海南黑山羊ATG16L2基因启动子区多态性研究

旨在研究海南黑山羊ATG16L2基因启动子区的结构特征及其遗传分布情况,为进一步探索该基因的表达调控机制及功能提供理论依据。本研究以200头海南黑山羊为研究对象,构建DNA混池,采用Sanger法测序对海南黑山羊ATG16L2基因启动子区的多态性进行初筛,应用PCR-RFLP技术对200头海南黑山羊个体进行基因型鉴定。对筛选到的SNP位点进行连锁不平衡分析,构建单倍型。利用生物信息学方法分析SNP位点对海南黑山羊ATG16L2基因表达的影响。在海南黑山羊ATG16L2基因启动子区共检测到3个SNPs位点,分别为SNP1(g.30667970T>C)、SNP2(g.30668540T>C)和SNP3(g.30668664C>T),且彼此连锁。SNP1和SNP2位点均表现为中度多态性,SNP3位点表现为低度多态性,且符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。单倍型分析结果显示,H1、H2、H3和H4单倍型频率分别为0.321、0.304、0.271和0.097,且H1(CGC)为优势单倍型。生物信息学分析显示,山羊ATG16L2基因共预测到3个启动子和4个CpG岛区域;存在2个重复元件LINE2(-1989~-1826 bp、-562~-426 bp)、hAT-Charlie(-1804~-1511 bp)以及5个CCAAT-Box、13个CAAT-Box、10个CGCG-Box、11个GATA-Box和2个TATA-Box。综合多种在线软件预测发现,上述SNPs可能通过影响ATG16L2基因的启动子区的顺式作用元件,从而影响海南黑山羊ATG16L2基因的转录表达。本研究在海南黑山羊ATG16L2基因启动子序列中发现3个SNPs位点,其中SNP1和SNP2表现为中度多态性,SNP3表现为低度多态性,并预测这些SNPs可能影响转录因子结合,从而调控基因表达,为进一步探究ATG16L2基因功能及其调控机制提供了理论依据。

党的二十大背景下课程思政融入“农村互联网+外语培训”的探索

在党的二十大背景下,课程思政的融入可以有效地弥补农村外语培训中存在的教育资源不足、学习能力与观念问题、经济条件限制、忽视对外国国情的传达及意识形态安全风险等问题。课程思政对“农村互联网+外语培训”具有重要的指导意义,加强师资队伍建设、优化课程内容体系、创新教学方法与手段等策略有助于提升学习者的综合素养与跨文化交际能力,推动“农村互联网+外语培训”的健康发展。课程思政不仅能够为外语教育注入新的活力,还能促进农村地区的社会和谐与经济发展,为实现教育公平和社会主义新农村建设作出巨大贡献。

卵巢储备功能低下的病因病机及干预策略

女性卵巢内卵母细胞数量逐渐减少,卵泡质量下降,并出现一系列月经不调等内分泌功能紊乱的症状,临床称之为卵巢储备功能低下。对女性的生育能力产生不良影响,严重影响了女性的生活质量和身心健康。西医认为此病与遗传、自身免疫、妇科手术等因素有关,西医治疗上常常选择免疫治疗、激素替代、辅助生殖等治疗手段,但是存在诸多不良反应。中医认为此病发病以肾虚为本、可伴有血瘀、肝气郁滞、心脾虚弱等因素,中医治疗上以补肾活血、疏肝、健脾、养心等为原则,常常选用中药内服、同时可配合针灸、中药外敷、中药足浴等外治法。中医药治疗此病具有副作用低、多环节、整体调节等作用,临床上应进一步探索研究。

