目的探讨柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路,在功能性消化不良中对胃肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICCs)细胞自噬的作用及机制。方法分离大鼠原代ICCs细胞,谷氨酸刺激构建ICCs自噬模型,免疫荧光检测Ca2+水平。将原代...目的探讨柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路,在功能性消化不良中对胃肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICCs)细胞自噬的作用及机制。方法分离大鼠原代ICCs细胞,谷氨酸刺激构建ICCs自噬模型,免疫荧光检测Ca2+水平。将原代ICCs细胞分为对照组、模型组、模型+柴胡皂苷D组、模型+CaMKKβ抑制剂组、模型+柴胡皂苷D+CaMKKβ抑制剂组。透射电镜观察自噬体超微结构,ELISA检测Ghrelin和SP的水平,免疫荧光检测Ca2+和LC-3Ⅱ的表达,Western blot检测LC-3Ⅱ/Ⅰ、CaMKKβ、p-AMPK、Drp1、MFN2、IP3R和RyR的蛋白表达水平。结果谷氨酸诱导的模型组ICCs中LC-3Ⅱ荧光表达增强。柴胡皂苷D干预可降低Ca2+浓度,降低CaMKKβ、AMPK和MFN2水平(P<0.01),增加LC-3Ⅱ/Ⅰ、IP3R、RyR、Drp1、Ghrelin和SP水平(P<0.01)。柴胡皂苷D联合CaMKKβ抑制剂STO-609干预后效果更显著。结论柴胡皂苷D可通过CaMKKβ/AMPK信号通路介导Ca2+外流,影响ICCs细胞过度自噬及胃肠动力相关因子的表达。展开更多
目的对上海市帕金森病剂末现象问卷研究组(Shanghai Research Alliance of Parkinson’s Disease wearing-off questionnaire,shapd-woq)研究纳入的上海帕金森病(parkinson’s disease,PD)患者按照所属行政区进行分类,以探究不同区域患...目的对上海市帕金森病剂末现象问卷研究组(Shanghai Research Alliance of Parkinson’s Disease wearing-off questionnaire,shapd-woq)研究纳入的上海帕金森病(parkinson’s disease,PD)患者按照所属行政区进行分类,以探究不同区域患者剂末现象(wearing-off phenomenon,WO)发生情况的差异。方法提取shapd-woq研究的数据库中2017年9月—2018年6月于上海市16个行政区的11家三级医院和27家二级医院就诊的PD患者资料,进行区域间差异分析。观察、比较各行政区患者的性别、年龄、发病年龄、病程和Hoehn&Yahr(H&Y)分期,以及抗PD治疗时间、左旋多巴(levodopa,LD)和左旋多巴等效剂量(L-dopa equivalent dosage,LED)日用药剂量、多巴丝肼使用比例。采用中文版剂末现象9项(CWOQ-9)问卷作为患者WO的自评量表,比较各行政区问卷分值和相关症状波动的发生情况;临床医师通过询问病史和查询病例报告表(CRF)以诊断患者是否发生WO;采用Kappa检验分析患者自评为WO阳性率与临床医师诊断患者为WO阳性率的一致性。结果1274例患者被纳入本研究。患者的总体发病年龄为(64.11±10.00)岁,总体H&Y分期为(2.29±0.88)期,两者在各行政区间的差异均有统计学意义(F=2.596、3.599,P=0.001或<0.001)。患者总体LD日用药剂量为(6.52±4.19)mg/(kg·d),总体LED日用药剂量为(8.02±4.74)mg/(kg·d);1274例患者中共有1112例(87.3%)使用多巴丝肼治疗,上述指标在各行政区间的差异均有统计学意义(F=2.724、2.834,χ^(2)=35.769。P<0.001或=0.002)。临床医师诊断患者为WO的总体阳性率为56.4%(719/1274),患者使用CWOQ-9问卷自评为WO的总体阳性率为76.3%(972/1274),两者在各行政区间的差异均有统计学意义(χ^(2)=91.559、95.645,P值均<0.001)。Kappa检验结果显示,患者自评为WO的阳性率与临床医师诊断患者为WO的阳性率的一致性欠佳(κ=0.475)。患者CWOQ-9问卷自评的阳性分值总体为3.00(1.00,4.00)分,各行政区间分值的差异有统计学意义(F=3.660,P<0.001)。各行政区各症状波动的发生率不尽相同,杨浦区发生率最高的为震颤(52.0%),其余各行政区发生率相对最高的为运动缓慢。结论上海市各行政区PD患者的临床特点、用药情况及WO阳性率存在差异,临床医师的WO诊断阳性率与患者自评阳性率的一致性也存在区域间差异,故应有重点地加强部分行政区PD规范化管理的培训与质量控制,使上海市各行政区患者得到均质化的诊疗服务。展开更多
文摘目的探讨柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路,在功能性消化不良中对胃肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICCs)细胞自噬的作用及机制。方法分离大鼠原代ICCs细胞,谷氨酸刺激构建ICCs自噬模型,免疫荧光检测Ca2+水平。将原代ICCs细胞分为对照组、模型组、模型+柴胡皂苷D组、模型+CaMKKβ抑制剂组、模型+柴胡皂苷D+CaMKKβ抑制剂组。透射电镜观察自噬体超微结构,ELISA检测Ghrelin和SP的水平,免疫荧光检测Ca2+和LC-3Ⅱ的表达,Western blot检测LC-3Ⅱ/Ⅰ、CaMKKβ、p-AMPK、Drp1、MFN2、IP3R和RyR的蛋白表达水平。结果谷氨酸诱导的模型组ICCs中LC-3Ⅱ荧光表达增强。柴胡皂苷D干预可降低Ca2+浓度,降低CaMKKβ、AMPK和MFN2水平(P<0.01),增加LC-3Ⅱ/Ⅰ、IP3R、RyR、Drp1、Ghrelin和SP水平(P<0.01)。柴胡皂苷D联合CaMKKβ抑制剂STO-609干预后效果更显著。结论柴胡皂苷D可通过CaMKKβ/AMPK信号通路介导Ca2+外流,影响ICCs细胞过度自噬及胃肠动力相关因子的表达。