江西省豆类产业发展现状和对策分析

江西省作为我国重要的鱼米之乡,除了生产稻米之外,也适宜种植大豆等豆类作物。为有序指导江西省的豆类产业发展,分别从豆类资源、种植模式、品种和豆制品等方面对全省豆类产业的发展现状进行概述,系统分析了目前存在的主要问题并进行了因素分析。在此基础上,提出了加大政府引导和扶持力度、改善旱地基础设施、多途径扩大大豆面积和调整结构拓展大豆种植等对策,以期促进江西省豆类产业的振兴。

严桂珍教授运用扶正祛邪法治疗肺部结节经验

介绍严桂珍教授治疗肺部结节的经验。其认为肺部结节多属于本虚标实之证,病因病机为肺脾两虚,痰瘀毒结聚而成,故在治疗肺部结节方面,主张以健脾益肺、清热化瘀、解毒散结为原则,自拟扶正解毒散结方,取得了较好的疗效。附典型病案1则以验证。

槲皮素对慢性阻塞性肺疾病大鼠的保护作用

目的:应用熏香烟联合气道内滴注脂多糖(LPS)法造成大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,并探究懈皮素对COPD大鼠慢性阻塞性肺疾病模型的保护作用及肺病改善机制。方法:选择3周龄SPF级别SD大鼠给予香烟联合气道内滴注LPS(1 mg/kg)方法建立大鼠慢性阻塞性肺疾病模型,分别设置健康对照组(Healthy Ctrl组)、QT单独作用组(QT组)、COPD组和COPD+QT组,其中QT用药组采用每天口服50 mg/kg。HE染色观察细胞形态,TUNEL染色和Western blot技术检测组织细胞凋亡及纤维化相关分子标记。ELISA检测血清中炎症因子表达水平。Masson检测肺纤维化水平。结果:与Healthy Ctrl组比较,QT单独作用于健康大鼠后,大鼠体重、肺功能和肺生理指标,细胞凋亡及炎症因子等差异无显著统计学意义;与Healthy Ctrl组比,COPD组大鼠体重、肺功能、肺泡细胞形态明显受损,肺泡组织严重纤维化(P<0.01);促细胞凋亡因子,炎症因子明显上升(P<0.01),抑炎因子显著下降(P<0.01);与COPD组比,COPD+QT组大鼠体重、肺功能及肺纤维化水平显著改善(P<0.01);肺泡细胞损伤及凋亡有所缓解,凋亡因子和炎症因子表达水平明显下调(P<0.01)。结论:QT在50 mg/kg剂量下对大鼠无明显毒性,并可以降低TGF-β1、α-SMA和TNF-α等表达,抑制大鼠肺泡细胞凋亡,降低大鼠肺组织炎症和纤维化损伤。

金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品的研制

目的研制金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品。方法将10株金黄色葡萄球菌和10株阴性对照代表性菌株分别在适宜条件下复苏培养,制备合适浓度的菌悬液,并加热灭活和分装。随机抽样不同候选参考品样品10支进行均匀性分析,并将样品分别置于2~8、25、37℃条件下保藏以及反复冻融,评价标准物质的稳定性。同时对候选参考品的准确性、特异性、重复性、最低检出限进行分析,并组织8家实验室进行协作标定。结果制备了由阳性、阴性、重复性和最低检出限样品组成的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用候选参考品。不同候选参考品不同样品间的Ct值的变异系数在1.23%~3.86%之间,表明制备候选参考品均匀性良好。同时证实P1~10阳性和最低检出限候选参考品样品在反复冻融及加速破坏条件下稳定性良好。应用3个不同厂家生产试剂盒进行重复性验证实验显示,样本的Ct值均小于5.0%,表明候选参考品的重复性良好。除P6阳性候选参考品样品不能被部分试剂盒检出,其余阳性参考品样品均能成功检测、最低检出限为1.0×10^(3)个/m L。协作标定结果进一步表明阳性、阴性、重复性和最低检出限候选参考品均符合国家参考品的各项要求。结论研制的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品已获得批准,可用于金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒的质量控制和评价。

