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2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化 被引量:42
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作者 张洪亮 张文立 +14 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 相丽润 冷超粮 李真 刘春晓 汤艳东 陈家锃 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期512-516,共5页
为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株n... 为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 PRRSV NADC30-like PRRSV 主要流行毒株 细胞嗜性
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2017年我国输入性北美1-7-4分支PRRSV的基因组序列分析 被引量:10
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作者 张洪亮 张文立 +10 位作者 相丽润 刘春晓 宋帅杰 汤艳东 冷超粮 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期875-879,共5页
为揭示我国猪场中的新发猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因组特征及起源,本研究对辽宁省两个发病猪场检测到的两株1-7-4分支PRRSV (LNWK96和LNWK130)进行遗传演化及测序分析。遗传演化分析显示,两株1-7-4分支PRRSV在我国PRRSV基因分... 为揭示我国猪场中的新发猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因组特征及起源,本研究对辽宁省两个发病猪场检测到的两株1-7-4分支PRRSV (LNWK96和LNWK130)进行遗传演化及测序分析。遗传演化分析显示,两株1-7-4分支PRRSV在我国PRRSV基因分群中属于一个新亚群,即第7亚群。对LNWK96株进行了全基因组序列分析显示,与我国分离的PRRSV株的核苷酸同源性为82.3%~84.9%,与美国分离的1-7-4分支IA/2014/NADC34株的同源性最高为96.1%。重组分析显示LNWK96株是以1-7-4分支的病毒为母本株,ISU30和NADC30病毒株提供重组片段的重组病毒。推测该两株PRRSV极有可能是来自北美的输入性1-7-4分支PRRSV。本研究首次报道1-7-4分支的PRRSV在我国出现,该类病毒株在我国的流行趋势值得关注,其致病性及当前疫苗的保护效果需要进一步研究。 展开更多
关键词 PRRSV 1-7-4 重组 输入 分子特征
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV免疫保护效果的评价 被引量:5
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作者 张洪亮 相丽润 +13 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 张文立 李真 汤艳东 陈家锃 冷超粮 王倩 彭金美 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期296-301,共6页
类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与... 类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)10^(5.0)TCID_(50)/头,免疫后21 d,免疫组和攻毒对照组每头各肌注2 mL和滴鼻2 mL类NADC30 PRRSV SD53-1603株(104.0TCID_(50)/mL)。攻毒后观察各组实验猪临床症状,可见攻毒对照组所有猪均发热,持续5 d9 d,免疫组仅2头猪发热1 d2 d。检测各组实验猪体重变化,结果显示,攻毒后免疫组和攻毒对照组体重增长均显著低于空白对照组(p<0.001),但攻毒14 d以后,免疫组体重增长显著高于攻毒对照组(p<0.05)。IDEXX ELISA测定各组猪血清中PRRSV的特异性抗体,结果显示免疫后14 d可以诱导免疫组仔猪产生良好的针对PRRSV的特异性抗体。利用荧光定量PCR测定血清和组织中的病毒载量,结果显示免疫组血清和组织中的病毒载量均极显著低于对照组(p<0.0001)。对PRRSV免疫后及攻毒后各组仔猪各脏器病理学观察,结果可见攻毒对照组与免疫组相比出现明显的剖检和组织病理学变化。以上结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV可以提供一定的交叉保护,该研究为评价我国现有疫苗是否对类NADC30 PRRSV具有保护效果提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 HuN4-F112 类NADC30 PRRSV 交叉保护
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猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建 被引量:5
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作者 李慧春 陈鹏飞 +12 位作者 李先斌 丁思嘉 王康 张文超 杨德强 李林 徐晶晶 虞凌雪 姜一峰 高飞 于海 童光志 周艳君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期19-24,共6页
猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,... 猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,提取了IECs的总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs后,将其与pGADT7-Rec和carrier DNA共同转化至酵母Y187菌株,进行选择性培养基(SD/-Leu)筛选以及文库容量及质量的鉴定。结果显示,本研究构建的IECs-cDNA文库其库容量为1.3×10~8 pfu/mL,插入cDNA片段长度为250~2500 bp,文库阳性率达100%。本研究结果表明构建的IECs-cDNA文库具有较好的多态性,为后续研究PEDV与宿主细胞蛋白之间的互作关系提供了有力支持。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪小肠上皮细胞 酵母双杂交cDNA文库
