血清对神经嵴细胞向神经胶质细胞分化诱导的体外研究

目的 :探讨神经嵴细胞在含血清培养基中向神经细胞的自发分化过程。方法 :取妊娠第8.5天的BALB/c胎鼠的神经嵴细胞 ,分别在无血清和含血清培养基中培养。免疫组化和透射电镜鉴定和观察神经嵴细胞的分化情况。结果 :在无血清的培养基中 ,NSE染色结果阳性 ,透射电镜下未见神经内分泌颗粒 ,神经嵴细胞保持其原有的特性 ;在有血清的培养基中 ,神经嵴细胞自发分化 ,胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经特异性烯醇化酶 (NSE)和S - 10 0染色阳性 ,透射电镜下可见大量的神经内分泌颗粒。结论 :血清可使神经嵴细胞自发的向神经胶质细胞分化。

颅神经嵴细胞向成骨细胞表型分化的诱导实验

目的 :观察颅神经嵴细胞 (CNCC)在体外是否可以向成骨细胞表型进行诱导分化。方法 :用标准的无血清培养液和含 10 -8mol/L地塞米松、5 0mg/L左旋抗坏血酸和 10mmol/Lβ -磷酸甘油钠的矿化诱导培养液对CNCC进行培养。 15d后取两组细胞用于实验 ,观察两组间细胞形态 ,群体倍增时间、活力细胞数、碱性磷酸酶的活性和OC的含量等方面的变化。结果 :诱导后的CNCC形态由成纤维样转变为多角形 ,细胞群体倍增时间延长 ,细胞活力数减少 ,碱性磷酸酶的活性和OC的含量升高。结论 :CNCC在特定的矿化诱导培养液中 ,可以向成骨细胞表型分化。

小鼠颅神经嵴细胞的培养和特征

目的 :在体外原代培养Balb/c小鼠胚胎的颅神经嵴细胞 ,为颅面部各种组织细胞的发育研究提供细胞来源。方法 :采用胰酶消化法分离小鼠胚胎第 8.5天的颅神经管 ,从小鼠颅神经管中游离出来的细胞即为颅神经嵴细胞。用免疫组织化学方法鉴定细胞的来源 ,并测定细胞的生长曲线。结果 :成功地培养出小鼠的颅神经嵴细胞 ,其形态类似成纤维样细胞。免疫组化检测结果表明 ,神经特异性烯醇化酶 (NSE)抗体染色结果阳性 ,细胞的群体倍增时间为 4 3.6 5h。结论 :原代培养的小鼠颅神经嵴细胞生长稳定 ,来源明确 。

软骨肿瘤中骨形成蛋白的原位杂交定位和定量分析

目的 探讨骨形成蛋白２，３，４，５在软骨肉瘤和软骨瘤形成中的作用。方法 运用原位杂交技术，检测 软骨肉瘤和软骨瘤中 ＢＭＰ ２，３，４，５ ｍＲＮＡ的分布和定位，并采用图像分析仪对原位杂交的阳性程度进行图像分 析。结果 软骨肉瘤中分化较差的梭形细胞中检测有ＢＭＰ ２，３，４ ｍＲＮＡ的表达，而分化状态较好的圆形、卵圆形 细胞中未见阳性信号。软骨基质中未见阳性信号，而软骨瘤中的瘤细胞中只检测到ＢＭＰ ３ｍＲＮＡ的表达。结论 ＢＭＰ表达的种类与软骨肿瘤的类型密切相关，ＢＭＰ ２，４在软骨肉瘤的发生和形成过程中起重要作用．而ＢＭＰ ３ 则与软骨瘤的发生有密切关系。

小GTP结合蛋白TC10在面神经损伤后的表达变化

目的 :探讨大鼠面神经切断后小 GTP结合蛋白 TC10 m RNA在面神经核中的表达变化。方法 :利用逆转录 PCR分析方法及甲苯胺蓝染色 ,观察正常以及面神经切断后 6、12、18、2 4h大鼠面神经核中 TC10m RNA的变化和细胞浆、核的体积变化。结果 :在正常面神经核中可见 TC10的微弱表达 ,面神经切断后 6 h即开始增加 ,术后 2 4h达到最大值。结论 :TC10可能在面神经损伤后的信号转导、细胞结构的变化中具有重要的意义。面神经损伤能促进神经元的信号转导 ,从而促进细胞转录水平的增加和结构的变化。