粪肠球菌核酸检测试剂国家参考品的研制

目的研制粪肠球菌核酸检测试剂的国家参考品。方法将9株粪肠球菌和8株非粪肠球菌参考品候选菌株分别在各自适宜的培养条件下培养,收集新鲜培养物进行计数、灭活、稀释和分装,并对参考品进行均匀性和稳定性评估。组织3家实验室对研制的参考品进行了协作标定。结果研制了由9份阳性候选参考品、8份阴性候选参考品、重复性参考品和最低检出限参考品组成的粪肠球菌参考品。阳性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品循环阈值(cycle threshold, Ct)的变异系数(coefficient of variation, CV)均在5.0%以内,分装均匀性良好;参考品各成分的稳定性良好(P值均小于0.05);协作标定结果显示阳性参考品符合率及阴性参考品符合率均为100%,重复性参考品检测Ct值的CV均在5.0%以内,参考品最低检出限为1.0×10^(3)个/mL。结论研制的参考品可用于粪肠球菌核酸检测试剂的质量评价。

不同来源屎肠球菌的全基因组序列分析

目的 了解不同分离来源的屎肠球菌(Enterococcus faecium)标准菌株的全基因组特征。方法 采用高通量测序技术对中国医学细菌保藏管理中心保藏的分离于食品和临床患者的6株屎肠球菌标准菌株进行全基因组测序,采用velvet 1.2.03和glimmer 3.02等生物信息学软件对测序数据进行基因组装、基因预测及功能注释,分析基因组中所含耐药基因和毒力基因;并与已发表的6株临床分离的代表性屎肠球菌进行核心基因组和泛基因组比较分析,构建系统发育分子进化树。结果 6株屎肠球菌标准菌株的基因组序列大小约为2.9Mbp,不同菌株基因组中共鉴定出2669~3085个基因,平均G+C含量为38.0%;基因组耐药基因注释分析发现,每株屎肠球菌含有21~37种数量不等的耐药基因,食品来源菌株所携带耐药基因明显少于临床分离株(P=0.009)。而不同来源菌株之间所含毒力基因数量无显著性差异,含有5~8种数量不等的毒力基因,其中参与生物膜形成的基因BopD和胆盐水解酶基因bsh存在于所有菌株中。比较基因组学分析结果显示,随着屎肠球菌基因组测序数量的增加,泛基因组所含基因数量随之增加,而核心基因组则趋于稳定。全基因组的系统发育树进化分析结果显示, 12株屎肠球菌被分成3个进化分支,其中5株食品来源的菌株均分布在同一个进化分支。结论 本研究获得6株屎肠球菌标准菌株的全基因组序列,证实食品来源菌株均携带一定数量的耐药基因和毒力基因,提示应加强食源性菌株的安全监测。本研究结果可为后续屎肠球菌耐药机制、致病性等研究提供数据支持。

临床护理人员对不良事件知信行的调查

目的调查护理人员对不良事件的认知、态度及上报意向。方法用自制的调查问卷对聊城地区五家二级以上综合性医疗机构的557名护理人员进行调查。结果①护理人员对不良事件认知度处于优势领域。②护理人员对不良事件的认知因年龄、工龄、职称、职务、学历、科室的不同而存在差异。③护理人员对不良事件态度趋于正向,得分最低的两个维度为负面影响和团队影响。④护理人员对不良事件上报意向平均分为(3.71±0.54),偏向正向。结论护理人员对不良事件的知信行处于优势领域,建议继续主管部门政策支持,加强普通护理人员安全教育。

