异基因造血干细胞移植后小鼠共刺激分子表达与急性移植物抗宿主病的关系

目的探究异基因造血干细胞移植后小鼠共刺激分子表达及其与急性移植物抗宿主病(aGVHD)发病的关系。方法供体为5只C57BL/6J(H2KD^-H2KB^+)雄性小鼠,受体为30只CB6F1(H2KD^+H2KB^+)雌性小鼠。将受体小鼠随机分为单纯照射组、骨髓移植组和aGVHD组,每组10只。单纯照射组:受体小鼠接受γ射线照射后不注射任何细胞;骨髓移植组:受体小鼠接受γ射线照射后注射5×10^6个供体来源去T淋巴细胞的骨髓有核细胞;aGVHD组:受体小鼠接受γ射线照射后,同时注射5×10^6个供体来源去T淋巴细胞的骨髓有核细胞和3×10^7个供体来源脾细胞。采用log-rank生存曲线分析各组小鼠移植后生存情况。分别在移植后7、14、21、28 d采用流式细胞术检测骨髓移植组和aGVHD组小鼠外周血CD4^+T淋巴细胞和CD8^+T淋巴细胞表面共刺激分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、程序性死亡蛋白1(PD-1)、可诱导共刺激分子(ICOS)和CD28的表达情况,以及移植后21 d两组小鼠脾组织CD4^+T淋巴细胞内白细胞介素(IL)-17、γ干扰素、IL-4的表达情况,并在移植后21 d采用3,3’-二氨基联苯胺(DAB)染色检测两组小鼠结肠组织共刺激分子配体的表达情况。结果单纯照射组受体小鼠均在γ射线照射后19 d内死亡;骨髓移植组小鼠在γ射线照射后均未出现aGVHD症状,30 d内均存活;aGVHD组小鼠在γ射线照射后出现aGVHD症状的时间为14(11~18)d,生存时间为22(13~30)d。随着时间的推移,aGVHD组小鼠外周血CD4^+和CD8^+T淋巴细胞表面CTLA-4、PD-1表达在移植后均呈下降趋势,ICOS、CD28表达均呈上升趋势。在移植后28 d时aGVHD组小鼠外周血CD4^+和CD8^+T淋巴细胞表面CTLA-4、PD-1表达均低于骨髓移植组,ICOS、CD28表达均高于骨髓移植组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。DAB染色结果示,骨髓移植组结肠组织CD80、ICOS配体(ICOSL)、PD-1配体(PD-L1)表达均为阴性,aGVHD组结肠组织CD80、ICOSL、PD-L1阳性表达率分别为40%、80%、80%。与骨髓移植组比较,aGVHD组小鼠脾组织CD4^+T淋巴细胞内IL-17、γ干扰素表达均增加,IL-4表达减少,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论异基因造血干细胞移植小鼠发生aGVHD后,共刺激分子CTLA-4表达随时间推移逐渐降低。CTLA-4、ICOS、PD-1均可能通过调节辅助性T细胞(Th)1、Th2、Th17等T淋巴细胞亚群分布参与aGVHD的发生、发展。

