β-葡聚糖酶高产菌株诱变选育

以木霉(Trichoderma sp.)为出发菌株,通过紫外诱变与光复活交替处理获得了1株高产β-葡聚糖酶突变株UN123。该菌株在摇瓶中的平均酶活大于10000 U/mL,最适反应温度是40℃,90℃条件下保温处理2 h,仍能保持80%以上酶活,最适反应pH是3.0,在pH 2.0~7.0的条件下处理2 h后,相对酶活力保持在80%以上且对胃蛋白酶、胰蛋白酶及凝乳蛋白酶具有良好的耐受性。

复合诱变筛选提高花生粕中AFB1降解率的菌株

选用产葡萄糖氧化酶(GOD)的黑曲霉菌株H-01为诱变出发菌株,经ARTP-NTG复合诱变后,筛选出1株酶活力提高46%的突变株HAN-40。在酶解条件:温度40℃,料液质量体积比1∶5,GOD添加量5 U/g,酶解时间24 h,突变株HAN-40较原始菌株所产GOD对花生粕中AFB1降解率提高了35%,达到92%。

人源WNT16 HEK 293T稳转细胞株构建、蛋白纯化与活性检测方法研究

目的无翅型MMTV整合位点家族成员16(WNT16)是一种重要的信号调节蛋白,参与多种细胞生物学过程的调控。本研究旨在构建稳定转染WNT16基因的HEK 293T细胞株,并利用多聚赖氨酸标签(HIS-Tag)实现高效纯化WNT16蛋白。方法使用TK-PCDH-copGFP-T2A-Puro载体,将WNT16 CDS-HIS序列通过XbaI和BamHI位点连接载体,构建慢病毒载体质粒;将该质粒与pSPAX2和pMD2.G一起共转染HEK 293T细胞,制备携带WNT16基因的慢病毒;利用慢病毒感染HEK 293T细胞,并通过嘌呤霉素筛选和Western Blot鉴定稳定过表达WNT16的细胞株;利用镍螯合琼脂糖凝胶与HIS标签的高亲和性纯化WNT16蛋白,使用考马斯亮蓝染色和Western Blot法检测纯化效果;用纯化的WNT16蛋白刺激Jurkat细胞,使用Western Blot法检测Jurkat细胞中β-catenin信号通路蛋白的水平,以评估WNT16蛋白的活性。结果成功构建过表达WNT16基因的慢病毒表达载体,并用其感染HEK 293T细胞。经过嘌呤霉素筛选和Western Blot鉴定,我们获得了稳定表达WNT16的HEK 293T细胞株。使用HIS标签成功纯化了WNT16蛋白,并用考马斯亮蓝染色和Western Blot法检测了纯化效果。最后,我们用纯化的WNT16蛋白刺激Jurkat细胞,并用Western Blot法检测了Jurkat细胞中β-catenin信号通路蛋白的水平,WNT16蛋白能够显著增加Jurkat细胞中β-catenin蛋白的表达,表明纯化的WNT16蛋白具有激活WNT/β-catenin通路的生物学活性。结论本研究成功实现了WNT16蛋白的高效表达和纯化,并初步研究了其功能。这为进一步探究WNT16在细胞生物学中的作用提供了重要的实验基础。

智慧智能技术在自身抗体检测中的应用

自身抗体对于自身免疫性疾病的诊断、治疗及预后判断具有重要意义。但目前自身抗体检测自动化程度较低,操作时间长,人工判读结果主观性较强,结果互认存在一定难度。针对上述问题,该文将论述智慧智能技术应用于自身抗体检测的前、中、后分析过程。包括标本的采集、运输、签收、检测、结果审核、报告解释,到远程监控及智能外呼通报等过程。在整个检测流程中科学运用相关智能技术,有效解决现有自身抗体检测过程中存在的局限性。该文对人工智能技术和物联网技术、自动化技术等智慧智能技术应用于自身抗体检测的全流程进行论述,并对智慧智能技术在未来自身抗体检测应用场景进行展望。

超氧化物歧化酶SOD及模拟物的研究现状和应用

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是生物体有效清除活性氧的主要酶类之一,属于抗氧化酶类,是抗氧化系统的第一道防线,多位于生物体细胞的细胞质、线粒体以及叶绿体中。本文综述了超氧化物歧化酶(SOD)的发现、分类分布、作用机理、分子结构与功能、应用(农业、工业)等的研究进展,并展望了其发展趋势。

均匀设计优化提高羽毛粉消化率的研究

为提高羽毛粉的消化率,本试验以白鸡毛为原料,采用均匀设计试验优化羽毛粉加工工艺。研究结果显示,优化后的羽毛粉酶解工艺为:反应pH 7.5,反应温度46℃,碱性蛋白酶添加量0.9%,脂肪酶添加量0.3%,酶解时间3.5 h,在此工艺下处理得到的酶解羽毛粉呈淡黄色,颗粒细腻均匀且无腥味。羽毛粉中可溶性蛋白质含量为157.35 mg/g,胃蛋白酶消化率为90.07%,小于5000 Da的多肽占比达92.42%。