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PRRSV在感染早期通过活化CREB竞争抑制p65与CBP结合 被引量:2
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作者 李先斌 王鑫 +9 位作者 谭祥梅 陈鹏飞 赵雄伟 吴瑕 虞凌雪 高飞 姜一峰 于海 童光志 周艳君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期670-676,共7页
为研究细胞内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的结合蛋白(CBP)在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染后的结合动态对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的影响,本研究利用HP-PRRSV强毒Hu N4株感染宿主细胞,采用CO-IP方法分析CREB的磷酸化情... 为研究细胞内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的结合蛋白(CBP)在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染后的结合动态对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的影响,本研究利用HP-PRRSV强毒Hu N4株感染宿主细胞,采用CO-IP方法分析CREB的磷酸化情况及其结合动态。结果显示Hu N4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)能够引起CREB明显磷酸化,Hu N4株感染PAMs和Marc-145细胞使p38磷酸化水平显著上调,PKA通路抑制剂可以明显抑制Marc-145细胞中CREB的磷酸化水平,但不影响PAMs中CREB的磷酸化水平。并且Hu N4株感染Marc-145细胞1 h后磷酸化的CREB能够与CBP结合,并抑制了p65与CBP的结合。当抑制剂H-89和SB203580抑制Marc-145细胞中CREB的磷酸化后,CREB与CBP的结合同时受到抑制。本研究表明HP-PRRSV Hu N4株感染细胞后,可以通过激活p38 MAPK通路而活化CREB,活化的CREB与p65竞争结合CBP,而抑制p65与CBP的结合,使得HP-PRRSV在感染早期抑制了IFN-β的表达。本研究为深入研究HP-PRRSV的免疫抑制机理提供了实验依据。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 CREB P65 CBP IFN-Β
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欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作平台的建立 被引量:2
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作者 汪琪 杨海明 +13 位作者 汪秀会 刘晓敏 王帅勇 姚云 朱世强 单同领 童武 周艳君 李国新 郑浩 高飞 姜一峰 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第3期23-27,共5页
为了构建猪流感病毒A/swine/Tian Jin/6/2013(H1N1)的反向遗传操作技术平台,通过RT-PCR技术分别扩增了欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的8个基因片段,并分别连接至双向转录表达载体p BD上。纯化8个重组质粒,共转染到293T细胞。54 h后收集上... 为了构建猪流感病毒A/swine/Tian Jin/6/2013(H1N1)的反向遗传操作技术平台,通过RT-PCR技术分别扩增了欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的8个基因片段,并分别连接至双向转录表达载体p BD上。纯化8个重组质粒,共转染到293T细胞。54 h后收集上清,并接种到MDCK细胞。待细胞病变明显时,进行血凝试验检测收集到的上清,测得血凝效价为1∶32。测定拯救病毒的全基因组序列,结果显示,在核苷酸序列上,拯救病毒与野生病毒完全一致。细胞病变情况显示,拯救毒株与野生毒株无明显差别。本研究成功拯救了欧洲类禽H1 N1亚型猪流感病毒,为猪流感病毒的致病机理、基因功能研究以及H1N1亚型猪流感病毒新型疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒 病毒拯救 生长曲线 H1N1亚型
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非洲猪瘟暴发前后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒的流行变化 被引量:20
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作者 赵静 李超 +15 位作者 许浒 相丽润 汤艳东 孟凡丹 付军 龚帮俊 陈家锃 冷超粮 彭金美 王倩 周国辉 安同庆 童光志 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期349-356,共8页
为了研究非洲猪瘟(ASF)暴发后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行变化,本研究经PCR检测了2017年1月~2020年12月全国18个省、市和自治区1374份疑似PRRSV感染的病料样品,并对其中阳性病料样品的ORF5、nsp2基因测序并统计阳性样品的... 为了研究非洲猪瘟(ASF)暴发后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行变化,本研究经PCR检测了2017年1月~2020年12月全国18个省、市和自治区1374份疑似PRRSV感染的病料样品,并对其中阳性病料样品的ORF5、nsp2基因测序并统计阳性样品的检出率,分析不同地区在ASF暴发前后PRRSV阳性检出率的变化趋势;分别利用GraphPad Prism 8.0及ORF5基因的进化树分析ASF暴发前后我国各亚型PPRSV及各地区PPRSV的流行变化趋势;根据nsp2基因推导氨基酸序列分析其缺失特征。ORF5基因和nsp2基因测序及统计分析结果显示,共检出PRRSV阳性病料样品779份(779/1374),其中ASF暴发前397份,ASF暴发后382份。ASF暴发后(2019年~2020年)我国各地PRRSV阳性检出率均有上升,华北地区PRRSV阳性检出率由60.47%上升至66.33%;东北地区由52.76%上升至53.27%;华东地区由60.93%上升至62.59%;中南地区由53.43%上升至57.50%。