海南黑山羊MBL2基因的转录调控元件的筛选与分析

甘露聚糖结合凝集素C(mannose binding lectin C,MBL-C)是C型(Ca^(2+)依赖型)凝集素超家族的成员,其作为一种急性期蛋白,具有抗细菌感染的功能,参与机体的天然免疫反应。为鉴定出结合在MBL2基因启动子区(1009 bp)的重要转录因子,探寻该基因的转录调控机制,本研究选取海南黑山羊MBL2基因的启动子序列1009 bp,采用DNA重组技术克隆6个转录起始位点上游1009 bp的启动子5′端侧翼缺失序列,克隆片段经双酶切后连接至pGL3-Basic载体。重组质粒转染至293T细胞中,结合双荧光素酶活性检测系统筛选MBL2基因的核心启动子区域。通过在线生物信息学软件预测山羊MBL2基因的核心启动子区域的转录因子结合位点,利用点突变技术构建转录因子结合位点缺失的载体,转染293T细胞后结合双荧光素酶活性检测系统分析其转录活性。结果表明,海南黑山羊MBL2基因的核心启动子区域位于转录起始位点上游-304~-45 bp范围内,在线软件分析该区域存在RELA、NF-κB2、MZF1等3种转录因子结合位点。双荧光素酶报告分析结果表明,RELA和NF-κB2的结合位点缺失后均使山羊MBL2基因的转录活性极显著下降(P<0.01)。结果提示,RELA和NF-κB2对山羊MBL2基因的转录活性可能具有重要的正调控作用。该研究为进一步探寻海南黑山羊MBL2基因的功能提供理论依据。

BRWD3缺失导致的X连锁智力障碍93型胎儿一例产前诊断及遗传学分析

目的:探讨双侧侧脑室增宽胎儿的产前遗传学病因及分子机制,为遗传咨询提供依据。方法:应用染色体核型G显带和微阵列比较基因组杂交(aCGH)技术分析双侧侧脑室增宽胎儿及其父母染色体核型和全基因组拷贝数变异,明确胎儿病因。结果:G显带核型分析结果显示胎儿及其父母染色体核型均未见异常。aCGH结果显示胎儿Xq21.1存在596678 bp缺失,包含部分单倍剂量效应基因BRWD3,该缺失为致病性拷贝数变异。家系验证结果显示该缺失遗传自胎儿母亲。家属最终选择终止妊娠。结论:Xq21.1微缺失导致的X连锁智力障碍93型可能是胎儿出现超声异常的原因,BRWD3是该区域的关键基因。

大气环境监测卫星校飞试验设计与验证

针对大气环境监测卫星上国际首次采用主被动结合探测体制的效能,在卫星研制初样阶段开展了多载荷综合探测航空校飞试验,验证了大气探测激光雷达(ACDL)探测性能以及双偏振载荷匹配探测原理,并为地面应用系统提供真实遥感数据源,验证数据处理方法的正确性。详细介绍了大气环境监测卫星校飞试验的总体设计方案,系统阐述了试验目的、系统构成、试验过程,对试验结果进行了详细分析,为卫星发射入轨后应用效能保证奠定了基础,同时为后续校飞试验积累了经验。

高光谱观测卫星高精时间同步方案设计与应用

为了满足星上高光谱相机、全谱段光谱成像仪、星敏感器等时间精度敏感仪器的高精度时间同步需求,高光谱观测卫星上设计了可适应多种精度需求的时间同步方案。对于系统时间,综合通过星地时差集中校时、均匀校时、GPS总线校时、GPS硬件秒脉冲校时等校时方法进行时间修正;对于终端用户,分别给出直接采用广播的进行本地时间修正的时间同步方法、采用广播及内部秒脉冲的时间同步方法、采用广播授时和不同秒脉冲校时方案的地面时间重建算法。利用在轨数据,对卫星星敏感器、全谱段光谱成像仪及可见短波红外高光谱相机的曝光时刻时间重建方法进行了应用说明,并对不同方法的时统误差进行了分析。

75 t/h循环流化床锅炉燃烧优化调整的试验研究

针对两台75 t/h循环流化床锅炉的燃烧工况进行优化调整,在空预器氧量标定和漏风测试诊断的基础上进行了试验研究,使锅炉运行工况得到了明显改善,提高了机组的安全性和经济性,为小型循环流化床锅炉燃烧的优化调整提供了借鉴。