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化

选用玉米粉、豆饼粉、KH_2PO_4及Na_2HPO_4为基础配方,通过单因素实验对枯草芽孢杆菌发酵产中性蛋白酶的发酵培养基、培养条件、发酵条件进行优化。确定了优化的发酵培养基为:20g·L^(-1)甘油,30g·L^(-1)豆饼粉,2mmol·L^(-1)氯化钙,0.3g·L^(-1 )KH_2PO_4,4g·L^(-1 )Na_2HPO_4;优化的培养条件为:培养温度30℃,接种量5%。调控发酵培养基pH值7.0控制发酵,发酵24h酶活达到7 344U·mL^(-1)。进行流加甘油实验,培养温度30℃,发酵过程控制pH值7.0,调整转速和通风量控制溶氧30%～35%,接种量5%,经过30h发酵,酶活达到10 654U·mL^(-1),较未补料提高了45%。

耐热植酸酶的实验室评估方法

本研究旨在研究实验室评估耐热植酸酶的方法。以市场销售量比较大的7种植酸酶为研究对象,分别模拟其在胃肠消化液中的酶活留存率,水浴法模拟高温制粒过程中的酶活留存率等指标来评判耐热植酸酶的优劣;同时在仿生条件下分析耐热植酸酶酶解豆粕的效果。各耐热植酸酶用水浴法(3 min 90℃)后测得留存酶活和生产实际85℃调制制粒的留存酶活基本一致,差异不显著(P>0.05),故用水浴法(3 min 90℃)评估生产实际调制制粒后的耐热植酸酶的酶活留存率是可行的。依据模拟消化系统实验室评价为饲用耐热植酸酶的有效性提供方法及参考指标,并为生产实践中耐热植酸酶的使用提供数据支撑。

酶制剂在水产养殖中的应用

(简要介绍综述对象)酶制剂作为安全、高效、环保、绿色的一类饲料添加剂,在水产养殖中已得到应用。(简述本文的内容要点)使得水环境友好,提高饲料的利用率,并开发新的饲料资源,不断提高单位水面养殖效率,是渔业发展所面临的重大挑战。酶制剂不仅可以在一定程度上提高饲料营养素的利用效率和缓解饲料资源的不足,还可以促进绿色养殖环境的发展。本文综述了酶制剂在水产养殖中的应用现状,并展望了酶制剂在水产养殖中的应用前景,以期为酶制剂的应用提供参考依据。

外源酶制剂在反刍动物营养中的应用和作用机理

酶制剂是一种新型绿色饲料添加剂,对促进动物饲料消化、调节体内代谢平衡、提高养分降解率、保护生态环境、疾病预防和促进动物健康等方面有着重要作用。本文主要从酶制剂对反刍动物瘤胃发酵、营养物质消化率、生产性能的影响以及酶制剂作用机理等方面进行了综述,旨在为反刍动物饲粮中酶制剂的使用提供科学依据。

产碱性β-甘露聚糖酶重组毕赤酵母发酵条件优化及酶学特性研究

本研究通过对本公司一株表达β-甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌LD023,对其发酵条件和酶学特性进行研究,根据研究结果,其发酵诱导阶段最适pH为5.5、最适移种量为10%、最适碳源为甘油、最适诱导阶段前菌体湿重为220g/L,而该酶的最适反应pH范围为9.5~10.5、最适反应温度范围为45~50℃,并且具有良好的热稳定性。

可逆抑制剂对发酵生产洗涤用蛋白酶的影响

在微生物发酵生产蛋白酶过程中添加可逆抑制剂,通过抑制发酵液中蛋白酶活性,减少蛋白酶自身水解,提高储存稳定性。结果表明,可逆抑制剂的最佳添加方式为在发酵过程中连续流加,流加量为抑制蛋白酶活性40%最佳,最佳条件下蛋白酶产量提高49.1%。抑制剂的添加,不影响蛋白酶的提取,提取时发酵液中的可逆抑制剂可以通过超滤法减少或者去除,在正常含抑制剂条件下,蛋白酶室温储存90 d,酶活仍保持100%。

β-甘露聚糖酶生产菌筛选及酶学特性

以黑曲霉(Aspergillus niger)HQM-2为出发菌株,通过亚硝基胍(NTG)诱变获得了一株高产0-甘露聚糖酶突变株HNTG322。该黑曲霉突变株HNTG322在摇瓶中的β-甘露聚糖酶酶活〉2500U/mL,且传代发酵稳定性良好。所产β-甘露聚糖酶对胃蛋白酶和胰蛋白酶具有良好的耐受性;且该酶耐酸耐热性良好,在pH2.0-7.0条件下处理2h或90℃保温处理2h后,相对酶活>80%。