ASF暴发前后我国各亚型及各地区PPRSV流行变化趋势统计分析结果显示,ASF暴发后,NADC30-like PRRSV作为主要流行株,其检出率显著增长,从47.36%上升至65.97%;NADC34-like PRRSV的检出率也明显增长,从1.76%上升至5.50%;但HP-PRRSV、VR2332-like PRRSV和QYYZ-like PRRSV的检出率明显降低,分别从34.01%降至20.68%、6.80%降至3.40%、7.30%降至0.52%。可见ASF暴发后,我国大部分地区(华北、东北、华东、中南)NADC30-like PRRSV的流行趋势有所上升,但HP-PRRSV的流行趋势明显下降,并且随着ASF的流行,除中南地区外,我国各地NADC34-like PRRSV检出率明显上升。ORF5基因的遗传演化分析结果显示,ASF暴发前(2017年~2018年)检测到6种基因亚型的PRRSV(NADC30-like PRRSV、HP-PRRSV、NADC34-like PRRSV、VR2332-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV、Type I PRRSV),而ASF暴发后还检测到CH-1a like PRRSV。Nsp2氨基酸缺失特征分析结果显示,ASF暴发前后我国各亚型PRRSV Nsp2氨基酸序列特征均未发生变化。以上结果表明,ASF疫情的暴发对我国PRRSV的流行造成了较大影响,国内大部分地区PRRSV的流行加重,病毒亚型也变得更加多元化,NADC30-like PRRSV作为主要流行株在国内大部分地区的流行趋势不断升高,HP-PRRSV检出率虽有降低但仍在流行,NADC34-like PRRSV作为潜在流行株,其检出率不断上升。本研究聚焦在ASF暴发前后国内PRRSV的流行变化,对了解我国PRRSV流行现状及对PRRS的防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非洲猪瘟 主要流行株
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利用BAC/gal K系统构建缺失潜伏相关转录物启动子LAP1的伪狂犬病突变病毒 被引量:1
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作者 陈静 张丽荣 +3 位作者 童武 叶超 童光志 郑浩 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期7-13,共7页
伪狂犬病病毒感染猪后,在耐过猪中均能形成潜伏感染。在潜伏感染期间,病毒基因组仅大量转录病毒潜伏相关转录物(latency-associated transcripts,LATs)。为了研究潜伏相关转录物启动子对LAT表达特征的影响,通过构建缺失LAT启动子LAP1、... 伪狂犬病病毒感染猪后,在耐过猪中均能形成潜伏感染。在潜伏感染期间,病毒基因组仅大量转录病毒潜伏相关转录物(latency-associated transcripts,LATs)。为了研究潜伏相关转录物启动子对LAT表达特征的影响,通过构建缺失LAT启动子LAP1、并添加绝缘子cHS4的供体质粒,利用感染性细菌人工染色体克隆(bacterial artificial chromosome,BAC)操作平台和galK(半乳糖激酶)正负筛选系统,获得BAC载体pBAC-JS-cHS4-△LAP1b,BAC载体与质粒pcDNA3.1-cre共转染Vero细胞后获得突变病毒vJS-cHS4-△LAP1b。空斑和生长曲线结果显示,vJS-cHS4-△LAP1b与亲本病毒具有相似的生物学特性。vJS-cHS4-△LAP1b感染Vero细胞后,RT-PCR检测显示表达大的潜伏相关转录本(large latency transcripts,LLT)。vJS-cHS4-△LAP1b的构建为深入研究LAT表达特征及功能提供了依据和基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 潜伏感染 细菌人工染色体克隆 半乳糖激酶 LAP1
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UL46基因移码突变对PRV毒力的影响 被引量:1
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作者 程雪飞 徐晶晶 +6 位作者 武吉强 童武 刘宇婷 朱豪杰 郑浩 童光志 李国新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期17-22,共6页
伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株(JS-2012株)在Vero细胞上40℃传代培养120代后,获得了1株弱毒株(JS-2012-F120株)。该毒株UL46基因3'端有29个碱基插入,导致了130个氨基酸突变。为了研究UL46基因移码突变对PRV生物学特... 伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株(JS-2012株)在Vero细胞上40℃传代培养120代后,获得了1株弱毒株(JS-2012-F120株)。该毒株UL46基因3'端有29个碱基插入,导致了130个氨基酸突变。为了研究UL46基因移码突变对PRV生物学特性的影响,本研究用JS-2012-F120的ΔUL46基因替换了JS-2012的UL46基因,构建了重组病毒JS-2012-ΔUL46,并对该重组病毒、高温传代毒株(JS-2012-F120)及其亲本强毒株(JS-2012)在细胞上的生长特性和对小鼠的毒力进行了比较分析。结果显示,与亲本毒株(JS-2012)相比,传代毒株(JS-2012-F120)病毒滴度明显提高,对小鼠的毒力明显减弱;重组病毒(JS-2012-ΔUL46)在Vero细胞上的生长趋势没有明显改变,对小鼠的毒力减弱。因此,UL46基因移码突变对PRV在Vero细胞上的复制没有明显影响,但减弱了PRV对小鼠的毒力。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 UL46基因 毒力
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糖原合酶激酶-3介导β-catenin抑制猪流行性腹泻病毒的增殖 被引量:1
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作者 左叶雯 孔宁 +11 位作者 李智丽 童武 焦亚娟 王桦 郑浩 高飞 孙大格 于海 李丽薇 虞凌雪 童光志 单同领 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第5期16-22,共7页
糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能够促进细胞内多种蛋白质的磷酸化,从而参与调控细胞的多种抗病毒功能。其中β-catenin是GSK-3信号通路下游的一个重要转录调节因子,能够被GSK-3磷酸... 糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能够促进细胞内多种蛋白质的磷酸化,从而参与调控细胞的多种抗病毒功能。其中β-catenin是GSK-3信号通路下游的一个重要转录调节因子,能够被GSK-3磷酸化,磷酸化的β-catenin能够被细胞内泛素化蛋白酶体降解途径降解。为探究GSK-3/β-catenin在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhoea virus,PEDV)复制过程中所发挥的作用,本研究通过在Marc-145细胞上分别抑制GSK-3的活性和Wnt/β-catenin通路后感染PEDV,检测结果显示,抑制GSK-3的活性后,β-catenin含量增加,并且能够抑制PEDV的增殖;抑制Wnt/β-catenin通路后,β-catenin含量降低,促进PEDV在Marc-145细胞上的增殖。结果表明,PEDV感染Marc-145细胞后,宿主细胞能够下调GSK-3的活性,并进一步上调β-catenin的含量,从而抑制病毒在细胞内的增殖。本研究从分子层面上解释了GSK-3介导β-catenin在病毒复制过程中的作用,为PED的防控与治疗提供了一定的指导意义。 展开更多
关键词 糖原合成酶激酶-3 Β-CATENIN 猪流行性腹泻病毒
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猪流行性腹泻病毒Nsp12与宿主RNF7蛋白相互作用的研究
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作者 赵雄伟 李慧春 +13 位作者 陈鹏飞 周书亭 吴瑕 劳梦琴 童武 高飞 虞凌雪 刘长龙 孔宁 单同领 于海 姜一峰 童光志 周艳君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期461-467,共7页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)编码的Nsp12蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性,在PEDV复制过程中发挥重要作用。为了研究与Nsp12蛋白相互作用的宿主细胞蛋白对PEDV复制的影响,本研究利用酵母双杂交技术将诱饵质粒pGBKT7-Nsp12与猪小肠绒毛... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)编码的Nsp12蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性,在PEDV复制过程中发挥重要作用。为了研究与Nsp12蛋白相互作用的宿主细胞蛋白对PEDV复制的影响,本研究利用酵母双杂交技术将诱饵质粒pGBKT7-Nsp12与猪小肠绒毛上皮细胞(IECs)cDNA酵母表达文库进行杂交筛选,获得的阳性克隆经过测序鉴定证实为环指蛋白7(RNF7),将pGBKT7-Nsp12与p GADT7-RNF7进行酵母回复验证,结果显示二者共转化后能分解SD/-4/X/A中的X-α-Gal形成蓝色菌落,表明Nsp12与RNF7蛋白在酵母中存在相互作用。同时,构建p CAGGS-Nsp12-HA和p CAGGS-Flag-RNF7真核表达载体,利用针对不同标签的抗体进行正向和反向免疫共沉淀鉴定,进一步证实PEDV Nsp12蛋白与RNF7蛋白之间存在直接相互作用;激光共聚焦显微镜观察发现Nsp12蛋白和RNF7蛋白在细胞质中存在共定位现象。为了分析宿主细胞中RNF7蛋白异常表达对PEDV增殖的影响,将构建的RNF7真核表达质粒pcDNA3.1-RNF7转染LLC-PK1细胞后,再用PEDV感染过表达RNF7的LLC-PK1细胞,通过western blot检测LLC-PK1细胞中PEDV N蛋白表达量,荧光定量PCR检测PEDV N基因转录水平,采用TCID50方法检测病毒滴度,结果显示,过表达RNF7后LLCPK1细胞内PEDV N蛋白表达量和N基因拷贝数均下降,其子代病毒滴度也明显低于正常对照组,表明过表达RNF7蛋白可以抑制PEDV的增殖。而利用si RNA-178敲低宿主细胞内源性RNF7蛋白的表达,再以MOI 0.01的PEDV感染后,对感染后不同时间的细胞样品进行western blot检测和病毒滴度检测,结果显示在PEDV感染后24 h,细胞内PEDV N蛋白表达量明显增加,PEDV的滴度在感染后18 h和24 h时分别是对照组的1.10倍和1.17倍。本研究结果首次证实了宿主细胞中RNF7蛋白表达对PEDV的复制发挥负调控作用,为深入探究PEDV复制调控的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 Nsp12 RNF7 蛋白相互作用
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Evaluation of the Pathogenicity of a Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Variant in Piglets 被引量:4
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作者 WEI Tian-chao TIAN Zhi-jun +8 位作者 ZHOU Yan-jun AN tong-qing JIANG Yi-feng XIAO Yan HU Shou-ping PENG Jin-mei HAO Xiao-fang ZHANG Shan-rui tong guang-zhi 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2011年第8期1280-1291,共12页
Since May 2006,a highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) variant characterized by 30 amino acids deletion within its NSP2-coding region emerged and caused extensive economic ... Since May 2006,a highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) variant characterized by 30 amino acids deletion within its NSP2-coding region emerged and caused extensive economic losses to China's pig industry.To investigate the in vivo pathogenicity and immune responses of the newly emerging PRRSV,3 groups of 60-d-old conventional piglets were inoculated intranasally with a representative strain of the HP-PRRSV variant HuN4 with 3 