星载二氧化碳探测研究进展

二氧化碳(CO_(2))是大气中最典型的温室气体,大气中CO_(2)浓度持续增加是全球气温升高的主要原因。温度升高导致自然环境恶劣,各类自然灾害频发,极端天气数量增加,对人类生活环境造成巨大的影响,因此推动绿色低碳发展势在必行。准确监测CO_(2)的排放,了解CO_(2)源和汇的分布,是遏制大气CO_(2)浓度升高、减缓全球变暖的前提条件。因此,准确获取全球范围内高精度时空分辨率的CO_(2)观测数据十分必要。卫星遥感可以有效观测CO_(2)的全球分布,获取大范围高精度数据。本文旨在对目前用于大气CO_(2)探测的卫星载荷发展状况进行综述,包括基于被动遥感CO_(2)的卫星现状和数据产品、基于主动遥感CO_(2)的卫星的研制情况和目前的主要工作进展。

羊源多杀性巴氏杆菌重组酶聚合酶扩增诊断方法的建立

为建立适用于羊源多杀性巴氏杆菌的重组酶聚合酶扩增(RPA)诊断方法,本研究依据前期测序鉴定的羊源多杀性巴氏杆菌KMT1基因序列构建pET-28a(+)-KMT1质粒标准品。设计基于RPA技术的特异性引物及RPA荧光探针,建立实时荧光RPA方法的最适反应体系。采用10倍梯度连续稀释的质粒标准品检测该RPA方法的敏感性并绘制相关性曲线;以10种不同菌株的基因组DNA为模板验证方法的特异性;用感染多杀性巴氏杆菌的山羊及小鼠组织样品对方法的可靠性进行验证。结果显示,本试验建立的实时荧光RPA方法最适反应温度为39℃,最佳引物为KMT1-Fe1,灵敏度达100拷贝/μL,检测下限为10拷贝/μL。与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、绿脓杆菌、产酸克雷伯菌、布鲁氏菌S2株和鲍曼不动杆菌均无交叉反应。对13个组织样本进行检测,阳性率为76.9%,与实时荧光定量PCR检测结果的符合率达92.3%。综上所述,本研究建立的羊源多杀性巴氏杆菌实时荧光RPA方法具有特异性强、灵敏度高、可靠、快速便捷等特点,适用于多杀性巴氏杆菌的临床分子诊断。

基于高效除雾器的燃煤电厂颗粒物超低排放

为了深入研究评估高效除雾器对于燃煤电厂颗粒物超低排放的影响,对某200 MW燃煤电厂加装高效除雾器前后脱硫塔出口的颗粒物排放浓度、粒径分布等进行测试。结果表明,加装高效除雾器前,脱硫塔出口颗粒物不能稳定实现超低排放达标。120 MW和200 MW负荷下,颗粒物排放浓度平均值为12 mg/m^3和18 mg/m^3。负荷越高,排放浓度越高;颗粒物粒径越小,排放的粒数浓度越高。加装高效除雾器后,150、180和200 MW三种不同负荷下均能实现稳定超低排放达标,排放浓度均值分别为3.25、2.24和1.82 mg/m^3,高效除雾器对PM_(10)的去除效率可达到90%。粒径分析表明,高效除雾器对细颗粒物PM_(0.1)的去除效果达90%。高效除雾器可作为湿式静电除尘器的替代,对燃煤电厂超低排放改造起关键作用。