恶性血液病患者异基因造血干细胞移植后骨髓T淋巴细胞亚群重建的动态观察

目的研究恶性血液病患者经异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后骨髓免疫重建中T淋巴细胞的重建规律及其与外周血中T淋巴细胞重建的差异。方法本研究采用前瞻性研究设计。收集2015年9月至2017年1月在我院血液科行allo-HSCT的41例恶性血液病患者的骨髓及外周血标本,收集同期7名健康供者的骨髓及外周血标本作为对照样本。用流式细胞术分析移植前和移植后15、30、60、90、180 d时的T淋巴细胞亚群分布,包括CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、辅助性T细胞(Th)1、Th2,并用Luminex技术检测Th1相关细胞因子白细胞介素2受体(IL-2R)、白细胞介素18(IL-18)水平。结果恶性血液病患者在移植后15 d和30 d时骨髓中CD4+T淋巴细胞比例均低于对照组(P均<0.05),至移植后180 d仍未见回升;CD8+T淋巴细胞比例在移植后早期(15、30 d)低于对照组(P均<0.01),60 d时恢复至正常水平;骨髓中CD4+和CD8+T淋巴细胞比例整体水平均低于外周血中水平(P=0.001、0.002)。恶性血液病患者在移植后15、30、60、90、180 d时骨髓中Th1比例均高于对照组(P均<0.05),且整体水平高于外周血中水平(P=0.006);骨髓中Th2比例在移植后90 d内均无明显变化,在180 d时高于对照组(P=0.034),但整体水平与外周血中水平无明显差异(P>0.05)。骨髓中CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在移植后逐渐下降,至移植后180 d时低于对照组(P=0.040);而骨髓中Th1/Th2比值在移植后90 d内各时间节点(15、30、60、90 d)均高于对照组(P均<0.01),180 d时与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。恶性血液病患者骨髓和外周血中IL-2R水平在移植后15、30、60、90 d均高于对照组(P均<0.05);IL-18水平在移植后15、30、60 d高于对照组(P均<0.05),但移植后90 d时仅外周血中水平与对照组差异有统计学意义(P=0.021);骨髓与外周血中IL-2R和IL-18整体水平均无明显差异(P均>0.05)。结论恶性血液病患者allo-HSCT后,骨髓中各T淋巴细胞亚群的重建规律不同,且与外周血中有所差异。

FGFR1基因异常在血液肿瘤中的临床意义

目的:研究血液系统肿瘤中成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因异常对疾病诊断、临床特征、病理机制及治疗选择的指导意义及临床应用。方法:收集我院2013年至2018年带有8号染色体短臂(8P)异常且病史资料较为全面的患者共29例,运用染色体R带显带技术对患者骨髓染色体进行核型分析,并运用荧光原位杂交技术(FISH)进行FGFR1基因检测。结果:FISH检测出FGFR1基因异常患者共7例,其中FGFR1基因扩增患者3例、易位改变患者2例、缺失患者2例。FGFR1基因扩增或缺失的5例患者均不伴有嗜酸性粒细胞增高,且染色体为复杂核型,预后较差;2例FGFR1基因易位病例为非复杂染色体易位,其中1例经骨髓移植后6年仍存活,另1例染色体核型分析8号短臂未见重排,但通过FISH检测证实了FGFR1基因的重排且为罕见的插入性易位。结论:FGFR1基因扩增或缺失病例多发生在复杂核型中,不伴有嗜酸性粒细胞升高,预后差。FGFR1基因易位患者伴有嗜酸细胞增多,符合伴FGFR1异常的髓系/淋系肿瘤的临床特征。染色体核型分析和FISH方法相结合可以提高异常克隆的检出。

基于机器学习算法的自体外周血造血干细胞采集预测模型构建与应用

目的筛选自体外周血造血干细胞(peripheral blood stem cell,PBSC)采集的危险因素并建立个体风险预测模型,以提高临床中自体PBSC采集的成功率。方法通过大数据平台收集2013年2月至2021年5月在海军军医大学第一附属医院血液科行自体PBSC采集术的恶性血液病患者757例,对患者进行单因素显著性统计学分析和多因素Logistic回归分析对PBSC采集危险因素进行筛选。采用Python 3.8.8版本、PyCharm 2021.1.3集成开发环境构建Logistic回归模型和前馈神经网络、最小二乘支持向量机、自动机器学习3种机器学习模型,并采用多种模型评价指标对其评价。结果共收集患者PBSC采集前的指标24项,单因素和Logistic回归分析筛选出11项PBSC采集危险因素。所构建的Logistic回归模型、前馈神经网络、最小二乘支持向量机和自动机器学习模型对自体PBSC采集风险预测的准确度分别为0.822、0.873、0.875和0.973。结论本研究所建自动机器学习模型能够准确预测自体PBSC采集结果,对提高临床自体PBSC采集成功率具有重要参考价值。

Some minimax theorems with strictly monotone transformation

Some two-function minimax theorems are proved. In these results, the staircase and quantitative-topological conditions of both functions involve strictly monotone transformation and mixing of functional values. Consequently, Lin Quan and Kindler＇s minimax theorems are generalized.