different infection doses (3×103-3×105 TCID50).The results revealed that the virus variant caused severe disease in piglets and the significant clinical characteristics consisted of persistently high fever (41.0-41.9oC) and high morbidity and mortality (60-100%),the marked clinical signs of PRRS and severe histopathogenic damages in multiple organs.It induced rapid and intense humoral immune responses and seroconversion was detected in most infected pigs at 7 d post-infection (DPI).The virus vigorously replicated in vivo and the highest virus average titer was 9.7 log copies mL-1 serum at 7 DPI.Elevated levels of IFN-g and IL-10 cytokine production in serum in this study were also observed.Taken together,our results demonstrated that the HP-PRRSV variant HuN4 strain is highly pathogenic for piglets and suitable to be a reference strain of highly virulent PRRSV for evaluating the efficacy of the new vaccines. 展开更多
关键词 highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus PATHOGENICITY immune responses viral load
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Vaccination of Plasmid DNA Encoding Somatostatin Gene Fused with GP5 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Induces Anti-GP5 Antibodies and Promotes Growth Performance in Immunized Pigs 被引量:4
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作者 LI Guo-xin QIU Hua-ji +5 位作者 HAN Cheng-gang HAN Ling-xia ZHOU Yan-jun CHEN Yan LI Ji-chang tong guang-zhi 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2006年第3期234-240,共7页
Somatostatin (SS) is a hormone that inhibits the secretion of growth hormone. Immunization against SS can promote the growth of animals. This paper described the effects of DNA immunization on the growth and antibod... Somatostatin (SS) is a hormone that inhibits the secretion of growth hormone. Immunization against SS can promote the growth of animals. This paper described the effects of DNA immunization on the growth and antibody response in mice and pigs immunized with a plasmid DNA encoding SS fused with GP5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV). A fragment of 180 bp encoding partial SS gene was amplified by PCR from the genomic DNA of peripheral blood mononuclear cells of pigs, and cloned as a fusion gene with PRRSV GP5 in plasmid pISGRTK3. Three times of immunization with the resulting plasmid pISG-SS/GP5 induced anti-GP5 antibodies in BALB/c mice and pigs, as demonstrated by GP5-specific ELISA and immunoblotting. Compared with pigs immunized with empty vector pISGRTK3, the growth performance of pigs immunized with pISG-SS/GP5 was increased by 11.1% on the 13th week after the last vaccination. The results indicated the plasmid DNA encoding SS and PRRSV GP5 fusion gene elicited anti-GP5 antibodies and improved the growth performance of immunized pigs. 展开更多
关键词 porcine reproductive and respiratory syndrome virus GP5 SOMATOSTATIN DNA vaccine
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Evolutionary Patterns of the Proviral gp90 V3 to V5 Regions of Equine Infectious Anemia Virus Associated with Immune Selection in Progressors and Nonprogressors