布鲁氏菌抗原检测试剂用国家参考品的研制

目的研制布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品。方法将3株布鲁氏菌标准株和10株阴性参考菌株在各自适宜的培养基和温度下进行培养,收集新鲜培养物并灭活,采用比浊法制备阳性和阴性参考品菌液;分光光度法制备最低检出量和重复性参考品菌液。对参考品进行均匀性检测和稳定性试验,组织4个实验室对布鲁氏菌抗原检测试剂用参考品进行协作标定。结果建立了由3株布鲁氏菌为阳性参考品、10株阴性菌为阴性参考品、最低检出量参考品及重复性参考品组成的布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品。该参考品具有较好的均匀性及稳定性。协作标定结果为阳性参考品符合率均为100%,阴性参考品符合率均为90%,最低检出量参考品的检出限为1×10^7~1×10^6个/ml之间,重复性参考品均符合规定。结论研制的布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品可用于布鲁氏菌抗原检测试剂的质量控制。

19群肺炎链球菌国家标准菌株分子特征分析及在菌株质量控制中的应用

目的明确19群肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)国家标准菌株的分子特征,为完善中国肺炎链球菌国家标准菌株的质量标准提供依据。方法在传统肺炎链球菌菌种检定方法的基础上,应用16S rRNA基因分析、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)血清分型、多位点序列分型(multilocus sequence type,MLST)和脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分型等多种分子生物学质控方法,对来源于中国医学细菌保藏管理中心的20株19群肺炎链球菌国家标准菌株进行分析。结果20株19群肺炎链球菌的16S rRNA基因序列与肺炎链球菌模式株NCTC 7465的16S rRNA基因序列的相似性在99.64%~100%之间,碱基差异0~5 bp。PCR血清分型结果表明:11株19F型菌株均检测到大小为304 bp的19F型特异性扩增条带,6株19A型菌株均检测到大小为478 bp的19A型特异性扩增条带,PCR血清分型结果与血清凝集试验结果一致。MLST分型结果表明,相同血清型的菌株可以具有不同的序列型(sequence type,ST)。共获得12个ST型,其中6个ST型(10496、10497、10501、10502、10503和10509)为首次报道。PFGE分型结果显示:各型别菌株各具有其特征性PFGE带型(9~17条带),相同血清型或ST型菌株可能具有不同的PFGE带型。共存在18种不同的PFGE带型,其中19F型和19A型菌株中各有一对菌株的ST型和PFGE图谱完全一致。菌株的传代稳定性考察结果显示:在25代以内31708菌株的PFGE带型未发生变化,遗传特征是稳定的。结论16S rRNA基因分析、PCR血清分型、MLST分型和PFGE分型等分子生物学方法应用于中国肺炎链球菌国家标准菌株的质量控制,可获得更加全面的肺炎链球菌标准菌株身份信息数据(包括序列、PCR扩增片段、序列型、图谱等),为进一步完善中国肺炎链球菌国家标准菌株的质量标准提供依据和数据支撑。

《中国药典》中标准菌种质控新方法的研究

目的 研究《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)纳入的标准菌种质控新方法,并评价不同批号标准菌种的质量稳定性。方法 对脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行比较研究,同时整合16SrRNA基因序列分析、多位点序列分型和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等质控新方法,进行标准菌种质控新方法的建立,并对标准菌种的质量进行评价。结果 形成了适用于《中国药典》中标准菌种的方法,并通过整合的质控新方法对不同批号的标准菌种进行评价,结果显示,菌种质量稳定,遗传信息无改变。同时,建立了标准菌种16SrRNA基因标准序列、PFGE标准指纹图谱和标准基因型。结论 标准菌种质控新方法的研究,为更加全面、深入地评价标准菌种的质量提供了依据;建立的标准菌种质量控制体系及标准菌种质控鉴定信息,为标准菌种持续的质量控制奠定了重要的参比信息基础。

