乙肝肝硬化患者HBV前C区和基本核心基因启动子序列分析

用套式PCR(nPCR)对 3 5例肝硬化患者血清HBV前C区和基本核心基因启动子 (BCP)进行扩增 ,阳性者用直接测序法进行序列分析。结果 2 3例HBVDNA阳性 ,阳性率为 65 7% ( 2 3 / 3 5 ) ,无正常序列标本 ,与e抗原产生有关的突变 :nt1762、1764双突变 (AT、GA) ,占 73 9% ( 17/ 2 3 ) ;nt1896点突变 (GA) ,导致终止密码产生 ,占2 1 7% ( 5 / 2 3 ) ;nt185 8点突变 (TC) ,占 2 1 7% ,其中标本 417、42 6、43 0同时在nt 185 6发生点突变 (CT)。其它的突变有nt1799点突变 (CG) ,占 47 8% ( 11/ 2 3 ) ,为无义突变 ;有 6例在nt1846发生点突变AT ,4例nt180 2 - 180 4发生突变 (TTCCGT) ;4例nt175 2位点突变 (AG) ;标本 43 2在nt175 1插入TG导致移码突变 ,并在nt1774- 1874发生缺失突变。说明HBVBCP和前C突变株在肝硬化患者中很常见 。

乙肝病毒A1762、G1764双突变是筛选男性HBsAg携带者肝癌最高危人群的生物学标记

目的探讨乙肝病毒A1762、G1764双突变是否可作为筛选HBsAg携带者肝癌最高危人群的生物学标记。方法对2 258名乙肝病毒无症状携带者进行前瞻性队列研究,其中HBV A1762、G1764双突变株组1 261人,野毒株组997人,跟踪随访队列,每6个月1次对观察对象抽血进行甲胎蛋白(AFP)检测及B超体检以检查肝癌发病情况。结果观察48个月,2 258名乙肝病毒无症状携带者中,共发生肝癌72例,突变株组64例,野毒株组8例,发病率分别为932.2/10万人年和203.5/10万人年,两组发病率差异有统计学意义(P<0.001),相对危险度(RR)为4.58。突变株组男性发病率1 827.8/10万人年,明显高于野毒株组的180.5/10万人年,两者比较差异有统计学意义(P<0.001),相对危险度为10.13。92.5%的男性病例有双突变;突变株组女性发病率为686.6/10万人年,高于野毒株组的233.3/10万人年,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),但相对危险度仅为2.94。结论双突变是筛选男性HBsAg携带者中肝癌最高危人群的很好生物学标记,但对女性筛选肝癌高危人群的意义不如男性。

用于降低能耗和控制二氧化碳排放的铁路车辆模型开发与应用

为助力英国2050年前实现碳中和目标,铁路运输线路将全面实现电气化。这期间,英国应采用其他措施以降低铁路运输碳强度。本文运用MATLAB/Simulink开发了一种Class 800型双模动力列车的详细模型,并根据英格兰西南部全天铁路运行获得的数据对该模型进行了验证。基于经验证的列车模型分析不同电气化比例线路对二氧化碳排放的影响,及制定降低列车二氧化碳排放的控制措施。结果表明,当列车运行在一条典型线路时,通过自主调节限速控制与发动机选择性关闭相结合的方法可减少二氧化碳排放19.1%。同时,运用该模型调查(间歇性/非连续性)线路电气化排放效率表明,线路全面电气化可使二氧化碳排放量减少66%。

隆安县乙肝病毒无症状携带者HBV前S基因缺失突变的研究

目的了解肝癌高发区隆安县乙型肝炎病毒(HBV)前S基因缺失突变株的流行情况。方法HBV表面抗原(HBsAg)无症状携带者从我们隆安县研究队列中选择,用套式聚合酶链反应对研究对象血清HBV前S基因扩增和序列分析。结果在66例标本中9例出现前S基因缺失突变,占13.6%(9/66)。9例缺失突变均为框内突变,其中7例突变发生在或涉及前S2区的5'末端。男6例、女3例出现前S基因缺失突变,但男女间突变率(12.0%,6/50与18.8%,3/16)差异无统计学意义(χ2=0.709,P>0.10);前S基因缺失突变率在基因型B、基因型C和重组基因型之间差异无统计学意义(χ2=0.002,P>0.95)。结论肝癌高发区隆安县居民HBV无症状携带者前S基因缺失突变率较高,这种突变与肝癌的关系值得进一步探讨。

