利用酵母表达质粒检测甜菜黄化病毒蛋白质间相互作用的遗传学研究

利用酵母双杂合体系统，检测与植物线状病毒组中热休克蛋白ＨＳＰ７０相结合的其它相关的ＢＹＶ蛋白。在体外构建两种编码融合蛋白的酵母表达质粒：一组为将编码转录激活区域的基因与ＨＳＰ７０ｒ基因融合并克隆到ｐＡＣＴ质粒中（ｐＡＣＴ·ＨＳＰ７０ｒ），它编码转录激活区域与ＨＳＰ７０蛋白的融合蛋白；另一组为将编码ＤＮＡ结合区域的基因分别与甜菜黄化病毒基因组其它７个基因融合并克隆到ｐＡＳ质粒中（ｐＡＳ·－），分别编码７个融合蛋白。经两质粒共转化酵母细胞后，通过双报告基因（Ｌａｃｚ基因和组氨酸Ｈｉｓ３基因）筛选获得阳性菌落，以阳性菌落总ＤＮＡ为模板，经体外特异性引物的ＰＣＲ扩增，检测出ＨＳＰ７０蛋白与ｐ２０蛋白之间的相互作用，并证实这一相互作用是特异的。