基于数据挖掘的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征中医用药规律分析

目的:通过数据挖掘分析中医药治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的用药规律。方法:收集中国知网、万方、维普及PubMed等数据库中关于中医药治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的相关文献,采用Excel 2020进行药物使用频次分析;使用SPSS Modeler 18及Origin 2021软件对药物进行关联及聚类分析,分析该病的中医用药规律并总结出核心药对。结果:共纳入64篇有效文献,累计方剂50首,药物126味,使用频率≥1%的高频药物有26味,茯苓、半夏、陈皮及甘草是使用频次最高的四味药物;性味以温性、辛味为主,多归属肺经;关联分析得到的核心药对为半夏-茯苓。结论:中医药治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的基础治法为化痰祛湿,常配清热化痰、活血化瘀及益气健脾之法;基础方剂为二陈汤;核心药对为“半夏-茯苓”。

2020年长沙市岳麓区居民膳食结构和营养素摄入状况分析

目的了解长沙市岳麓区居民膳食结构和营养素摄入现况,为针对性开展营养健康教育提供参考依据。方法调查长沙市岳麓区3岁及以上居民2020年食物消费状况,采用Kruskal-Wallis H检验分析各年龄组居民平均每标准人日膳食和营养素摄入量差异,并与2010—2013年中国居民营养与健康状况、中国居民膳食指南和膳食营养素参考摄入量进行比较。结果共计392人纳入数据分析,其中男性192人、女性200人,平均年龄(37.39±19.93)岁。2020年岳麓区居民平均每标准人日谷类(341.9 g)、大豆(33.6 g)、蛋类(39.9 g)和鱼虾蟹贝类(47.3 g)摄入量基本达到膳食宝塔推荐量;但薯类(19.5 g)、水果(34.9 g)、乳及乳制品(58.9 g)的摄入严重不足,畜禽肉类(159.7 g)、食用油(44.5 g)和盐(6.4 g)的摄入量超标。平均每标准人日营养素摄入量中,蛋白质、B族维生素、维生素E、钠、磷、铁的摄入量达到了推荐摄入量(RNI)要求,碳水化合物和脂肪供能比分别为41.3%和45.0%,比2012年全国平均水平下降了13.7%和上升12.1%。不同年龄组中,18~64岁人群各种营养素摄入达标比较低,其能量摄入仅1821.0 kcal。结论2020年长沙市岳麓区居民大豆、坚果、动物性食物和盐摄入状况有所改善,但整体膳食结构不合理和各年龄组营养素摄入分布不均的问题仍然存在,应继续加强“减油减盐”宣教,引导居民增加薯类、蔬果和奶类的摄入量。

多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵和去氧胆酸残留量液相色谱串联质谱检测方法的建立及验证

目的建立多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)和去氧胆酸(deoxycholic acid,OBA)残留量的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并进行验证。方法建立以Kinetex色谱柱C18(2.1 mm×50 mm,2.6μm)为固定相,5 mmol/L甲酸铵、乙腈为流动相的LC-MS/MS法,并验证方法的线性范围、精密性、准确度、检出限及定量限。采用建立的方法检测23批肺炎球菌多糖(1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17A、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F)、3批b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)粗糖和精糖、3批A、C、Y、W135群脑膜炎球菌粗糖和精糖中CTAB及OBA残留量。结果 CTAB浓度在1.56~50μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=133 056 X-290 15,R2=0.999 9;OBA浓度在6.25~100μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=250.5 X-59.1,R2=0.999 7;OBA及CTAB对照品6次重复进样检测的保留时间和峰面积RSD均<2%;OBA和CTAB加标回收率均在91.8%~103.5%之间;OBA的检出限为1.02μg/L,定量限为2.04μg/L,CTAB的定量限为1.56μg/L。4、9N、9V和15B型肺炎球菌多糖无明显CTAB检出,其他血清型均有不同程度检出;大部分血清型肺炎球菌多糖中无明显OBA检出。3批A、C、Y、W135脑膜炎球菌粗糖中CTAB残留量为112.40~1 709.60μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量为0.08~43.20μg/L。3批Hib粗糖中CTAB残留量分别为1 265.10、1 189.00和1 513.30μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量分别为6.50、166.60、6.65μg/L。结论建立了多糖疫苗中CTAB和OBA的LC-MS/MS检测方法,该方法具有良好的精密性及准确度,可用于多糖疫苗及多糖结合疫苗中CTAB和OBA残留量的检测。

鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品的研制

目的研制鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品,用于该试剂盒的质量评价。方法收集10株鲍氏不动杆菌和10株阴性参考菌株(同属不同种的不动杆菌及与鲍氏不动杆菌感染部位相同或感染症状相似的病原菌)新鲜培养物,进行灭活、分装。并对参考品进行均匀性及稳定性评估,同时验证其准确性、特异性、重复性、最低检出限。组织7家实验室对制备的参考品开展协作标定。结果成功制备了鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品,包括10个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品。阳性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品Ct值的CV均<2.5%;与-20℃保存的参考品比较,于2~8、25、37℃分别放置3、7、14 d及冻融3、5次后参考品Ct值的差异均无统计学意义(P> 0.05)。制备的参考品具有良好的准确性、特异性、重复性,最低检出限为1.0×10^(3)个/mL。参加协作标定的7家实验室中,除1家出现假阳性结果,其他实验室的准确性、特异性和重复性验证均符合规定;有1家实验室的最低检出限高于1.0×10^(3)个/mL。结论本实验研制的参考品可用于鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒的质量评价。

A族链球菌核酸检测试剂国家参考品的研制

目的研制A族链球菌核酸检测试剂国家参考品。方法将10株A族链球菌株和10株非A族链球菌参考菌株分别在各自适宜的培养基和温度下培养,收获新鲜培养物进行计数、灭活、稀释和分装,并对参考品进行均匀性和稳定性评估。采用A族链球菌核酸检测试剂对阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、重复性和最低检出限进行了适用性验证,并组织4家实验室开展了协作标定。结果建立了由10个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品组成的A族链球菌核酸检测试剂评价用国家参考品。经评估该参考品具有良好的均匀性及稳定性,协作标定结果显示阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、重复性参考品均符合要求,最低检出限参考品菌液浓度两家实验室标定为1×10^(4)个/mL,两家实验室标定为1×10^(3)个/mL。结论研制的参考品可以用于A族链球菌核酸检测试剂的质量评价。

多糖蛋白结合疫苗中残留ADH和EDAC同时定量检测的液相色谱串联质谱法的建立

目的建立同时定量检测己二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺[N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodimide,EDAC]的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法,实现多糖蛋白结合物(肺炎球菌结合物、脑膜炎球菌结合物和b型流感嗜血杆菌结合物)中残留ADH和EDAC的定量研究。方法通过检测EDAC在纯水、中性水溶液[(50 mmol/L磷酸缓冲溶液(pH 6.8)、200 mmol/L氯化钠水溶液和疫苗培养基)]及0.1%甲酸(formic acid,FA)水溶液中的稳定性,确定实现EDAC完全转换为EDU的前处理条件。优化了色谱柱种类对ADH、EDU和EDAC的保留,以及质谱条件如产物离子、碰撞电压、Q1和Q3电压等对ADH和EDU定量灵敏度的影响,建立以C18WCX(2.1 mm×150 mm,5μm)为固定相,pH 2~3的0.1%FA-水和0.1%FA-乙腈为流动相的LC-MS/MS方法,实现ADH和EDAC(实际检测对象为EDAC的转换产物EDU)的高灵敏度定量分析。对建立方法的精密度、准确度、线性范围、检出限(LOD)和定量限(LOQ)进行验证。结果ADH在水溶液中较稳定,EDAC自溶解开始即水解为EDU,且难以完全转换,导致EDAC测定困难;在样品和标准品溶液中加入FA,可实现EDAC完全且快速的转换为EDU。ADH、EDU和EDAC在C18色谱柱上保留弱,在色谱柱的死时间附近出峰,无法实现这些化合物与样品基质的分离,而本文所选C18WCX固定相可实现目标化合物的保留且峰形较好。通过前体离子扫描、产物离子扫描,选择目标化合物的前体离子和响应强度较好的产物离子作为MRM的离子对,并用MRM自动优化程序获得目标化合物的最佳Q1、CE和Q3电压值。建立的方法检测的ADH和EDAC含量与峰面积线性关系良好,R2均大于0.999;ADH的LOD为3.96μg/L、LOQ为15.63μg/L,EDAC的LOD为0.58μg/L、LOQ为1.17μg/L,灵敏度较高;精密度(峰面积RSD<2%)及准确度(回收率为90%~105%)较高。结论建立的LC-MS/MS方法实现了多糖蛋白结合疫苗中残留ADH和EDAC(通过测定EDU定量EDAC)的高灵敏度检测,与《中国药典》三部(2015版)方法相比,该方法预处理更简单,自动化程度更高且灵敏度更好,适合于多种多糖蛋白结合物中ADH和EDAC残留的检测。