隆安县乙型肝炎病毒感染的分子流行病学研究

目的 了解隆安县乙型肝炎病毒（HBV）的分子流行病学特征。方法 以分层抽样方法对隆安县全县12个乡、镇108个自然村30～50岁居民进行调查，抽取静脉血，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg），用套式聚合酶链反应（nPCR）对HBsAg阳性者检测血清HBVDNA。结果 在27379名受检者中，HBsAg阳性率为14．52％，各乡、镇的感染率不尽相同，平原片显著高于山区和丘陵片；男、女阳性率分别为16．66％和12．60％，男性明显高于女性；各年龄组HBsAg阳性率随年龄增长而呈下降趋势。在3975名HBsAg阳性者中，HBVDNA阳性率40．35％，阳性率在各乡、镇的分布也不一致；男、女HBVDNA阳性率分别为42．82％和37．44％，男性显著高于女性；也呈现随年龄增长而下降趋势。结论 隆安县仍是我区乙肝病毒高流行区，应加强防治。

肝癌组织中HBV核心基因启动子突变的研究

为深入了解乙肝病毒 (HBV)致癌机理 ,用套式PCR对广西 14例血清HBVDNA阳性的原发性肝癌患者癌组织、10例乙型病毒性肝炎患者血清及 10例乙肝病毒无症状携带者血清HBV核心基因启动子进行扩增 ,阳性者用Sanger氏双脱氧法做序列分析 ,发现肝癌组织 10例PCR阳性 ,阳性率 71.4 % ,所有PCR阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列 (nt 176 2A→T ,176 4G→A) ,并且在其周围各序列都有不同部位的点突变 ,标本C14核苷酸的缺失突变高达10个。乙肝患者 6例PCR阳性 ,其中 3例乙肝病毒核心基因启动子发生双突变。无症状携带者中 4例PCR阳性 ,其中仅 1例发生双突变。结果提示乙肝病毒核心基因启动子双突变在肝癌患者中较常见 ,肝炎患者次之 ,无症状携带者居最后。

乙型肝炎病毒前S缺失突变与肝癌关系的巢式匹配病例对照研究

目的了解乙型肝炎病毒(HBV)前S基因缺失突变是否是肝癌的危险因素以及它的作用是否受HBV核心基因启动子双突变的混淆影响。方法按巢式匹配病例对照研究的方法,从隆安研究队列中选择33对病例(肝癌患者)和对照(HBsAg无症状携带者),配对的条件之一是病例和对照HBV核心基因启动子序列相同,用套式聚合酶链反应(nested PCR)对研究对象血清HBV前S基因扩增和序列分析。结果肝癌患者组前S基因缺失突变率(45.5%,15/33)显著高于对照组(6/33,18.2%)(χ2=7.364,P<0.01);男女间突变率无显著性差异(28%与43.8%,χ2=1.386,P>0.05)。多因素条件logistic回归分析结果显示,前S缺失突变是肝癌的危险因素(危险比为7,95%可信区:0.861-56.894),而HBeAg,抗-HBe及肝功能则与肝癌无关。核心基因启动子双突变组与核心基因启动子野毒株组之间的前S缺失突变率无显著性差异(χ2=0.597,P>0.05)。结论HBV前S缺失突变是肝癌的独立的危险因素,它的发生及作用与核心基因启动子双突变无关。

HBsAg携带者配偶乙型肝炎病毒感染状况调查

目的了解广西乙型肝炎病毒(HBV)性传播状况。方法对我们2004年建立的隆安研究队列HBsAg无症状携带者的配偶采静脉血收集血清,用酶联免疫吸附试验检测HBV血清学标志物。结果 217名研究对象中,96.8%(210/217)有过去或目前感染乙肝病毒的标记,其中32例HBsAg阳性,阳性率为14.7%(32/217),男、女阳性率分别为15.4%(14/91)和14.3%(18/126),差异无统计学意义(χ2=0.051,P>0.05);107例HBsAb阳性,阳性率为49.3%(107/217);一名男性HBsAg和HBsAb同时阳性;有79例HBsAg,anti-HBs and HBeAg阴性,这79例要么抗-HBc和抗-HBe同时阳性,要么单项阳性,但都是HBVDNA阴性;有7人(包括男性3人、女性4人)没有任何乙肝感染标记,包括HBVDNA阴性。另外,122名HBVDNA阳性的HBsAg携带者其配偶(研究对象)有14人HBsAg阳性;95名HBVDNA阴性的HBsAg携带者其配偶有18人HBsAg阳性,两者阳性率无统计学差异(χ2=2.372,P>0.05)。HBeAg阴、阳性的HBsAg携带者其配偶的HBsAg阳性率分别为15.61%(27/173)和11.76%(4/34),两者也无统计学差异(χ2=0.093,P>0.05)。结论配偶因密切接触HBsAg携带者而受HBV感染的机会比一般人群大,但性别、病毒量和HBeAg不影响其配偶感染HBV的机会。

