过量表达CHO细胞内源性糖基化酶对抗体五聚甘露糖修饰的影响

目的研究CHO K1细胞内源性糖基化酶对细胞的生长代谢以及抗体中五聚甘露糖(Man5)水平的影响。方法构建含有抗体基因、糖基化酶基因共转染的CHO K1稳定细胞株以及空载细胞株,检测细胞群和克隆阶段的抗体滴度、Man5水平,使用RT-qPCR的方法检测过表达基因的转录水平,并分析单克隆细胞基因转录水平与Man5含量的相关性。结果研究显示,过表达糖基化酶基因后对细胞生长代谢的影响相对较小,糖基化酶基因单独过表达对降低蛋白中的Man5含量没有效果。将基因Man2a2和Mgat2组合过表达之后,可以将Man5的水平降低70%~80%,两个基因的转录水平都较高的情况下对降低Man5含量可以起到更加显著的作用。结论糖基化酶基因Man2a2和Mgat2组合过表达可以显著降低抗体蛋白中的Man5水平。