羊源产酸克雷伯菌的分离鉴定及感染小鼠的转录组学研究

【目的】分离鉴定羊源产酸克雷伯菌,探讨产酸克雷伯菌对动物的致病机制。【方法】采集海南黑山羊肺脏组织样品进行细菌分离培养,通过生化试验及16S rRNA基因检测方法对分离株进行鉴定,并对分离菌进行药敏试验、小鼠致病性试验、RNA-Seq分析和差异表达基因(DEGs)分析。【结果】分离出1株革兰阴性短杆状细菌,胰蛋白胨大豆琼脂培养基上为光滑圆形的乳白色菌落。分离菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖等几种碳水化合物,靛基质试验阳性。16S rRNA基因检测结果显示,分离株与已公布序列的相似性>99%,鉴定该分离菌为产酸克雷伯菌,命名为KOHN1。药敏试验结果显示,分离菌KOHN1对青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素、羧苄青霉素、头孢氨苄、麦迪霉素、万古霉素和克林霉素具有耐药性,而对于其余21种抗菌药敏感。分离菌KOHN1攻毒小鼠后,肺脏组织病理学切片观察到小鼠肺部充血、水肿和渗出等急性炎症。DEGs富集分析显示,炎症细胞因子和趋化因子的DEGs在小鼠肺脏中大量表达。【结论】本试验成功分离出1株产酸克雷伯菌,分离株对小鼠致病性较强,免疫反应通路在病菌侵染过程中发挥着重要作用。该研究结果为后续产酸克雷伯菌的临床预防、诊疗及药物研发提供了参考依据。

绵羊CCL19基因启动子活性分析及其转录调控元件筛选

【目的】鉴定绵羊趋化因子C-C基序配体19(C-C motif chemokine ligand 19,CCL19)基因启动子的核心启动子区域和关键转录因子,探究该基因在转录调控方面的作用机制。【方法】选取绵羊CCL19基因5′-侧翼序列1000 bp,PCR扩增启动子的7个不同长度的截短片段,并连接至pGL3-Basic质粒;将重组质粒与pRL-TK质粒共转染到293T细胞中,结合双荧光素酶报告基因检测系统分析不同截短片段的相对荧光活性。利用在线预测软件分析和筛选CCL19基因核心启动子区域内的转录因子结合位点。采用定点突变技术构建转录因子结合位点缺失的荧光素酶报告载体,与pRL-TK质粒共转染到293T细胞,分析转录因子结合位点缺失质粒的相对荧光活性。【结果】成功构建了7个不同长度(pGL3-P、pGL3-P1、pGL3-P2、pGL3-P3、pGL3-P4、pGL3-P5及pGL3-P6)的CCL19基因启动子片段的荧光素酶报告载体;采用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定出转录起始位点上游-256/-186 bp为CCL19基因启动子核心启动子区域,表明该区域对CCL19基因转录调控有重要作用。生物信息学分析预测到该区域存在POU5F1(-201/-189 bp)、ZBTB26(-228/-217 bp)、FOXI1(-239/-228 bp)、GLI2(-255/-243 bp)和SP2(-219/-211 bp)5个转录因子的结合位点,并成功构建了转录因子结合位点缺失的荧光素酶报告载体。双荧光素酶报告基因检测系统分析显示,POU5F1转录因子的结合位点缺失后绵羊CCL19基因转录活性极显著降低(P<0.01),FOXI1、ZBTB26、SP2转录因子结合位点缺失后绵羊CCL19基因转录活性均极显著升高(P<0.01)。【结论】试验成功构建CCL19基因启动子荧光素酶报告载体,确定CCL19基因启动子的核心启动子区域为转录起始位点上游-256/-186 bp,并鉴定出转录因子POU5F1结合位点可能是CCL19基因转录的重要调控位点,为下一步研究绵羊CCL19基因在先天性免疫、适应性免疫和淋巴细胞迁移等方面的功能提供理论基础。