广西HBsAg无症状携带者HBV前S基因缺失突变的分子流行病学研究

目的了解广西HBsAg无症状携带者乙肝病毒(HBV)前S基因(PreS)缺失突变株的流行情况。方法按现况研究的原理,用三阶抽样法,在广西东、西、南、北、中各选定1个县,然后在每个县选择人口约1 000人的自然村,调查该村全人群HBV感染情况,用套式聚合酶链反应(nested PCR)对HBsAg阳性血清HBV前S基因扩增和序列分析。结果共调查4 513人,HBsAg总阳性率为8.7%(395/4 513),Pre-S基因缺失突变率为4.9%(17/350),男、女突变率(5.1%、4.5%)无显著性差异(2=0.07,P>0.05),25岁以下没有出现缺失突变,突变率在50岁年龄组最高,但各组间无显著性差异(P>0.05)。汉族人群突变率较高(6%);钦州突变率最高(7.5%),苍梧最低(1.5%),各民族之间、各县之间突变率均无显著性差异(P>0.05)。所有Pre-S缺失突变都是框内突变,82.4%(14/17)的突变发生在或涉及Pre-S2的5’端。Pre-S2起始密码发生突变率为6.9%(24/350)。基因型B、C、I和D前S基因缺失突变率分别为6.1%(7/114)、4.1%(9/221)、7.1%(1/14)和0(0/1),各组间无显著性差异(P>0.05)。结论广西HBV无症状携带者前S基因缺失突变率较低,PreS1的3’端和PreS2的5’端是缺失突变的好发部位,低年龄组罕见,突变与性别、民族、地理位置和基因型无关。

隆安县乙肝疫苗免疫逃避株的研究

目的查明隆安县部分乙肝疫苗免疫失败的原因。方法用套式PCR(nPCR)扩增41例隆安县接受乙肝疫苗免疫的儿童及其母亲血清HBVS基因 ,阳性者用直接测序法测序。结果23例HBVDNA阳性 ,阳性率为56%(23/41) ;表面抗原的4个主要亚型 (adr、adw、ayr、ayw)都出现在本研究中 ,其中以adw为主 ,占65.2 %(15/23) ,标本3及27儿童感染的亚型 (adw)不同于他们母亲感染的亚型 (adr及ayw) ;标本46兄弟俩及标本37均在aa145发生突变 (甘氨酸→精氨酸 ) ,标本64也在aa145发生突变 (甘氨酸→丙氨酸 )。另外 ,标本38在aa120发生突变 (脯氨酸→丝氨酸 ) ,标本27在aa129发生突变 (谷氨酰胺→精氨酸 )。结论隆安县存在乙肝疫苗免疫逃避株 ,提示免疫逃避株的产生是隆安县部分乙肝疫苗免疫失败的原因之一 ,这些免疫逃避株是目前阻断乙肝病毒母婴传播的难点。

隆安县HBsAg携带者丙型肝炎病毒感染调查

目的了解隆安县HBsAg携带者丙型肝炎病毒感染的情况，以便采取相应防治对策。方法随机抽取隆安县12个乡镇30-50岁乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）携带者2755人，用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）和乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）。结果在2755份HBsAg阳性血清中检出抗-HCV阳性13份，HBsAg携带者重叠感染丙型肝炎病毒的阳性率为0．47％，HBsAg阳性组及HBV、HCV重叠感染组e系统无显著性差异。既往病毒性肝炎史对丙肝感染无影响，有输血史的丙肝感染率显著高于无输血史者。结论该县HBsAg携带者中存在少数丙型肝炎病毒重叠感染，输血史是丙肝感染的主要途径。

