抗肿瘤细胞多药抗性基因MDR1和MRP1双靶位自剪切核酶的合成及其在体外活性研究

多药耐药基因MDR1和 (或 )MRP1过度表达是引起肿瘤细胞对化疗药物产生多重耐药性的重要原因 .在以往研究抗MDR1基因的核酶 (196MDR1 Rz)的基础上 ,合成了针对MRP1基因 2 10和 730编码子的核酶 (2 10MRP1 Rz ,730MRP1 Rz) ,同时利用RNA二级结构分析程序mfold 3 0设计合成了一种双靶位自剪切核酶体系 (Coat) .将 196MDR1 Rz和 2 10MRP1 Rz基因同时载入到该体系中 ,建立了抗MDR1 MRP1双靶位核酶 .在无细胞体系中对上述核酶进行的生物活性实验表明 ,2 10MRP1 Rz与 730MRP1 Rz相比能够更有效地切割底物 ;载入Coat的抗MDR1和MRP1核酶均能得以有效释放 ,同时切割各自的靶RNA序列 ,切割效率与单靶位核酶一致 ;

Mg^(2+)和Na^+对多核酶系统体外切割反应的影响(英文)

为了进一步了解2价Mg2+和1价Na+存在与否的情况下,多核酶系统对底物RNA的切割效率,构建了pGEM-Coat′A,pGEM-Coat′A196Rz质粒和pGEM-MDR1靶质粒.通过用SP6/T7转录试剂盒在体外转录RNA,在无细胞系统进行切割反应,反应产物通过6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,干胶、X光片曝光自显影,利用ImageJ生物图像分析软件分析.结果表明,多核酶系统的切割效率依赖于二价Mg2+的浓度,切割产物随Mg2+浓度的增加而增加,而且具有反应时间的依赖性.在Na+浓度低于200mmol/L且单独存在时,没有切割产物生成.相反,在Na+和Mg2+共存时,表现出Na+抑制Mg2+诱导的切割活性,切割效率明显低于Mg2+单独存在时的结果.这些结果提示,在生理环境下,Mg2+对于多核酶系统对底物的切割反应是必需的,而Na+则不是.

腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移联合化疗药物治疗恶性淋巴瘤的研究

目的 探讨腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移在体内外逆转肿瘤细胞中P 糖蛋白(P gp)介导的多重耐药性 (MDR)的作用。方法 构建并纯化制备了含有抗MDR1核酶基因的腺病毒Ad 196MDR1 Rz。在体外 ,用该重组腺病毒转导具有P gp介导的、MDR特性的人淋巴瘤细胞株Daudi MDR2 0 ,并分别用RT PCR、FACS分析和MTT法测定核酶基因转导对Daudi MDR2 0细胞MDR1mRNA和膜表面P gp表达的影响及对长春新碱 (VCR)敏感性的改变 ;在体内 ,通过局部注入重组腺病毒联合VCR全身化疗 ,对接种Daudi MDR2 0细胞的SCID小鼠进行治疗观察。结果 在感染Ad 196MDR1 Rz后 ,Daudi MDR2 0细胞MDR1mRNA的表达被阻断 ,细胞膜表面P gp表达水平显著降低 ,细胞对VCR的敏感性增加。在接种Daudi MDR2 0细胞后 ,采用Ad 196MDR1 Rz联合VCR化疗的治疗组小鼠有6 6 .7% (6 9)未发生肿瘤 ,存活时间超过 12 0d ;而采用空载腺病毒联合VCR化疗或单纯VCR化疗的对照组小鼠 ,其长期存活率分别为 12 .5 % (1 8)和 0 (0 9) ,两组差异有极显著性。结论 Ad 196MDR1 Rz能有效阻断Daudi MDR2 0细胞膜表面P gp表达 ,并恢复肿瘤细胞对VCR的敏感性。体内联合VCR化疗能有效抑制肿瘤的发生。