心房颤动患者冷冻球囊消融术后肺静脉狭窄的影响因素分析

目的:探讨心房颤动(房颤)患者冷冻球囊消融(CBA)术后肺静脉狭窄(PVS)的发生率及其影响因素。方法:连续入选2015年6月至2021年1月于中国医学科学院阜外医院首次行CBA且于术前和术后均接受了左心房肺静脉CT血管造影的患者129例。使用Carto3 V6系统测量肺静脉口部面积(APVO)。根据APVO减小率(ΔAPVO)分为轻度(25%~50%)、中度(50%~75%)和重度(≥75%)PVS。将ΔAPVO≥25%的患者分为PVS组(n=41),ΔAPVO<25%的患者分为非PVS组(n=88)。结果:129例患者的平均年龄(60.30±9.83)岁,其中男性98例(76.0%)。共有41例(31.8%)患者出现PVS(共60支),其中轻度PVS 52支(86.7%)。CBA术后,左上、左下、右上和右下肺静脉的APVO分别减小了(37.5±103.0)mm^(2)(P<0.01)、(37.3±93.7)mm^(2)(P<0.01)、(59.8±112.0)mm^(2)(P<0.01)和(38.3±87.0)mm^(2)(P<0.01)。多因素Logistic回归分析发现,术前APVO(OR=1.002,95%CI:1.001~1.007,P<0.05)和术中最低冷冻温度(OR=0.939,95%CI:0.748~0.987,P<0.05)与CBA术后各支肺静脉发生PVS独立相关。结论:房颤患者CBA术后PVS发生率较高,以轻度PVS为主。术前APVO较大和术中最低冷冻温度较低与PVS风险增加相关。

羊源D型多杀性巴氏杆菌感染小鼠脾脏转录组分析

试验旨在探索羊源D型多杀性巴氏杆菌入侵宿主脾脏组织中引发的免疫应答途径。首先利用羊源D型多杀性巴氏杆菌(HN01菌株)感染小鼠,建立羊源D型多杀性巴氏杆菌感染的动物模型;之后利用转录组测序技术获得感染小鼠与正常小鼠的脾脏转录组数据,并使用COG、KOG、eggNOG、GO、KEGG数据库对测序结果中的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行功能注释与分析,同时对于显著富集到关键免疫通路的差异表达基因使用STRING软件和KEGG mapper进行蛋白互作分析,筛选出核心通路中起关键作用的基因;最后选取关键的10个基因进行实时荧光定量RT-PCR验证。转录组分析结果显示,与正常组相比,感染组中筛选出3380个差异表达基因(P<0.01,log_(2)|FoldChange|≥0.5),其中1691个基因上调,1689个下调。基因功能富集分析结果表明,感染组脾脏中的差异表达基因主要发挥信号转导的功能,其主要参与的生物途径包括细胞因子与细胞因子受体互作通路、趋化因子信号通路、HIF-1信号通路、TNF信号通路。蛋白互作分析筛选出约28个核心差异表达基因,结合实时荧光定量RT-PCR验证后,其中9个基因的表达结果与测序一致,分别是C3、Cd4、Cxcl13、Lck、Gnai1、Grap2、IL-6、Cxcr6及Serping1基因。本研究初步证明了脾脏在抵抗多杀性巴氏杆菌入侵中参与了一系列免疫应答反应,为进一步研究羊源D型多杀性巴氏杆菌与宿主之间相互作用的分子机制奠定理论基础。

山苍子蛋白抗菌肽的抑菌特性及稳定性研究

山苍子作为我国木本油料资源,其渣粕的资源利用率较低。以脱脂山苍子粕为原料,利用超声波辅助碱溶酸沉法提取山苍子粕蛋白质,再进一步采用6种蛋白酶酶解、超滤离心分离、凝胶层析纯化制备山苍子蛋白抗菌肽,通过对指示菌抑菌活性的评价,确定最适蛋白酶,并对抗菌肽抑菌的广谱性和稳定性进行研究。结果表明,酸性蛋白酶酶解制备的山苍子蛋白抗菌肽对细菌和真菌均有抑制作用,浓度20 mg/mL时对大肠杆菌的抑菌率高达96.85%,比未分离纯化的水解物提高约2.5倍。山苍子蛋白抗菌肽在高温热处理、冻融、紫外线和不同pH下均表现出良好的稳定性,显示其在食品抑菌防腐领域中具有一定的应用价值。

南征应用“一则八法”干预消渴及并发症的治疗

随着经济的快速发展,人们生活水平大大提高,饮食结构发生重大变化。目前,在全球范围内,糖尿病的患病率和发病率急剧攀升,成为了除肿瘤及心血管疾病以外的又一大危害人体健康的疾病。南征教授认为,消渴及并证病理特点为本虚标实,确立了扶正祛邪、标本同治大法。南征教授具有多年的临床诊疗经验,提出必须采取正确的引导乃至治疗。并根据经验总结出“一则八法”,全程参与管控患者各方面情况,具有重要的指导和推广价值。

羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因的克隆及生物信息学分析

试验旨在克隆羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌HN07株ompW基因序列(登录号:CP007040.1),使用DNAMAN 5.0软件设计1对引物,选取高保真酶PrimeSTARMax DNA Polymerase进行PCR反应获取目的基因片段,并对ompW基因的核苷酸序列及预测的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明,PCR扩增产物约为615bp,编码204个氨基酸。核苷酸同源性比对分析显示,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源、牛源、禽源多杀性巴氏杆菌同源性较高,而与兔源同源性较低。系统进化树结果发现,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源多杀性巴氏杆菌ompW基因亲缘关系最近。经生物信息学分析发现,ompW蛋白分子式为C1007H1567N257O283S3,分子质量为21.90ku,理论等电点(pI)为9.16,属碱性蛋白质,疏水指数为96.57,总平均疏水性(GRAVY)为0.173(>0),属于疏水类蛋白;前21位氨基酸为信号肽,第5-27位氨基酸区域存在1个跨膜区,存在N-糖基化位点及磷酸化位点,不存在O-糖基化位点,具有多个B细胞、CTL细胞及Th细胞抗原表位;二级结构的α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占17.65%、35.29%、3.92%和43.14%;三级结构是呈β-桶状的单聚体,隶属于外膜蛋白家族成员之一。本研究结果为进一步阐明羊源多杀性巴氏杆菌侵染宿主过程中自身的抗宿主免疫胁迫机制及疫苗的开发与研制提供了理论依据。

面向有效载荷的准实时在轨健康评估系统

卫星遥测数据通常有2种手段获得,一种是卫星经过地面测控站下传的实时遥测和延时遥测;另一种手段是通过数传分系统下传的全球遥测。全球遥测作为监视卫星载荷健康状态的主要手段,存在数据量大、文件数量较多、人工处理和判读工作量大等问题。针对该情况,提出准实时在轨健康监视系统的设计方案。该系统具备遥测源码定时获取、有效载荷遥测数据提取和解析、遥测数据存储、遥测数据自动判读和特征统计、超限报警、曲线显示和数据输出等功能,可对卫星有效载荷的健康状态进行准实时、自动化的监视和评估。

汞氧化剂加入对燃煤电厂汞及卤素排放影响试验研究

为掌握燃煤电厂添加溴化物的脱汞规律以及对其它副产物的影响,在某600MW燃煤机组上开展掺烧溴化钙的应用研究,采用美国环保局(Environmental Protection Agency,EPA)30B方法对湿法脱硫系统(wet flue gas desulfurization,WFGD)前后烟气进行汞浓度及形态测试,并对相关副产物中的汞浓度进行分析。结果表明:溴化钙的加入,大幅提高了烟气汞氧化率、以及飞灰的汞富集因子,当溴/煤比为28.3mg/kg时,整体脱汞率可达到96.8%。通过EPA 26A方法对选择性催化还原脱硝(selective catalytic reduction,SCR)、静电除尘器(electrostatic precipitator,ESP)、WFGD前后烟气进行卤素浓度及形态测试,发现溴化钙的添加,并不会导致卤素排放增加,烟气中的溴均以HBr的形式存在,而HBr极易溶于水,脱硫后均未检出溴排放。对产物的浸出毒性和热稳定性试验结果表明,溴化钙添加后对飞灰、石膏等副产品的浸出毒性,以及石膏中汞的热稳定性都没有明显影响,但提高了飞灰中汞的热稳定性。此外,该文还对烟气汞浓度测试方法、飞灰中溴浓度测试方法进行分析,并结合试验结果推测主要的反应路径。综合来看,汞氧化剂添加技术能够提升电站整体脱汞效率,并且未发现明显负面影响。