不同来源金黄色葡萄球菌的全基因组序列分析

目的了解不同来源金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)的全基因组序列基本特征,探究菌株的分子分型、耐药基因型、毒力及其遗传进化关系。方法应用solexa高通量测序技术对10株医源性和食源性代表株金葡菌进行全基因组测序,以此进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、金葡菌a蛋白(Staphylococcus aureus protein A,spa)基因分型分析,并比较分析不同菌株基因组中携带耐药基因和毒力因子,筛选核心基因,构建系统进化树。结果10株金葡菌染色体基因组大小相似,均为2.7Mbp,包含有2486~2648个基因不等,平均长度约为887bp。耐药基因注释分析显示9株甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)携带的耐药基因少于另一株耐甲氧西林金葡菌(MRSA)。尽管在不同菌株基因组之间的毒力因子数量无显著区别,但不同菌株存在的毒力因子却不同,食品来源金葡菌基因组携带1~4种数量不等的肠毒素基因。进化树分析显示不同来源金葡菌位于不同进化分支,2株为ST8型的MSSA和MRSA进化亲缘性较高,属于同一进化分支内。结论获得10株不同来源金葡菌的全基因组序列数据,并证实食源性或医院来源金葡菌为了适应不同生存环境,通过不同分子进化机制,获得不同耐药基因和毒力因子,形成菌株特定的分子遗传特征,可为金葡菌的分子流行病学和致病性机制研究提供参考依据。

10株铜绿假单胞菌的全基因组序列分析

目的了解不同分离来源铜绿假单胞菌的全基因组基本特征,以此分析基因组多态性及其遗传进化关系。方法选择10株医源性和食源性来源的铜绿假单胞菌代表性菌株,应用Solexa高通量测序技术对其进行全基因组测序,以此进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST),比较各菌株基因组中携带的耐药基因、毒力基因及插入序列(insertion sequence,IS)元件,并通过比较基因组学分析方法拟合泛基因组和核心基因组积累曲线,筛选核心基因SNP构建系统发育分子进化树。结果10株菌的基因组从6.3~7.0 Mbp大小不一,包含5868~6598个基因,平均G+C含量为67.1%;发现10个菌株各具不同的ST型。在这10个菌株的基因组中,共检测到75种耐药基因,包括抗β-内酰胺酶类、抗氨基糖苷类、抗氟喹诺酮类等;共发现188种毒力基因,不同来源菌株间无明显差异;各菌株之间IS元件种类和数量差异较大。分析发现,铜绿假单胞菌具有开放型泛基因组和稳定型核心基因组;10株菌可分为3个进化分支,且不同分离时间和来源无明显相关性。结论本研究获得10株不同分离来源的铜绿假单胞菌的全基因组序列,初步证实食品及患者分离来源菌株基因组数据无明显相关性,为后续铜绿假单胞菌的分子流行病学和致病性机制研究提供数据参考。

