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内质网应激通路需肌醇酶1α/X盒结合蛋白1在中性粒细胞弹力蛋白酶诱导的气道黏液分泌中的作用 被引量:3
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作者 李琪 周向东 +2 位作者 曾曼 victor p.kolosov Juliy M.PERELMAN 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期21-27,共7页
目的·探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)反应在中性粒细胞弹力蛋白酶(neutrophil elastase,NE)诱导人气道上皮细胞黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)分泌中的作用及机制。方法·培养人气道上皮细胞HBE16,分别给予... 目的·探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)反应在中性粒细胞弹力蛋白酶(neutrophil elastase,NE)诱导人气道上皮细胞黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)分泌中的作用及机制。方法·培养人气道上皮细胞HBE16,分别给予活性氧(reactive oxygen species,ROS)抑制剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyrate,4-PBA)预处理,或分别转染需肌醇酶1α(inositol-requiring kinase 1α,IRE-1α)小干扰RNA(siRNA)、X盒结合蛋白1(X-boxbinding protein 1,XBP-1)siRNA,再予以NE刺激;同时设单纯NE组和空白对照组。试剂盒检测ROS的生成水平;Westernblotting检测干预后ERS相关信号分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(phosphorylated protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,pPERK)、活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)、磷酸化IRE-1α(pIRE-1α)及XBP-1蛋白表达量的变化;实时荧光定量PCR检测剪切的XBP-1(XBP-1s)mRNA水平;ELISA和免疫荧光检测MUC5AC在各组细胞中的蛋白表达情况。结果·与空白对照组相比,NE刺激24 h后细胞ROS含量增加,GRP78、ATF6、pPERK及pIRE-1α蛋白水平均显著升高(均P<0.05),XBP-1s mRNA及蛋白表达也明显增加(均P<0.05),同时MUC5AC蛋白表达增加(均P<0.05);NAC及4-PBA预处理后均使上述ERS相关蛋白表达较单纯NE组降低(均P<0.05),MUC5AC蛋白水平降低(均P<0.05);转染IRE-1αsiRNA或XBP-1 siRNA,细胞中MUC5AC蛋白表达也较单纯NE组明显降低,同时XBP-1s mRNA及蛋白表达也有明显下降(均P<0.05)。结论·NE通过产生ROS引起ERS反应,诱导MUC5AC蛋白表达及分泌增加,ERS通路IRE-1α/XBP-1在其中发挥着一定的作用。 展开更多
关键词 内质网应激 需肌醇酶1α X盒结合蛋白1 中性粒细胞弹力蛋白酶 活性氧 黏蛋白5AC
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白介素13通过FOXA2调控气道上皮细胞粘液分泌 被引量:10
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作者 江德鹏 victor p.kolosov +1 位作者 Juliy M.Perelman 周向东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期99-102,共4页
目的:研究白介素13(Interleukin-13,IL-13)对气道上皮细胞粘液分泌的效应并探讨其作用机制。方法:HBE16细胞在无血清培养基中培养24小时后加入IL-13刺激24小时,ELISA检测粘蛋白(MUC)5AC的表达;Western检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(E... 目的:研究白介素13(Interleukin-13,IL-13)对气道上皮细胞粘液分泌的效应并探讨其作用机制。方法:HBE16细胞在无血清培养基中培养24小时后加入IL-13刺激24小时,ELISA检测粘蛋白(MUC)5AC的表达;Western检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)和磷酸化c-Jun氨基端激酶1/2(c-Jun N-terminal kinase 1/2,JNK1/2的表达;使用SP600125阻滞JNK信号通路后检测MUC5AC蛋白表达;RT-PCR检测STAT4和STAT6的表达变化;EMSA检测通路下游核蛋白FOXA2的表达。结果:IL-13刺激24小时后MUC5AC和p-JNK1/2表达升高,而p-ERK1/2表达无显著变化;使用SP600125阻断JNK通路表达后,MUC5AC表达减弱;IL-13刺激后STAT4表达无显著变化,STAT6表达显著升高,FOXA2表达显著降低。结论:IL-13通过JNK-STAT6-FOXA2通路调控粘液分泌。 展开更多
关键词 白介素13 C-JUN氨基端激酶 FOXA2蛋白 粘液
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人气道上皮细胞感知冷刺激的受体机制 被引量:2
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作者 李敏超 何叶 +2 位作者 Juliy M.Perelman victor p.kolosov 周向东 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第20期2071-2076,共6页