基于长期研究队列的广西隆安县乙型肝炎病毒准种研究

目的明确广西隆安县队列HBsAg无症状携带者感染的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)准种序列长期演化特征。方法收集9名广西隆安县队列HBsAg无症状携带者2004年、2007年、2013年、2019年或2020年4个不同时间点血清样本。酶联免疫吸附测定法检测HBV血清学标志物;聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)荧光探针法检测HBV病毒载量;试剂盒提取HBV DNA;PCR法扩增HBV全基因组,进行二代测序;利用Mega等软件对所获得的序列进行生物信息学分析。结果共获得23份血清样本,309条全长基因准种序列,每份标本平均获得(0.18±0.07)G测序数据量。55.55%(5/9)的研究对象携带的HBV毒株基因型在长期进化过程中发生了基因型转换,PreS/S区系统进化树基因分型结果与全基因组分析结果完全一致;发现B/C、I/C重组体;各研究标本的Sn值范围为0~0.37,D值范围为0~0.11;共检出21种特殊单核苷酸/氨基酸突变位点(S区7种,X区2种,PreC区3种,BCP区9种)和6种缺失突变,发现多联突变组合形式,未发现任何耐药突变,77.8%(7/9)研究对象在2004年携带的HBV毒株发生了BCP区nt1762(A→T)/1764(G→A)双突变和PreC区1896位(G→A)点突变,HBV基因可在无抗病毒药物压力下由突变型可恢复为野生型和(或)野生型转变为突变型;HBV基因组进化率为2.03×10^(-5)~3.50×10^(-3)。结论在HBV自然感染进程中,HBV基因型和重组体、准种复杂性和多样性可随时间发生改变;HBV基因突变型和野生型可相互转换,一定程度上降低了利用基因型和相关突变来预测临床结局的价值;隆安县乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)无症状携带者HBV基因组进化率很高。

戊型肝炎病毒Ⅳ型在300例急性肝炎中的感染比例

目的 调查戊型肝炎病毒 (HEV)Ⅳ型在北京地区的急性散发性肝炎中的分布。方法采用RT nPCR的方法检测 30 0例急性散发性肝炎患者中HEVRNA ,并对阳性产物进行克隆测序 ,然后对其基因型进行分析。结果 在 30 0例急性散发性肝炎患者中PCR阳性为 2 5例 ,测序证实 2 5例PCR阳性者中 ,2 4例为HEV的基因序列 ;其中 9例为HEVⅠ型 ,15例为HEVⅣ型 ,占HEV感染的 6 2 .5 %(15 / 14 )。结论 在北京地区的部分急性散发性肝炎中HEVⅣ型感染占戊型肝炎的较大比例。

血清乙型肝炎病毒DNA阳性与原发性肝癌危险性关系的前瞻性队列研究

目的探讨血清HBV DNA阳性与原发性肝癌的关系。方法以分层抽样方法对广西隆安县12个乡镇30～55岁农村居民抽样，采静脉血，酶联免疫吸附试验检测HBsAg，套式聚合酶链反应检测HBV DNA。根据HBsAg和DNA检测结果，将研究对象分为HBsAg（＋）／HBvDNA（＋）组（A组）和HBsAg（＋）／HBVDNA（-）组（B组）；根据1：1匹配原则，从本村屯HBsAg（-）者中为前两组观察对象挑选对照，组成HBsAg阴性对照组（C组），对这3组人群进行4年的前瞻性跟踪随访。卡方检验对各组及各因素的发病率进行统计分析，然后用Cox比例风险模型分析与PLC有关的危险因素，用后退法对数值进行迭代分析。结果30～55岁人群HBsAg阳性率为14．52％（3975／27379），HBsAg阳性者HBV DNA阳性率为40．35％（1604／3975）。A、B两组总的肝癌发病率为672．45／10万人年，明显高于C组的17．19／10万人年（P〈0．01），相对危险度为39．123，95％可信因司为9．018～159．146。A组肝癌发病率为984．03／10万人年，显明高于C组的324．38／10万人年（P〈0．01），相对危险度为3．034，95％可信区间为1．795～5．125。对A、B两组进行肝癌危险因素的多因素Cox模型分析，结果表明性别、年龄、血清HBV DNA阳性、肝癌家族史和以玉米为主食均为肝癌的危险因素。结论血清HBV DNA阳性可增加HBsAg阳性者的肝癌危险性。

戊型肝炎病毒Ⅳ型全基因序列的分析

目的 分析戊型肝炎病毒 (HEV)Ⅳ型的全基因序列以比较与其他基因型的差异。方法 设计PCR引物对全基因进行分片段扩增 ,并对两个末端采用末端快速扩增方法 (RACE)进行扩增 ,对扩增产物进行克隆及测序。结果 HEV T1全序与Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型的核苷酸同源性分别为(74.8～ 75 .5 ) %、74.5 %和 (75 .3～ 76 .3) %。ORF1与已报道的Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型氨基酸同源性分别为(85 .0～ 86 .7) %、85 .0 %和 (88.5～ 88.7) % ;ORF2与已报道的Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型的氨基酸同源性分别为 (91.6～ 92 .4) %、90 .1%和 (91.9～ 93.0 ) % ;ORF3与已报道的Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型的氨基酸同源性分别为 (75 .9～ 77.8) %、75 .0 %和 (79.6～ 83.3) %。结论 这一研究为今后发展戊型肝炎诊断试剂及戊型肝炎疫苗提供了新的、重要的分子生物学基础。

