棉铃虫核多角体病毒p10基因的序列及转录分析

为了利用棉铃虫核多角体病毒 (HaSNPV) p10基因的启动子构建重组病毒杀虫剂及表达系统 ,应用末端测序法和引物步移法测定了 p10基因的序列 ,并应用Northern杂交和引物延伸实验对该基因进行了深入的转录特性分析。HaSNPV p10基因被定位于基因组DNA的 115 4kb～ 115 6kb处 ,转录方向与多角体基因相反 ,在其上下游分别发现了 p2 6和 p74基因。转录分析结果确定了 p10基因是个极晚期基因 ,其转录从杆状病毒晚期转录保守序列GTAAG的第二个A开始 ,转录产物大小约为 430nt。HaSNPVp10基因最早可检测到的转录是在病毒感染后的 2 0h ,随后其转录产物量迅速放大 ,到感染后 72h达到非常高的水平。转录时相分析同时还检测到一个大小为130 0nt的产物 ,推测该产物为 p2 6和 p10通读的转录产物。对HaSNPVP10蛋白序列的分析表明 ,该蛋白第 6～44位及第 5 1～ 6 5位氨基酸序列处含多个典型的卷曲螺旋七聚体重复结构 ,两片段间相隔 6个氨基酸残基 ,在该蛋白序列的第 2 0～ 34位与第 5 1～ 6 5位存在L -X(2 ) -L -X(10 ) -L的亮氨酸重复。Helicalnet分析表明 ,HaSNPVP10的疏水氨式酸分布为两个集簇区 ,两者互为 180度转角。