目的探讨温度感受器瞬时受体电位蛋白-8(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)在人气道上皮细胞感受冷刺激过程中发挥的作用及其机制。方法用薄荷醇及冷空气(18℃)刺激人气道上皮16HBE细胞:1以TRPM8通道特异性拮抗剂BCTC、... 目的探讨温度感受器瞬时受体电位蛋白-8(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)在人气道上皮细胞感受冷刺激过程中发挥的作用及其机制。方法用薄荷醇及冷空气(18℃)刺激人气道上皮16HBE细胞:1以TRPM8通道特异性拮抗剂BCTC、TRPM8 shRNA为干预手段,动态观察在薄荷醇、冷刺激作用下细胞内Ca2+荧光强度变化来监测气道上皮细胞上TRPM8的功能;2以磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate,PIP2)荧光分子探针PLCδ1-PH-GFP转染细胞,通过动态观察各组细胞内PLCδ1-PH-GFP从细胞膜至细胞质的荧光转位变化来检测PIP2的动态变化来研究冷刺激作用下TRPM8的信号通路。结果 1细胞内相对钙离子浓度变化:薄荷醇组处理4 min后、冷刺激组处理6 min后分别为(5.80±0.34)、(5.02±0.36),明显高于对照组(1.04±0.12)、(1.03±0.08)(P<0.05),1 mmol/L薄荷醇组+BCTC组、1 mmol/L薄荷醇组+转染TRPM8 shRNA组最高值分别为(2.68±0.19)、(1.08±0.16),明显低于1 mmol/L薄荷醇组,18℃+BCTC组、18℃+转染TRPM8 shRNA组最高值分别为(1.77±0.22)、(1.02±0.18),明显低于18℃组(均P<0.05);2PLCδ1-PH-GFP从细胞膜至细胞质的转位变化(Fm/Fc值):1 mmol/L薄荷醇组、冷刺激组最高值分别为(0.90±0.01)、(0.90±0.01),明显高于对照组最高值(1.01±0.02)(P<0.05),细胞处理200 s时1 mmol/L薄荷醇+BCTC15μmol/L组、1 mmol/L薄荷醇组+转染TRPM8 shRNA组分别为(0.86±0.03)、(0.89±0.02),明显低于1 mmol/L薄荷醇组(0.36±0.06)(P<0.05),细胞处理220 s时18℃+BCTC15μmol/L组、18℃+转染TRPM8 shRNA组分别为(0.82±0.02)、(0.93±0.01),明显低于18℃组(0.40±0.06)(P<0.05)。结论TRPM8受体是人气道上皮细胞感受冷刺激的主要受体,并通过TRPM8→Ca2+→PLC→PIP2信号通路引起气道黏液高分泌等反应。 展开更多
关键词 气道上皮细胞 冷刺激 瞬时受体电位蛋白-8 CA^2+ PIP2
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Bronchial inflammatory profile in interferon-gamma-mediated immune response in asthma patients during airway response to cold stimulus 被引量:2
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作者 Juliy M.Perelman Aleksey B.Pirogov +1 位作者 Anna G.Prikhodko victor p.kolosov 《Frigid Zone Medicine》 2022年第4期244-250,共7页
Objective:To evaluate the inflammatory pattern and the interferon(IFN)-γin the bronchial secretion of asthma patients in response to acute cold bronchoprovocation.Material and methods:We enrolled 42 patients with ast... Objective:To evaluate the inflammatory pattern and the interferon(IFN)-γin the bronchial secretion of asthma patients in response to acute cold bronchoprovocation.Material and methods:We enrolled 42 patients with asthma.We assessed asthma by Asthma Control Test,the lung function by spirometry before and after the bronchodilator test,followed by collecting induced sputum.The next day,we collected exhaled breath condensate(EBC)and conducted a 3-minute isocapnic hyperventilation with cold air(IHCA),followed by collecting spontaneously produced sputum.Results:Group 1 included 20 patients with cold airway hyperresponsiveness(CAHR),and group 2 included 22 patients without CAHR.In both groups,a high level of neutrophils in bronchial secretion was observed before and after IHCA.In response to IHCA,the number of epitheliocytes in the sputum decreased to a greater extent in patients of group 1.The baseline epitheliocytes and the concentration of IFN-γafter IHCA had an inverse relationship(r=-0.60;P=0.017).The baseline IFN-γin EBC before and after IHCA was lower in group 1.Airway response to cold exposure directly correlated with IFN-γlevels after IHCA(Rs=0.42;P=0.014).Conclusion:In asthma patients with CAHR,there is a relationship between the persistence of mixed inflammation and the level of IFN-γin the bronchi.IFN-γin response to IHCA is decreased with increased cytokine utilization during cold bronchospasm,which is accompanied by the mobilization of neutrophils and the shift in the cytokine spectrum of the respiratory tract towards the T helper cells(Th)1 immune response. 展开更多
