷 90、6 0、70mmHg时达最大值 ;APmean随后负荷的递增而增加 ;AFmean随后负荷的递增而减少。结论 :小鼠离体工作心脏在不同前后负荷下功能的改变完全符合Frank -Starling定律 。

应用荧光高效液相法检测心肌磷脂酶D的活性

目的:为心肌磷脂酶D活性的检测提供新的可靠、灵敏的实验方法。方法:提取心肌膜脂质,以荧光标记的磷脂酰胆碱及乙醇为底物。高效液相色谱条件:LiChrosphere100色谱柱(250mm×4mm,5μm)为固定相,流动相A液为正已烷-丙醇-冰醋酸(82∶17∶1,V∶V∶V),流动相B液为丙醇-水-冰醋酸(85∶14∶1,V∶V∶V),柱温45℃,流速1mL/min,梯度洗脱。荧光检测:激发波长475nm,发射波长515nm。结果:PLD标准品在0.625-40pmol范围含量与峰面积呈线性关系,相关系数0.999;孵育时间在0-45min,磷脂酰乙醇生成量与孵育时间呈直线相关;日内及日间变异系数分别为5.6%、6.9%。小鼠心肌样品色谱图见二酯酰甘油、磷脂酰乙醇、磷脂酸3个峰,心肌磷脂酶D活性检测水平为nmol.h-1.g-1。结论:荧光高效液相法是检测心肌磷脂酶D活性的简便、快速、准确、灵敏的实验方法。