1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型兔源肺炎球菌特异性血清国家参考品的制备

目的制备1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型兔源肺炎球菌特异性血清国家参考品,用于速率比浊法检测疫苗中的多糖含量。方法采用双光径速率浊度免疫分析系统(IMMAGE 800)非竞争性浊度模式进行检测,多糖体积21μL,血清体积21μL,反应缓冲液体积300μL,增益系数为4,反应时间为3.5 min。确定1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型兔源肺炎球菌特异性血清候选参考品的工作浓度、线性范围、检测限、定量限,并验证专属性和稳定性。采用本实验制备的血清国家参考品及市售血清同时检测2个厂家的23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖含量。结果确定各型血清候选参考品的工作浓度在原倍至4倍稀释度之间,在相应工作浓度下,多糖浓度在1~6μg/mL范围时,与响应值呈良好的线性关系,相关系数(R2)均>0.980;检测限和定量限均低于多糖候选参考品最低点(1μg/mL)的反应值;各型血清候选参考品特异性良好,无交叉反应;血清候选参考品于2~8℃保存28 d后仍具有良好的稳定性。除厂家2疫苗的6B和9V型外,2种血清对厂家2疫苗其他型别及厂家1疫苗所有型别多糖含量检测结果的相对标准偏差(RSD)<15%。结论成功制备了12种兔源肺炎球菌特异性血清国家参考品,可用于速率比浊法检测23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖抗原含量。

10株A族链球菌标准菌株全基因组序列分析

目的分析A族链球菌(GAS)不同标准菌株的基因组特征,为进一步探讨GAS致病性、耐药机制和分子进化规律提供参考依据。方法采用高通量测序技术对中国医学细菌保藏管理中心保藏的10株GAS标准菌株进行全基因组测序,分析菌株的M蛋白(emm)基因及多位点序列分型(MLST);采用velvet 1.2.03和glimmer 3.02等生物信息学软件对测序数据进行基因组装、基因预测及功能注释,并以此分析基因组中所含耐药基因、毒力基因及插入序列(IS)种类;应用Blast比对分析不同菌株基因组中的特定致热外毒素B基因和系列超抗原基因序列,通过比较基因组学分析拟合泛基因组和核心基因组积累曲线,筛选核心基因SNP,构建系统发育分子进化树。结果10株GAS标准菌株的染色体全基因组序列大小约为1.8 Mbp,在不同菌株基因组鉴定出1682~1849个基因;通过对基因组毒力基因注释分析发现,10株GAS标准菌株基因组中含有16~22种数量不等的毒力因子,其中部分是在GAS基因组保守存在的,包括细菌致病相关的层粘连蛋白基因(lmb)、致热外毒素B基因(speB)、纤维基因结合蛋白(Fbp);基因组耐药基因注释分析发现,每株GAS标准菌株仅携带1种耐药基因,除CMCC(B)32308菌株基因组携带抗大环内脂抗生素相关的lmrP基因外,在其他9株GAS基因组中均发现与氟喹诺酮抗性相关的patB耐药基因;10株GAS标准菌株中共含有IS1562、IS1239、ISSpy1、IS1548和ISSag5等5种IS元件,不同菌株之间IS种类略有差别;比较基因组学分析结果显示,随着GAS基因组测序数量的增加,泛基因组随之增加,而核心基因组则随着不同GAS菌株数量的增加而逐渐趋于稳定;本研究10株GAS标准菌株与已发表的S10394、SF370、A20、NZ131和s6180等5株GAS代表性菌株系统发育树进化分析结果显示,15株不同GAS菌株可分成4个进化分支,其中CMCC(B)32067和CMCC(B)32301分别形成2个独立进化分支,与其他GAS标准菌株进化距离较远。结论10株GAS标准菌株的基因组结构高度相似,GAS的核心基因组为相对稳定型,泛基因组为开放型。