关键词 ASTHMA cold airway hyperresponsiveness mixed pattern of bronchial inflammation pro-inflammatory interferon-γ T helper cells 1 immune response
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内生多肽Elafin对气道黏蛋白5AC表达的影响 被引量:5
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作者 余红梅 李琪 +2 位作者 Juliy M.Perelman victor p.kolosov 周向东 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期801-805,共5页
目的 探讨内生多肽Elafin调节气道黏液高分泌的分子机制.方法 构建人 Elafin 重组质粒,原代培养正常人支气管上皮细胞 HBE16,分为对照组、香烟抽提物(CSE)刺激组、CSE 刺激+转染重组质粒、CSE 刺激+空质粒组、单纯转染重组质粒以及... 目的 探讨内生多肽Elafin调节气道黏液高分泌的分子机制.方法 构建人 Elafin 重组质粒,原代培养正常人支气管上皮细胞 HBE16,分为对照组、香烟抽提物(CSE)刺激组、CSE 刺激+转染重组质粒、CSE 刺激+空质粒组、单纯转染重组质粒以及空质粒组6组.四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞活力,Western blot法检测p-JNK、p-ERK、p-P38和IκBα蛋白含量,荧光素酶报告基因系统测定激活蛋白-1(AP-1)及核转录因子-κB(NF-κB)活性,RT-PCR检测各组黏蛋白(MUC)5AC mRNA 表达水平,ELISA 法分析各组细胞 MUC5AC 蛋白的相对含量.结果 CSE刺激组的p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA 含量分别为(0.55±0.03)μg/mg、(0.64±0.06)μg/mg、(0.60±0.07)μg/mg、(0.27±0.03)μg/mg、7.49±0.31、4.42±0.22、(0.71±0.04)mg/L和0.81±0.04,与对照组的(0.26±0.02)μg/mg、(0.30±0.05)μg/mg、(0.19±0.04)μg/mg(0.61±0.04)μg/mg、2.54±0.22、2.37±0.16、(0.23±0.02)mg/L和0.32±0.03比较差异有统计学意义(均P<0.05).转染重组Elafin后再给予CSE刺激,p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA含量分别为(0.38±0.04)μg/mg、(0.31±0.04)μg/mg、(0.14±0.03)μg/mg、(0.54±0.03)μg/mg、2.60±0.19、2.55±0.21、(0.28±0.03)mg/L、0.35±0.05,与CSE组相比差异有统计学意义(均P<0.05);p-P38蛋白含量在CSE刺激及转染Elafin前后无明显变化.结论 内生多肽Elafin可降低JNK和ERK磷酸化水平并抑制IκBα蛋白降解,从而降低转录激活蛋白-1和核因子-κB的活性,下调黏蛋白5AC的高表达,而p38MAPK在其中的作用并不明显. 展开更多
关键词 弹性蛋白酶抑制因子 黏蛋白类 吸烟 转录因子AP-1 NF-ΚB
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冷刺激对细颗粒物致气道上皮炎症反应的增敏效应及冷诱导RNA结合蛋白的转录后调控机制 被引量:3
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作者 曾曼 李琪 +3 位作者 周向东 维克多·科罗索夫 尤立·皮尔曼 安德列·斯帕科 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期195-202,共8页
目的探讨冷刺激对细颗粒物(PM2.5)致气道上皮炎症反应的增敏效应及冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)可能的转录后调控机制。方法采用在体、离体实验,并结合人体手术切除肺组织标本的观察,将动物模型和气道上皮细胞16HBE各分为4组(每组n=8),即空... 目的探讨冷刺激对细颗粒物(PM2.5)致气道上皮炎症反应的增敏效应及冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)可能的转录后调控机制。方法采用在体、离体实验,并结合人体手术切除肺组织标本的观察,将动物模型和气道上皮细胞16HBE各分为4组(每组n=8),即空白对照组、5℃/18℃组、PM2.5组、5℃/18℃+PM2.5组,分别以酶联免疫吸附试验、实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白印迹检测各组气道上皮细胞和大鼠支气管/肺组织的代表性炎症因子及CIRP mRNA和蛋白的表达规律,并进一步采用细胞免疫荧光技术观察CIRP变化的时相动力学规律。同时采用免疫组织化学的方法观察各组大鼠及人体支气管/肺组织CIRP的定位和表达规律。结果在体实验中,相较于对照组,5℃组和PM2.5组CIRP、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α的mRNA及蛋白均呈现表达水平增高的现象(均P<0.05),而5℃组+PM2.5组相应的mRNA及蛋白表达则最为显著(均P<0.01)。在离体实验的各组实验结果中亦出现同样的规律。CIRP主要定位于胞核内,相较于对照组,18℃组和PM2.5组均出现CIRP胞内移位趋势,而18℃+PM2.5组CIRP胞内移位现象最为明显。在大鼠支气管/肺组织的免疫组织化学中,5℃组CIRP的表达高于对照组,PM2.5组CIRP的表达量相较于对照组也有所增加,而5℃+PM2.5组CIRP的表达量变化最为显著。此外,CIRP在正常人群和慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者支气管上皮黏膜中均有表达,且主要位于气道黏膜上皮细胞胞核内。其中慢阻肺患者CIRP的表达量较正常人群显著升高。结论冷刺激对PM2.5所致的气道上皮炎症反应有增敏效应,而CIRP由胞核移位至胞浆形成的转录后调控可能是其重要机制。 展开更多
关键词 冷诱导RNA结合蛋白 气道炎症 细颗粒物 冷刺激
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