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作者 YUAN Xiu-fang ZHOU Tao +6 位作者 HOU Shao-hua TU Ya-bin PENG Jin-mei WEN Jian-xin QIU Hua-ji WU Dong-lai tong guang-zhi 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2011年第1期126-135,共10页
The aim of this study was to determine the genomic evolutionary pattern of virulent equine infectious anemia virus (EIAV) during persistent infection. The evolutionary dynamics of proviral genomes were examined by c... The aim of this study was to determine the genomic evolutionary pattern of virulent equine infectious anemia virus (EIAV) during persistent infection. The evolutionary dynamics of proviral genomes were examined by challenging an EIAV seronegative equine (pony 1) and three EIAV vaccinated equines (ponies 4, 7, and 8) with the Chinese virulent strain EIAV- L. Ponies 1 and 7 succumbed to disease and were called progressors, while ponies 4 and 8 lacked clinical symptoms and were considered nonprogressors. Sequences spanning the V3, V4, and V5 hyper-variable regions of the EIAV-L envelope gp90 gene were sequenced from each pony as evolutionary markers of the provirus. The proviral genome of the EIAV-L inoculum evolved during persistent infection and displayed different patterns between EIA progressors and nonprogressors. Inoculum-like variants were isolated from nonprogressors during persistent infection, but only from progressors during acute infection. Variant mutations from nonprogressors were dispersed throughout the sequenced region, while those from progressors were predominantly localized to V3. Humoral immunity and virus variant population selection analyses indicated that immune selection was positive in chronically infected progressors and weak in nonprogressors. In-frame stop codons were frequently localized to a defect "hot spot". The high number of defective variants in nonprogressors may promote disease survival. 展开更多
关键词 equine infectious anemia virus PROVIRUS gp90 V3 PND immune selection
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针对猪瘟病毒Erns基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:2
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作者 王树茂 王桂花 +7 位作者 王安冉 周艳君 姜一峰 乔思娜 赵款 童光志 李丽薇 高飞 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2023年第12期1488-1494,共7页
为建立针对猪瘟病毒(CSFV)的快速诊断方法,根据猪瘟病毒石门强毒株(GenBank ID:AF092448.2)已公布的Erns基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对Erns基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法,验证其特异性、敏感性、重复性,并进行临床样... 为建立针对猪瘟病毒(CSFV)的快速诊断方法,根据猪瘟病毒石门强毒株(GenBank ID:AF092448.2)已公布的Erns基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对Erns基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法,验证其特异性、敏感性、重复性,并进行临床样品及重组病毒的检测。结果显示,建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品在1×10^(9)~1×10^(2)copies/μL范围内具有很好的线性关系,相关系数为0.99,斜率为-3.661 5,检测下限为1.0×10^(1)copies/μL,与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于2.925 02%,证实该方法重复性好。本方法适用于临床样品中CSFV抗原核酸的检测,同时也可以用于CSFV在细胞上增殖情况的检测和本实验室构建的表达CSFV Erns基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测,对于临床上CSFV抗原检测、CSF诊断及CSFV的实验室研究有重要意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 Erns基因 荧光定量PCR
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