rhBMP-2诱导颅神经嵴细胞向神经元分化的体外研究

目的 :观察重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP - 2 )对颅神经嵴细胞的诱导分化作用。方法 :分别用不含rhBMP - 2的无血清培养液和含有不同浓度rhBMP - 2的培养液对颅神经嵴细胞进行培养。 10d后 ,观察两组细胞的形态学差别 ,用胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经纤维细丝蛋白 (NF)、颅神经嵴细胞的特异性抗体P75等抗体进行免疫组化染色 ,鉴定细胞的分化状态 ,并计算NF阳性细胞数的百分比及进行统计分析。结果 :在含有rhBMP - 2的培养液中 ,颅神经嵴细胞的形态由成纤维细胞样向神经元样的表型进行转变 ,可见较长的细胞突起出现。NF染色结果阳性 ,而GFAP、P75染色结果阴性。 5 0ng/mL组中 ,NF的阳性细胞数比其它浓度组明显增多 ,并有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :rhBMP - 2可以诱导颅神经嵴细胞向神经元进行分化 ,5

cyclinD1和CDK4在口腔正常上皮、炎症及鳞癌中表达的定量分析

目的 通过检测口腔粘膜的正常上皮、非特异性炎症上皮及鳞癌中 cyclin D1与 CDK4的表达 ,探讨其在上皮组织不同状态中的变化及意义 .方法 用临床病理标本 ,设立对照 ,选择 cyclin D1和 CDK4抗体免疫组化染色 .结果 cy-clin D1和 CDK4在正常口腔上皮与口腔鳞癌上皮、非特异性炎症与口腔鳞癌上皮中的表达间有统计学差别 (P<0 .0 5 ) ,正常组与炎症组间无差别 ,cyclin D1及 CDK4在口腔鳞癌上皮中过表达 (P<0 .0 5 ) .结论 cyclin D1与 CDK4过表达的机制可能由于基因扩增或其他因素使其蓄积 。

BMP-7、BMPR-Ι在大鼠面神经再生中面神经核内的分布及表达分析

目的 :通过检测面神经损伤后BMP - 7、BMPR -Ι在面神经核团内的定位及表达变化规律 ,探讨面神经损伤后再生过程中它们可能的作用机制。方法 :采用免疫组化ABC检测方法及计算机图像分析系统 ,观察大鼠面神经切断再吻合后 ,不同时间点面神经核内BMP - 7、BMPR -Ι的表达变化。结果 :①术后BMP- 7阳性表达出现下降 ,12h后降至最低值 ;随后上升 ,于 48h、2周分别出现两个高于正常对照组的峰值表达 ;以上三个时间点的表达水平同正常对照组相比均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。②BMPR -Ι表达术后即上升 ,于 2周时出现峰值 ,并维持至术后 4周 ,与正常对照组相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :本实验首次确证BMP -7、BMPR -Ι在面神经核神经元胞体内的表达 ,BMP - 7可能参与面神经损伤后的早期应激活动 ,而BMPR -Ι可能参与面神经再生过程的早期阶段。

褪黑素抑制四氧嘧啶糖尿病大鼠垂体-肾上腺轴功能

观察褪黑素对以四氧嘧啶诱发大鼠糖尿病时垂体 肾上腺轴的影响。结果提示褪黑素对糖尿病模型大鼠的垂体 肾上腺轴有抑制作用 ,对急性代谢紊乱有保护作用。

重组人骨形成蛋白2诱导颅神经嵴细胞向肾上腺能神经元分化的研究

目的 :研究重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP2 )诱导小鼠颅神经嵴细胞 (CNCC)分化后所产生的神经元类型是否为肾上腺能神经元。方法 :用 5 0ng/mlrhBMP2 诱导CNCC分化为神经元。提取诱导前后细胞内的总RNA ,用反转录聚合酶链反应 (RT -PCR)分别检测细胞中酪氨酸羟化酶 (TH )和γ -氨基丁酸受体 (GABAAR )亚单位的表达情况。结果 :诱导前的CNCC中 ,TH和GABAAR亚单位均无mRNA水平的表达 ,诱导后二者均有表达 ,但表达的量均低于脑组织中的表达。结论 :rhBMP2 诱导CNCC后所分化的神经元为肾上腺能神经元 ,但在功能上可能弱于正常的肾上腺能神经元。

小GTP结合蛋白TC10在面神经元再生中的表达及其意义

目的 探讨大鼠面神经切断后不同时期小GTP结合蛋白TC10mRNA在面神经核中不同时期的表达变化。 方法 利用逆转录PCR分析方法获得TC10cDNA探针 ,通过原位杂交方法观察正常以及面神经切断后不同时期大鼠面神经核TC10mRNA的变化。 结果 在正常面神经核中可见TC10的微弱表达 ,面神经切断后 1d面神经核运动神经元的灰度值即开始增加 ( 195 .83± 7.2 9) ,术后 1个月达到最大值 ( 15 4 .67± 4 .2 8)。 结论 TC10可能在面神经再生过程中的信号转导、细胞结构的变化中具有重要的意义 。