ARTP-UV复合诱变选育高产木聚糖酶菌株

以黑曲霉G-1为出发菌株,通过常温常压等离子体(ARTP)和紫外线(UV)复合诱变技术,筛选到1株酶活提高明显的菌株GAU10-18。经过多次摇瓶复筛验证,其遗传性质稳定,酶活提高明显,摇瓶发酵酶活达到25000 U/mL,较出发菌株提高95%左右。另外,该菌株所产的酸性木聚糖酶具有良好的耐热、耐酸性,在较低温度仍具有很高的酶活性。

UV-NTG复合诱变选育高产糖化酶菌株

以黑曲霉H-08为出发菌株,通过紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)复合诱变技术,筛选到1株酶活力提高明显的菌株UN3-36。经过多次复筛验证,证明其遗传性质稳定,酶活力显著提高,摇瓶的发酵酶活力可以达到19200 U/m L,较出发菌株提高了90%左右。

适用于饲料行业的产酸性纤维素酶的黑曲霉诱变菌株

针对饲料工业对纤维素酶酶学特性的特殊要求,为得到一株适用于饲料工业且高产酸性纤维素酶的黑曲霉菌种。用0.1%浓度的硫酸二乙酯对一株产酸性纤维素酶的黑曲霉菌种诱变15min,经诱变筛选培养基上透明圈大小的初筛,再将初筛得到的诱变种子,经种子斜面培养基分离活化,摇瓶种子培养基扩培,摇瓶筛选培养基培养后,测定摇瓶发酵液的酶活,复筛高产菌株,最终得到一株酶活水平最高的黑曲霉诱变菌株YB-5628。对该菌株进行种子斜面培养基分离活化,摇瓶种子培养基扩培,种子罐培养基扩培,发酵罐培养基发酵,测定发酵罐最高酶活水平为2062U/mL,较出发菌株提高了1.2倍。对发酵所得的酸性纤维素酶进行酶学特性研究,该诱变菌株所产酸性纤维素酶,在40℃-65℃范围内保持80%以上的酶活。在pH3.8-4.8范围内,能保持80%以上的酶活。该酶学特性符合饲料酶制剂的要求,高发酵酶活水平可使发酵成本进一步降低,能广泛的应用于畜牧及食品行业,提高这些行业的产品竞争力,促进高效绿色的可持续发展。

碱性脂肪酶在洗涤剂中复配的作用研究

研究碱性脂肪酶与常见洗涤剂中主要有效作用成分(表面活性剂、助剂和碱性蛋白酶)复配后,新酶系的酶活力与去污白度的影响。结果表明碱性脂肪酶与其均有较好的相容性,为碱性脂肪酶在洗涤剂中的具体应用提供了一定理论基础。

一株高产木聚糖酶菌株的诱变筛选

以米曲霉(Aspergillus oryzae)HF-201为出发菌株,通过亚硝基胍(NTG)诱变筛选出一株酶活提高的菌株NTG13-86,该米曲霉突变菌株NTG13-86在摇瓶中的酶活达到3500U/ml。再对该菌株进行常温常压等离子体(ARTP)复合诱变,结合抗高浓度葡萄糖阻遏效应,最终筛选出一株抗2-脱氧-D-葡萄糖的高产突变株GAR3-107,该菌株酶活达到5200u/ml,比出发菌株HF-201提高了1.3倍,且传代稳定性较好。

解淀粉芽抱杆菌产碱性蛋白酶发酵条件的优化

通过单因素试验对解淀粉芽孢杆菌菌株发酵产碱性蛋白酶的培养基组分及培养条件进行优化。利用单因素实验确定了产酶的最优培养基:玉米淀粉30g/L,棉籽蛋白粉70g/L,氯化钙3.89g/L,硫酸镁4.21g/L,磷酸氢二钠85.18g/L,磷酸二氢钾81.65g/L;同时对控制工艺进行优化,得到最优发酵条件:接种量4%,温度38T,pH控制7.3,罐压0.05Mpa,通过调整转速和风量,使溶氧水平维持在10%-20%。采用连续补料的方式,补麦芽糖浆控制发酵液的还原糖含量在20g/100g左右;优化后的补料培养基配方为:40%浓度的麦芽糖浆。发酵产酶周期:100h左右。经过上述一系列的优化后,最终酶活达到65200U/mL,较初始配方酶活15680U/mL提高了3.16倍。

葡萄糖氧化酶菌株的诱变筛选及酶学特性

以黑曲霉(Aspergillus niger)HG为出发菌株,通过常温常压等离子体(ARTP)诱变筛选出一株酶活提高的菌株RW8-23,该黑曲霉突变菌株RW8-23在摇瓶中的酶活>210U/mL,比出发菌株HG提高了1.6倍,且传代稳定性较好。所产葡萄糖氧化酶对过氧化氢有良好的耐受性,在过氧化氢浓度为150mmol/L条件下相对酶活为95%;该酶的最适作用温度为35℃,在20~40℃范围酶活较稳定。