广西地区乙型肝炎病毒无症状携带者乙型肝炎病毒前C区突变分析

目的 调查广西地区乙型肝炎病毒 (HBV)无症状携带者HBV前C区基因突变株的流行情况。方法 用套式聚合酶链反应 (nPCR)对 77例广西南部、北部地区人群HBV无症状携带者血清HBV前C区进行扩增 ,阳性者用直接测序法进行序列分析。结果 39例HBsAg无症状携带者血清HBVDNA阳性 ,阳性率为 5 0 .7% (39 77) ,突变株出现率为 2 2 .1% (17 77)。南部地区阳性率为5 5 .6 % (2 0 36 ) ,其中 6份标本出现突变株 ,占 30 % ,常见的突变类型是nt185 8位发生点突变 (T→C) ,只有一份标本在nt1896发生点突变 (G→A) ,导致终止密码产生 ,该标本同时伴有nt1837点突变(A→G) ;北部地区阳性率为 4 6 .3% (19 4 1) ,其中有 11份标本出现突变株 ,占 5 7.9% ,常见的突变类型是nt1896位发生点突变 (G→A) ,这些标本中有 4份同时在nt184 6发生点突变 (A→T) ,2份同时在nt186 2发生点突变 (G→T) ;标本 734分别在nt185 6、185 8发生点突变 (C→T、T→C)。结论 广西地区HBV无症状携带者HBV前C区突变株的流行率居全国中等水平 ,广西南部、北部是否存在主要突变类型不同值得进一步研究。

广西肝癌患者乙型肝炎病毒前C区基因的突变

目的 了解乙型肝炎病毒 (HBV)前C区基因突变与HBeAg阴性的原发性肝癌患者HBV感染的关系。方法 应用套式PCR方法对广西 16例原发性肝癌患者血清HBVDNA前C区进行扩增 ,对阳性者用SangerDNA测序法分析。结果 16例肝癌患者中有 14例HBVDNA阳性 ,阳性率为87 5 % (14/16 )。其中 1例HBeAg阳性 ,1例虽然HBeAg为阴性 ,但其前C区序列正常 ;2例为HBV野毒株和突变株混合感染 ;其余 8例为HBV突变株感染。该 8例中 ,仅第 4、5、12例的第 2 8密码为终止密码 ,有 1例为HBV终止密码株和无终止密码突变株混合感染。结论 经典的 1896位核苷酸点突变株感染在广西原发性肝癌患者中并不常见 ,提示可能存在前C区以外的基因突变 ,并导致HBeAg阴性的HBV感染。

HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒核心基因启动子突变的研究

目的了解HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒(HBV)核心基因启动子双突变(nt1762 A→T,nt1764 G→A)发生情况及其与基因型、病毒量和HBeAg的关系。方法 HBsAg无症状携带者从隆安研究队列中选择,用套式聚合酶链反应(nested PCR)对研究对象血清HBV核心基因启动子、S基因扩增、序列分析及基因分型,用HBV引物和双标记的TaqMan探针扩增和定量病毒DNA。结果观察开始时核心基因启动子为野毒株的109例观察对象,3年后双突变平均年发生率为2.8%;观察开始时已发生nt1762或nt1764点突变的59例对象,3年后另一个位点也发生突变的平均年发生率为6.8%,两率差异有统计学意义(χ2=5.109 0,P<0.05)。nt1762 A→T突变组HBeAg阳性率(45.5%,10/22)与nt1764 G→A突变组HBeAg阳性率(10.8%,4/37)差异有统计学意义(χ2=9.149,P<0.05)。20例基因型B未发生双突变,重组基因型年双突变率为4.8%(2/14),基因型C年突变率为3.1%(7/75),各基因型间突变率差异无统计学意义(P>0.05)。5例双突变发生后HBeAg仍然阳性者病毒量有下降趋势,而另5例突变发生后HBeAg阴性者其病毒量有升有降。结论 HBV核心基因启动子双突变年发生率较高,这两个位点中的任何一个发生突变是双突变的过渡形式,双突变与基因型无关,nt1764 G→A突变与HBeAg阴性有关。